Summary
이 연구 보고 안경 돋보기와 진공 추출 튜브 시스템을 사용 하 여 쥐에서 꼬리 정 맥에서 혈액 샘플링 합니다. 우리의 방법은 연습을 쉽게 이며 쥐에 반복 혈액 샘플링에 사용 될 수 있었다.
Abstract
혈액 샘플 컬렉션은 실험 동물 연구의 기초입니다. 그것은 다양 한 연구 목적에 대 한 적절 한 혈액 샘플을 얻기 위해 중요 합니다. 쥐의 꼬리 정 맥은 작은, 그리고 그것이 때로는 기존의 펑크 메서드에서 필요한 혈액 볼륨을 얻기 어렵다. 이 연구 조사는 진공 혈액 수집 시스템 및 안경 돋보기 (실험 그룹) 기존의 혈액 샘플링 방법 (기존의 그룹)에 비해의 사용을 통해 쥐의 꼬리 정 맥에서 반복 된 혈액 샘플 컬렉션의 우수성 각각 초보자와 전문가 의해 수행. 안경 돋보기의 도움으로, 나비 바늘 팁 실험적인 그룹에 있는 각 마우스의 꼬리 정 맥에 삽입 됩니다. 정 맥은 성공적으로 침투 하 고 때 혈액 샘플은 진공 혈액 컬렉션 튜브에 나비 바늘의 고무 끝의 삽입에 의해 진공 컬렉션 튜브에 수집 됩니다. 플런저 다음 기존의 그룹에 안경 돋보기의 도움 없이 혈액을 수집 하는 데 사용 됩니다. 초보자와 전문가 의해 혈액 샘플 컬렉션의 성공률 100% (p < 0.01) 대 70% 실험 그룹과 기존 그룹에서 85% (p < 0.01) 35%에서 보였다. 초보자와 전문가 모두에 대 한 펑크 시간 필요한 혈액 샘플을 얻기 위해 필요한 실험 그룹 (2.40 ± 0.75 2.90 ± 0.31 대, p < 0.05; 1.15 ± 0.37 1.55 ± 0.76, p < 0.05 대) 전통적인 그룹에 비해 훨씬 낮은 했다. 결론적으로, 제시 혈액 샘플링 기법 가능 하 고 연습을 쉽게 이며 비 취 쥐에서 적절 한 혈액 볼륨의 자주 샘플링을 가능 하 게.
Introduction
동물 실험에 관련 된에서 혈액 샘플링 기초 연구 기술입니다. 사용할 수 있는 몇 가지 기술이 있다 쥐에서 혈, 꼬리 자르는 등 및 심장, 역 궤도 총, 경 정 맥, 꼬리 정 맥, 그리고 베 나 정 맥의 puncturing. 이상적으로, 혈액 동물의 건강에 미치는 영향을 최소화와 최소 침 습 방식으로 수집 한다. 그러나, 가장 일반적으로 사용 되는 기술을 종종 동물에 스트레스를가 하 고 연구 결과1에 영향을 줄 수 있습니다. 복고풍 궤도 총에서 혈 쥐2에서 충분 한 혈액 량을 얻기 위해 사용할 수 있습니다. 그러나, 그것은 심각한 조직 손상 될 수 있습니다 하 고 짧은 시간 간격3에서 반복 해 서 혈액을 얻기 위해 허용 하지 않습니다.
꼬리 정 맥 행 쥐 시 최소한의 부상 혈액 컬렉션에 대 한 우수한 위치 이다. 그러나, 쥐의 꼬리 정 맥은 얇은, 그리고 그것이 때로는 기존의 펑크 기술을 통해 충분 한 혈액을 얻기 어렵다. 경우에 따라 반복된 자국 원하는 혈액 볼륨을 얻기 위해 필요 합니다. 마 취는 또한 일반적으로 쥐의 꼬리 정 맥에서 혈액 샘플링을 촉진 하기 위하여 권장 됩니다. 또한, 메스, 똑 바른 가장자리 면도기, 또는 날카로운가 위 필요한 혈액 샘플4를 꼬리의 끝을 제거 하려면 필요할 수 있습니다. 우리 혈액 오염의 위험을 감소 하 고 반복된 구멍5에 대 한 필요성을 피할 수 있는 진공 혈액 샘플 수집 시스템에 의해 이전 비 anaesthetized 쥐의 꼬리 정 맥에서 성공적인 혈액 컬렉션을 보고 있다. 이 연구는 비 취 쥐에 있는 유사한 혈액 수집 방법을 보고합니다.
Protocol
1입니다. 축산
- 12 주 오래 된 쿤밍 마우스를 사용 합니다.
참고: 우리가 사용 하는 마우스 (n = 40, 20 남성, 37-46 g 의미 42.38 ± 2.39 g) 실험 동물 센터 Tongji 의학 대학에서. - 식품 및 식 수와 표준 조건 하에서 쥐를 집. 계속 나무 면도을 530 cm2 장에 두 마우스 침구.
- 21-23 °C 사이 실내 온도 유지
- 일반 소금 다이어트로 쥐를 피드 (0.3 %NaCl) 연구를 통해.
2. 혈액 샘플 컬렉션
- 다음 장비 준비: 진공 튜브 (1 mL), 나비 바늘, 돋보기 안경, 그리고 플라스틱 금지 홀더. 멸 균 표면 (그림 1)에 넣어.
- 플라스틱 금지 홀더에 마우스를 놓고 따뜻한 물 (20-30 °C)로 꼬리를 세척 합니다. 70% 에탄올 포화 면봉 정 맥을 확장 하는 꼬리를 닦아냅니다. 오른쪽 또는 왼쪽 꼬리 정 맥 혈액 샘플링을 선택 합니다. 부드럽게 꼬리의 아래 부분을 파악 하 고 혈액 샘플 컬렉션 중에 바로 꼬리를 계속.
- 혈액을 수집 합니다. 두 그룹에서 혈액을 수집 하는 방법, 비교 하는 경우: "실험적인" 그룹 개발 했습니다, 아래 절차를 사용 하 여 및 "전통적인" 그룹 아래 제시 또한 전통적인 방법을 사용 하 여.
- 실험적 컬렉션:
- 꼬리 정 맥의 펑크에 대 한 보기를 개선 하기 위해 안경 돋보기를 착용. 22 G 나비 바늘 팁 하나는 천사 약 10°, 꼬리의 기지에 쪽으로 이동 하는 여러 개의 샘플에 대 한 꼬리의 위치 distally 끝에서에서 약 절반 거리에 측면 꼬리 정 맥에 삽입 합니다.
- 진공 혈액 컬렉션 튜브를 수집 혈액 (그림 2)에 나비 바늘의 고무 끝을 삽입 합니다.
참고: 경우에 혈액 혈액 수집 하는 동안 밖으로 흐르는 중지, 바늘 각도 수 신속 하 게 조정 한다. 바늘에 혈액 응고를 방지 하려면 다른 빵 꾸 위치를 선택 해야 합니다 15 후 밖으로 흐르는 혈액 중지 하는 경우 s.
- 전통적인 방법:
- 연결 된 주사기에는 거리의 측면 혈관 약 1 / 3의 하나로 distally 꼬리의 끝에서 바늘을 삽입 합니다.
- 피는 허브에 표시 하는 때, 혈액 (그림 3)7수집을 천천히 플런저를 후퇴.
참고: 추가 혈액 컬렉션으로 다양 한 경험의 효과 명료 하 게, 하는 초보자와 전문가 선정 됐다 실험 및 전통적인 방법을 사용 하 여 동시에 혈액 샘플을 수집 하.
- 실험적 컬렉션:
- 혈액 수집 후 바늘을 제거 하 고 출혈을 막으려고 펑크 포인트를 누릅니다. 다음, 플라스틱 금지 홀더에서 마우스를 해제 하 고 그것의 감 금 소를 마우스를 반환 합니다.
참고: 그것은 알려졌다는 최대 총 혈액의 10% 볼륨 수 안전 하 게 2 주 간격으로8에서 건강 한 동물에서 제거, 그래서 약 175 µ L 혈액의 윤리적 원칙에 따라 각 시간 수집 된. - EDTA와 튜브를 사용 하 여 플라즈마를 수집 하 여 응고 하지 않고 튜브를 사용 하 여 혈 청을 수집. 부드럽게 여러 번 튜브를 반전 하 고 수직으로 얼음에 넣어.
- 혈액 샘플 컬렉션 튜브 플라스마와 혈 청을 10 분 1000 x g에서 냉장된 원심 분리기에 원심
참고: 성공적인 혈액 컬렉션 얻기 175 µ L의 각 시간으로 정의 됩니다. 3 개 이상 구멍을 시도해 야 하 고 실패 한 혈 세 번째 찔린 후 총 혈액 양의 미만 175 µ L로 정의 됩니다. 샘플링 기간 후 혈액 컬렉션 바늘의 제거를 꼬리 정 맥 빵 꾸에서 시간으로 정의 됩니다. - 두 번 간격 2 주8의 혈액을 수집 합니다.
3. 통계 분석
- 상업적으로 이용 가능한 통계 소프트웨어를 사용 하 여 분석을 위해. 사용 하 여 p < 0.05 컷오프 통계적 의미에 대 한 평균값이 ± 표준 편차로 데이터를 제시.
Representative Results
신체 질량, 혈액 컬렉션 볼륨, 및 두 그룹의 샘플링 기간
혈액 샘플은 각 그룹에서 2 주 간격 두 번 20 쥐 (10 컷)에서 수집 했다. 쥐의 평균 몸 질량 각각 초보자를 위한 실험 및 기존 단체와 전문가 사이 유사 했다 (42.40 g ± 42.65 g ± 1.14 g 대 1.42 g, p > 0.05; 42.55 g ± 2.91 g 대 43.20 g ± 2.69 g p > 0.05). 수집 된 혈액 볼륨 및 샘플링 기간 전문가 (171.75 µ L ± 25.61 µ L, p > 0.05 대 184.25 µ L 11.95 ± µ L, 1.85 분 ± 2.17 분 ± 0.80 분, p > 0.05 대 0.68 분)에 두 그룹 사이 유사 했다. 그러나, 더 높은 수집된 혈액 볼륨 및 더 짧은 샘플링 기간 초보자 (148.50 µ L ± 30.22 µ L, p < 0.01 대 172.00 µ L ± 15.17 µ L, 3.11 분 ± 4.08 분 ± 0.61 분, p < 0.01 대 0.44 분)에서 전통적인 그룹에 비해 실험적인 그룹에서 보였다. 초보자에 비해, 전문가 들은 더 높은 혈액 볼륨 수집과 낮은 샘플링 (184.25 µ L 11.95 ± µ L 172.00 µ L ± 15.17 µ L, p < 0.01 대 148.50 µ L ± 30.22 µ L, p < 0.05 대 171.75 µ L ± 25.61 µ L, 1.85 분 ± 0.68 실험 하 고 기존의 방법을 사용 하 여 시간을 보여주었다 3.11 분 ± 0.44 분, p < 0.01; 대 분 2.17 분 ± 4.08 분 ± 0.61 분, p < 0.05 대 0.80 분) (표 1).
두 그룹의 펑크 시간과 성공률
초보자와 전문가 사이 성공률의 비교에서에서 100% (20/20) (p < 0.01) 실험적인 그룹 및 35% 대 70% (14/20) 했다 (7/20) 85% (17/20) (p < 0.01) 전통적인 그룹에 대. 높은 성공률 또한 초보자에서 전통적인 그룹에 비해 실험적인 그룹에서 보인 [35% 대 70% (14/20) (7/20), p < 0.05]. 초보자와 전문가 모두에 구멍의 수 실험 그룹 (2.40 ± 0.75 2.90 ± 0.31 대, p < 0.05; 1.15 ± 0.37 1.55 ± 0.76, p < 0.05 대) 전통적인 그룹에 비해 훨씬 낮은 했다. 초보자에 비해, 전문가 대 한 낮은 펑크 시간 실험 하 고 기존의 방법을 사용 하 여 관찰 되었다. (1.15 ± 0.37 2.40 ± 0.75 대, p < 0.01; 2.90 ± 0.31, p < 0.01 대 1.55 ± 0.76) (표 1)입니다.
그림 1: 장비. 1 mL 진공 혈액 컬렉션 튜브와 22 G 나비 바늘 (왼쪽), 안경 돋보기 (중간), 그리고 플라스틱 금지 홀더 (오른쪽)은입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: 실험 그룹에서 성공적인 혈. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: 기존 그룹에 성공적인 혈. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
| 실험 그룹 | 기존 그룹 | |||
| 초급 | 전문가 | 초급 | 전문가 | |
| 신체 질량 (g) | 42.4±1.42 | 42.55±2.91 | 42.65±1.14 | 43.20±2.69 |
| 수집 된 혈액 볼륨 (µ L) | 172.00±15.17 | 184.25±11.95# | 148.50±30.22* | 171.75±25.61# |
| 샘플링 기간 (분) | 3.11±0.44 | 1.85±0.68# | 4.08±0.61* | 2.17±0.80# |
| 혈액 컬렉션 시간 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| 구멍의 평균 수 | 2.40±0.75 | 1.15±0.37# | 2.90±0.31* | 1.55±0.76# # * |
| 한 번 빵 꾸 | 3 | 17 | 0 | 12 |
| 두 번 펑크 | 6 | 3 | 2 | 5 |
| 세 번 펑크 | 5 | 0 | 5 | 0 |
| 실패 | 6 | 0 | 13 | 3 |
| 성공률 | 70% | 100%# | 35%* | 85%# |
표 1: 실험과 기존 그룹 사이 결과의 비교. * p < 0.05 * * p < 0.01, 종래의 방법 대 실험 방법. #p < 0.05, ##p < 0.01, 초급 전문가 대.
Discussion
현재 연구는 배우기 쉬운 혈액 수집 방법을 마우스에서 기존의 기술에 우수 하는 설명 합니다. 첫째, 메서드 높은 성공율 쉽게 장악 될 수 있습니다. 둘째, 그것 진공 부정 압력 원리에 기반 하 고 또한 오염 및 용 혈9의 기회를 감소 시키는 직접 혈액 노출의 위험을 감소와 혈액의 연속 그림에 대 한 있습니다. 셋째,이 메서드는 다양 한 연구 목적을 위해 짧은 기간 동안 쥐에서 적절 한 볼륨으로 혈액의 자주 샘플링 가능. 또한, 절차 inflicts 마우스에만 최소한의 부상 그리고 혈액 컬렉션; 마 취약의 사용 없이 실행 될 수 있습니다. 따라서, 혈액 샘플에는 스트레스 반응 및 마 취약의 영향을 피할 수 있습니다.
꼬리 정 맥에 따라 승인 된 프로토콜7혈액 샘플링에 대 한 우수한 위치 이다. 그러나, 그것은 항상 쉽지 않다를 낮은 혈액 흐름으로 얇은 꼬리 정 맥에서 충분 한 혈액 볼륨. 이 경우에, 피부는 일반적으로 자르면 정 맥, 랜 싯에 의해 침투 또는 꼬리의 끝에 면도칼으로 신속 하 게 제거 됩니다.
이 프로토콜 진공 혈액 샘플 컬렉션 튜브, 나비 바늘, 그리고 안경 돋보기를 필요로 하는 진공 혈액 수집 시스템을 사용 하 여 쥐에서 혈액 컬렉션의 방법론을 개선 하는 것을 목표로. 이 진공 혈액 샘플링 시스템으로 매일 임상 연습10환자에서 혈액 샘플을 수집 하기 위해 사용 됩니다. 안경 돋보기의 도움으로 꼬리 정 맥의 완벽 한 펑크 포인트 찾을 수 쉽습니다. 바늘의 팁을 꼬리 정 맥에 삽입 하는 경우 혈액 부정적인 압력 진공 튜브로 자동으로 흐르게 됩니다. 바늘을 꼬리 정 맥에서 철수, 후 카 테 터에서 차단 된 혈액 수집 진공 튜브 진공 때문에 흐름 것입니다.
다음 팁은 방법의 성공적인 응용 프로그램에 대 한 중요 합니다. 첫째, 각 마우스의 몸 무게 40 g 해야 이상 감소 puncturing에 충분 한 혈액을 얻기 어려움. 둘째, 실패 한 혈의 경험 혈액을 밖으로 계속 될 때까지 천천히 바늘을 철회 하려고 한다. 셋째, 혈액 샘플링 하는 동안 어떤 움직임을 피하기 위해 꼬리를 확장 하는 생명 이다. 바늘을 부드럽게 잡고 마우스 꼬리 움직임으로 정 맥에 바늘 팁을 유지 시킬 수 있습니다. 넷째, 혈액 혈액 수집 하는 동안 밖으로 흐르는 중지, 바늘 각도 적시에 조정 되어야 한다. 바늘에 혈액 응고를 방지 하기 위해 다른 빵 꾸 위치를 선택 해야 합니다 15 후 밖으로 흐르는 혈액 중지 하는 경우 s. 마지막으로,이 기법을 사용 하 여 쥐에서 혈액을 수집 하는 동안 두 사업자의 협력을 권장 합니다.
즉, 마우스에 사용 하기 위해 채택 된 진공 혈액 수집 방법, 가능 하 고, 안전 하 고 쉽게 연습입니다. 이 메서드는 적절 한 혈액 볼륨 비 취 쥐에서 혈액의 자주 샘플링을 수 있습니다.
Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 지원 [보조금 번호 2018CFB761] 후베이 성, 중국의 자연 과학 재단 부여에 의해.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
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