Summary
Dit protocol beschrijft een eenvoudige en efficiënte methode voor de identificatie van 2,4-dibroomfenolmetabolieten in planten.
Abstract
Gewassen kunnen op grote schaal worden blootgesteld aan organische verontreinigende stoffen, omdat de bodem een belangrijke put is voor verontreinigende stoffen die in het milieu worden weggegooid. Dit creëert potentiële blootstelling van de mens door de consumptie van verontreinigende voedingsmiddelen. Het ophelderen van de opname en het metabolisme van xenobiotica in gewassen is essentieel voor de beoordeling van het blootstellingsrisico via de voeding bij de mens. Voor dergelijke experimenten vereist het gebruik van intacte planten echter langetermijnexperimenten en complexe monstervoorbereidingsprotocollen die door verschillende factoren kunnen worden beïnvloed. Planteneeltculturen in combinatie met hoge-resolutie massaspectrometrie (HRMS) kunnen een oplossing bieden voor de nauwkeurige en tijdbesparende identificatie van metabolieten van xenobiotica in planten, omdat het interferentie van de microbiële of schimmelmicro-omgeving kan voorkomen, de behandelingsduur kan verkorten en het matrixeffect van intacte planten kan vereenvoudigen. 2,4-dibroomfenol, een typische vlamvertrager en hormoonontregelaar, werd als modelstof gekozen vanwege het wijdverbreide voorkomen ervan in de bodem en het opnamepotentieel ervan door planten. Hierin werd planteelt gegenereerd uit asepsiszaden en blootgesteld aan steriel 2,4-dibroomfenolbevattend cultuurmedium. De resultaten toonden aan dat acht metabolieten van 2,4-dibroomfenol werden geïdentificeerd in de eeltweefsels van de plant na 120 uur incubatie. Dit geeft aan dat 2,4-dibroomfenol snel werd gemetaboliseerd in de eeltweefsels van de plant. Het platform voor planteneelkweek is dus een effectieve methode om de opname en het metabolisme van xenobiotica in planten te evalueren.
Introduction
Een toenemend aantal organische verontreinigende stoffen is in het milieu gegooid als gevolg van antropogene activiteiten1,2, en de bodem wordt beschouwd als een belangrijke put voor deze verontreinigingen 3,4. De verontreinigingen in de bodem kunnen door planten worden opgenomen en mogelijk worden overgedragen op organismen op een hoger trofisch niveau langs voedselketens, door rechtstreeks het menselijk lichaam binnen te dringen via gewasconsumptie, wat leidt tot onbedoelde blootstelling 5,6. Planten gebruiken verschillende routes om xenobiotica te metaboliseren voor ontgifting7; Het ophelderen van het metabolisme van xenobiotica is belangrijk, omdat het het feitelijke lot van verontreinigingen in planten beheerst. Aangezien de metabolieten door bladeren (naar de atmosfeer) of de wortels kunnen worden uitgescheiden, biedt het bepalen van de metabolieten in de zeer vroege stadia van blootstelling dus de mogelijkheid om een uitgebreid aantal metabolieten te testen8. Studies met intacte planten vereisen echter langetermijnexperimenten en complexe monstervoorbereidingsprotocollen die door verschillende factoren kunnen worden beïnvloed.
Plantaardige eeltculturen zijn daarom een goed alternatief voor het bestuderen van het metabolisme van xenobiotica in planta, omdat ze de behandelingstijd aanzienlijk kunnen verkorten. Deze culturen sluiten microbiële interferentie en fotochemische afbraak uit, vereenvoudigen het matrixeffect van intacte planten, standaardiseren de teeltomstandigheden en vereisen minder experimentele inspanning. Plantaardige eeltculturen zijn met succes toegepast als een alternatieve benadering in metabole studies van triclosan9, nonylfenol10 en tebuconazol8. Deze studies toonden aan dat de metabole patronen in eeltculturen vergelijkbaar waren met die in intacte planten. Deze studie stelt een methode voor voor de efficiënte en nauwkeurige identificatie van metabolieten van xenobiotica in planten zonder complexe en tijdrovende protocollen. Hier gebruiken we plantaardige eeltculturen in combinatie met hoge resolutie massaspectrometrie voor de analyse van metabolieten met lage intensiteit signalen11,12.
Hiertoe werden wortel (Daucus carota var. sativus) eeltsuspensies gedurende 120 uur blootgesteld aan 100 μg/l 2,4-dibroomfenol in een schudder bij 130 tpm en 26 °C. 2,4-dibroomfenol werd gekozen vanwege de verstorende endocriene activiteit13 en het wijdverbreide voorkomen in bodem14. De metabolieten werden geëxtraheerd en geanalyseerd met behulp van hoge resolutie massaspectrometrie. Het hier voorgestelde protocol kan het in planta-metabolisme onderzoeken van andere soorten organische verbindingen die kunnen worden geïoniseerd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Differentiatie van wortel callus
OPMERKING: Autoclaaf alle apparatuur die hier wordt gebruikt en voer alle bewerkingen uit in een UV-gesteriliseerde ultraschone werkbank.
- Vernaliseer de zaden door de uniforme wortelzaden (Daucus carota var. sativus) gedurende 16 uur onder te dompelen in gedeïoniseerd water bij 4 °C.
- Steriliseer de vernalized zaden gedurende 20 minuten met 75% ethanol en spoel vervolgens drie keer met steriel gedeïoniseerd water onder aseptische omstandigheden.
- Steriliseer de zaden verder met 20%H 2 O2 gedurende 20 minuten en was ze zes keer onder aseptische omstandigheden met gesteriliseerd gedeïoniseerd water.
- Ontkiem de zaden aseptisch door ze te zaaien op hormoonvrij MS-medium (pH 5,8, geautoclaveerd bij 121 °C gedurende 20 minuten) met 1% agar-gel en te broeden bij 26 °C met een fotoperiode van 16 uur (350 μmol/m2s) gedurende 15 dagen.
- Verkrijg de explantaten door de hypocotyl en zaadlob van de zaailingen in kleine stukjes (0,5 cm) te snijden.
- Transformeer de explantaten in petrisalen (twee tot vier explantaten per schaal) met 15-20 ml aseptisch MS-medium aangevuld met auximon (2,4-dichloorfenoxyazijnzuur; 1 mg / L) en fytokinine (6-benzylaminopurine; 0,5 mg / L) onder aseptische omstandigheden.
- Incubeer de explantaten in het donker bij 26 °C gedurende 3-4 weken om het eelt op te wekken.
- Scheid de eeltweefsels (ongeveer 1 cm diameter) gevormd van de eerste explantaten met behulp van een steriel scalpel en een tang.
OPMERKING: De nieuw gevormde eeltweefsels zijn wit tot crèmegeel van kleur en hechten zich losjes aan de eerste explantaten.
2. 2,4-dibroomfenol behandeling
- Los 1 μg 2,4-dibroomfenol op in 10 ml aseptisch vloeibaar MS-medium (de uiteindelijke concentratie van 2,4-dibroomfenol is 100 ppb, pH 5,6-7,0).
- Voeg 3 g van het verse worteleelt (stap 1.8) toe aan glazen kolven met de bereide 2,4-dibroomfenoloplossing (van stap 2.1) onder aseptische omstandigheden. Beschouw dit als de 2,4-dibroomfenol behandeling.
OPMERKING: De glazen kolven werden geautoclaveerd en verzegeld met paraffinefolie. - Neem een mediumcontrole op die alleen de 2,4-dibroomfenoloplossing bevat (bereid in stap 2.1) om de abiotische afbraak van 2,4-dibroomfenol te evalueren.
- Voeg een blanco controle toe die alleen de worteleelt bevat (geen 2,4-dibroomfenoloplossing) om te controleren op mogelijke verontreiniging.
- Bereid de blanco controle die wortel bevat door 3 g vers verzameld worteleelt alleen toe te voegen aan 10 ml steriel MS-medium.
- Incubeer de 2,4-dibroomfenolbehandeling en de medium- en blancocontroles bij 130 rpm en 26 °C in het donker in een incubator gedurende 120 uur.
- Verwijder de glazen kolven uit de incubator om de monsters van de 2,4-dibroomfenolbehandeling en -controles na 120 uur incubatie te verzamelen.
OPMERKING: Alle monsters werden in drievoud bereid.
3. Monstervoorbereiding
- Scheid de callus zorgvuldig van het MS-medium door filtratie met glasvezelfilters (0,45 μm) voor de 2,4-dibroomfenolbehandeling en de controles. Verzamel het eelt na het wassen met ultrapuur water drie keer.
- Vriesdroog het verzamelde eelt met vloeibare stikstof en homogeniseer vervolgens het verzamelde eelt (0,2 g) met een high-throughput weefselmolen op 70 Hz gedurende 3 minuten.
- Spike de gehomogeniseerde callus door 50 μL van 25 mg / L surrogaat 4-n-NP-d4 toe te voegen met een glazen microsyringe en vervolgens gedurende 1 minuut te vortexen.
- Soniceer de monsters met 5 ml methanol / water (1: 1, v / v) in een ultrasoonapparaat (150 W, 40 kHz) gevuld met ijswater gedurende 30 minuten, om 2,4-dibroomfenol en de metabolieten te extraheren.
- Centrifugeer de suspensies bij 8.000 x g bij 4 °C gedurende 10 minuten en verzamel de supernatanten door pipetteren.
- Herhaal de extractieprocessen voor het eeltmonster drie keer en combineer de extracten.
- Laat de extracten door hydrofiele lipofiele gebalanceerde vaste fase extractie (HLB SPE) patronen met een stroomsnelheid van 1 ml / min.
OPMERKING: De HLB SPE-patronen werden achtereenvolgens voorbehandeld met 6 ml methanol en 6 ml water om eventuele interferenties te verwijderen. - Elueer de analyten door 6 ml methanol door de HLB SPE-patronen te leiden. Concentreer vervolgens de verkregen eluenten tot 1 ml onder een zachte stroom stikstofgas voor instrumentele analyse.
- Injecteer 10 μL resulterende eluenten in de UPLC-Q-TOF-MS voor 2,4-dibroomfenol en hun metabolietenanalyse15.
- Filter alle monsters met een nylonmembraan van 0,22 μm vóór instrumentele analyse.
4. Instrumentele analyse
OPMERKING: 2,4-dibroomfenol en hun metabolietenanalyses werden uitgevoerd op een ultraperformante vloeistofchromatograaf (UPLC) in combinatie met een micrOTOF-QII-massaspectrometer uitgerust met een elektrospray-ionisatie (ESI), werkend in de positieve en negatieve ionenmodus.
- Open de kolomverwarmingsdeur en installeer de UPLC-kolom door de kolominlaat aan te sluiten op de injectieklep en kolomuitlaat op de inlaat van de massaspectrometer.
OPMERKING: Een C18-kolom (50 mm x 2,1 mm; deeltjesgrootte van 1,7 μm) werd gebruikt voor de scheiding van analyten bij 40 °C. - Sluit mobiele fase A (ultrapuur water) en mobiele fase B (methanol van chromatografiekwaliteit) aan op het instrument door respectievelijk het uiteinde van de oplosmiddelbuizen A en B in de overeenkomstige oplosmiddelflessen te steken.
- Filter alle mobiele fasen (500 ml voor elk) door een filter van 0,22 μm en soniceer gedurende meer dan 30 minuten.
- Klik in het softwarevenster op Instrument | Inlaatmethode om de voorwaarden voor het vloeistofchromatogram te bewerken.
- Stel de gradiëntcondities van mobiele fase B als volgt in: een debiet van 1,0 ml/min; 0-0,5 min, 5%; 0,5-3,5 min, 5% tot 50%; 3,5-6,5 min, 50% tot 100%; 6,5-7 min, 100%; 7-10 min, 100% tot 5%.
- Stel de injectiesnelheid van de monsters in de UPLC-Q-TOF-MS in op 0,2 ml/min.
OPMERKING: De injectie van het monster wordt geprogrammeerd met behulp van een volautomatische sampler.
- Selecteer in het softwarevenster MS-methode en stel vervolgens de parameters van Q-TOF-MS in: een drooggasdebiet (N2) van 8 l / min, een temperatuur van 300-350 °C; een capillaire spanning van 4.500 V; een botsingsenergie van 5-45 V; en een volledig scanbereik van 40-800 Da.
- Plaats de injectieflacons met het monster op de overeenkomstige plaatsen van de monsterlades op serienummer en plaats de monsterlades opnieuw in de monsterkamer.
OPMERKING: Houd de monsterbakken plat en zorg ervoor dat de deur van de monsterkamer gesloten is. - Selecteer in het softwarevenster Bestand | Nieuw om een database te maken. Geef de database een naam.
- Laad het hierboven gemaakte voorbeeldprogramma door MS-bestand | Inlaatbestand | Injecteer volume.
- Sla de database op in de voorbeeldmap van het project door te klikken op Bestand | Opslaan.
- Selecteer Uitvoeren | Begin in het hoofdvenster van de software en selecteer vervolgens Voorbeeldgegevens ophalen en klik op OK in het venster van de startvoorbeeldlijst om gegevens te verzamelen.
OPMERKING: Het real-time chromatogram kan worden bekeken door te klikken op Chromatogram | Real-time update tijdens het data-acquisitieproces. - Verwerk de gegevens in de software door de doelgegevensrij te selecteren en op het chromatogramvenster te klikken om het MS-scanchromatogram te bekijken.
- Klik in het venster Chromatogram op Weergeven | TIC ScanWaveDS Tracering toevoegen | OK om de dochter massaspectra te laten scannen.
- Identificeer de metabolieten door de chromatogrammen van de 2,4-dibroomfenolbehandeling en de controles te vergelijken.
- Verhelder de metabolietkandidaten door de retentietijd, massa en fragmentatiepatronen16,17.
OPMERKING: De fout in massanauwkeurigheid tussen de experimentele m/z-waarden van de moederionen van de metabolietkandidaten en hun overeenkomstige theoretische m/z moet minder dan 10 ppm bedragen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De stappen van het protocol zijn weergegeven in figuur 1. Volgens het protocol vergeleken we het chromatogram van het worteleeltextract van de 2,4-dibroomfenolbehandeling met de controles en vonden acht verschillende pieken die aanwezig zijn in de 2,4-dibroomfenolbehandeling, maar afwezig in de controles (figuur 2). Dit geeft aan dat in totaal acht metabolieten van 2,4-dibroomfenol (M562, M545, M661, M413, M339, M380, M424 en M187) met succes werden gedetecteerd in de met 2,4 dibroomfenol behandelde worteleelt. Bovendien werd de piek van het ouder 2,4-dibroomfenol (retentietijd = 0,85 min) niet gevonden in het chromatogram van de 2,4-dibroomfenolbehandeling (figuur 2), wat aangeeft dat 2,4-dibroomfenol snel werd gemetaboliseerd in de wortelcallus onder de experimentele omstandigheden.
De chromatografische en massa-informatie die is gebruikt om de metabolieten van 2,4-dibroomfenol in de worteleelt te identificeren, is samengevat in tabel 1. 2,4-dibroomfenol geïncubeerd in worteleelt leidde tot de vorming van metabolieten door directe conjugatie met glucose (M562, M545, M661 en M413) en aminozuren (M339, M380 en M424). M413 produceerde bijvoorbeeld fragmenten bij m/z 250,8954 en 163,1485, die overeenkomen met dibutylftalaat (DBP) en glucose (C6H11O5). M413 werd verder gemetaboliseerd om disacharideconjugatiemetabolieten M661, M545 en M562 te vormen door pentose of hexose toe te voegen. De M339, M380 en M424 werden gespeculeerd als 2,4-dibroomfenol alanine, 2,4-dibroomfenol acetylalanine en 2,4-dibroomfenol acetylasparanezuur, omdat ze het karakteristieke neutrale verlies van aminozuur (C 3 H 6 NO2), acetylalanine (C 5 H 8 NO3) en acetylasparaginezuur (C6H8NO5) hebben, waarbij de overeenkomstige fragmenten worden geproduceerd bij m / z 89,0932, 129.1140 en 173.1235, respectievelijk15. De gepresenteerde resultaten suggereren dat plantaardige eeltculturen kunnen worden gebruikt als een efficiënt en betrouwbaar hulpmiddel om het metabolisme van xenobiotica in gewassen op te helderen.
Figuur 1: Methodeschema. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: De chromatogrammen voor 2,4-dibroomfenol (het ingebrachte beeld) en de metabolieten van 2,4-dibroomfenol. Dit cijfer is aangepast met toestemming van Sun et al.15. Auteursrecht (2018) Amerikaanse Chemische Vereniging. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| Metaboliet | RT (min) | ESI-modus | Waargenomen m/z |
Berekend m/z |
Predicated formule | Fragmenten (m/z) | Betrouwbaarheidsniveau | |||
| M562 | 0.7 | -H | 562.201 | 562.201 | C18H26Br2O10 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 170,9914(-Br) | MS, MS2 | |||||||||
| M545 | 1.6 | -H | 545.151 | 545.1506 | C17H22Br2O10 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 170,9914(-Br) | ||||||||||
| 528,1433(-OH) | MS, MS2 | |||||||||
| M661 | 2.9 | -H | 661.222 | 661.2228 | C21H26Br2O14 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 410.3274(-C15H23O13) | MS, MS2 | |||||||||
| M413 | 4.1 | -H | 413.036 | 413.036 | C12H14Br2O6 | 250,8954(-DBP) | Niveau 1 | |||
| 163.1485(-C6H11O5) | ||||||||||
| 207,8938(250-CO2) | Synthetische standaard, RT, MS,MS 2 | |||||||||
| M339 | 5.2 | +H | 339.994 | 339.9886 | C9 H9Br2NEE3 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 87.0773(-C3H6NR.2) | MS, MS2 | |||||||||
| M380 | 5.5 | -H | 380.01 | 380.0094 | C 11 H11Br2NR.4 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 129.1140(-C5H8NR.3) | MS, MS2 | |||||||||
| M424 | 5.8 | -H | 424.012 | 424.0189 | C12H11Br2NEE6 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 173.1235(-C6H8NR5) | MS, MS2 | |||||||||
| M187 | 6.1 | -H | 187.995 | 187.9988 | C6H5BrO2 | 109.1027(-Br) | Niveau 1 | |||
| 170,9914(-OH) | Authentieke standaard, RT, MS,MS 2 | |||||||||
Tabel 1: Samenvatting van 2,4-dibroomfenol en zijn metabolieten ontdekt in worteleeltextracten. Deze tabel is aangepast met toestemming van Sun et al.15. Auteursrecht (2018) Amerikaanse Chemische Vereniging.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dit protocol is ontwikkeld om de biotransformatie van xenobiotica in planten efficiënt te identificeren. De cruciale stap van dit protocol is de cultuur van het planteel. Het moeilijkste deel is de differentiatie en het onderhoud van het planteneel, omdat het planteneelt gemakkelijk wordt geïnfecteerd en ontwikkeld tot plantenweefsels. Daarom is het belangrijk om ervoor te zorgen dat alle gebruikte apparatuur wordt geautoclaveerd en dat alle bewerkingen onder aseptische omstandigheden worden uitgevoerd. De differentiatie en het onderhoud van de planteelt moet in het donker worden gedaan om autotrofe groei en overontwikkeling te voorkomen. Bovendien zijn de dosis en soorten fytohormonen die in het MS-medium worden aangevuld van cruciaal belang voor het verschil van de planteel, waarbij rekening moet worden gehouden met de plantensoort. Een overdosis fytohormonen zorgt ervoor dat de callus een vasculair systeem ontwikkelt, maar onvoldoende fytohormonen beperken de differentiatie van de plantcallus18. De MS-medium- en fytohormoonvoorraden moeten vers worden bereid. Het wordt ten zeerste aanbevolen om het MS-medium te autoclaafen vóór de introductie van de fytohormonen en het aseptische hypocotyl.
Pigmenten zoals chlorofyl in intacte planten zijn een algemeen probleem in LC-HRMS-metingen19,20. Het planteelt is afgeleid van aseptisch hypocotyl en is transparant zonder chlorofyl. Dit betekent dat de eeltcultuur van planten het matrixeffect van de intacte plant kan optimaliseren en een eenvoudige maar efficiënte monstervoorbereidingstechniek kan bieden zonder pigmentverwijderingsstappen. De analyse van de metabolieten van xenobiotica in planteelt werd bereikt met LC-HRMS op een niet-gerichte manier15. De plantaardige eeltcultuur in combinatie met niet-gerichte analyse maakt de effectieve identificatie van een grootschalige profilering van metabole verbindingen mogelijk. Deze voordelen maken de methode ideaal voor het mechanistische begrip van het metabolisme van xenobiotica in planten. Er zijn echter nog steeds verschillende beperkingen voor het protocol. Het protocol kan bijvoorbeeld alleen worden toegepast als referentie voor de feitelijke situatie die zich voordoet in planten in het veld, vanwege de complexe omgevingsomstandigheden. Bovendien, aangezien verschillende planteneelt verschillende metabolische vermogens vertoont, kunnen de geïdentificeerde metabolieten van xenobiotica variëren met het type eelt.
Het kennen van de metabole transformatie van chemicaliën in planten is belangrijk voor hun veilige ontwikkeling en toepassing. De hier voorgestelde methode is efficiënt en betrouwbaar voor de screening van de gegenereerde metabolieten in planten en kan de evaluatie van het bijbehorende risico voor ecosystemen en de menselijke gezondheid ondersteunen door de overdracht van de voedselketen of de directe inname van gewassen via de voeding. Dit protocol kan de persistentie van xenobiotica in planten onderzoeken en helpen bij het screenen van opkomende verontreinigingen. Gezien het volledige metabolische vermogen, met minder kosten en minder tijd en moeite, is de planteneeltcultuur een goed hulpmiddel om het metabole gedrag van veel verbindingen te vergelijken en een database op te bouwen voor de voorspelling van mogelijke metabolieten van xenobiotica.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Deze studie werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (21976160) en het Zhejiang Province Public Welfare Technology Application Research Project (LGF21B070006).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2,4-dichlorophenoxyacetic acid | WAKO | 1 mg/L | |
| 20% H2O2 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10011218-500ML | |
| 4-n-NP, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| 4-n-NP-d4 | Pointe-Claire | ||
| 6-benzylaminopurine | WAKO | 0.5 mg/L | |
| 75% ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 1269101-500ML | |
| 7890A-5975 gas chromatography | Agilent | ||
| ACQULTY ultra-performance liquid chromatography | Waters | ||
| Amber glass vials | Waters | ||
| Artificial climate incubator | Ningbo DongNan Lab Equipment Co.,LTD | RDN-1000A-4 | |
| Autoclaves | STIK | MJ-Series | |
| C18 column | ACQUITY UPLC BEH | ||
| Centrifuge | Thermo Fisher | ||
| DB-5MS capillary column | Agilent | ||
| Dichloromethane | Sigma-Aldrich | 40071190-4L | |
| Freeze dryer | SCIENTZ | ||
| High-throughput tissue grinder | SCIENTZ | ||
| Methanol | Sigma-Aldrich | ||
| MicrOTOF-QII mass spectrometer | Bruker Daltonics | ||
| Milli-Q system | Millipore | MS1922801-4L | |
| Murashige & Skoog medium | HOPEBIO | HB8469-7 | |
| N-hexane | Sigma-Aldrich | H109658-4L | |
| Nitrogen blowing instrument | AOSHENG | MD200-2 | |
| NP isomers, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| Oasis HLB cartridges | Waters | 60 mg/3 mL | |
| Research plus | Eppendorf | 100-1000 µL | |
| Seeds of Little Finger carrot (Daucus carota var. sativus) | Shouguang Seed Industry Co., Ltd | ||
| Shaking Incubators | Shanghai bluepard instruments Co.,ltd. | THZ-98AB | |
| Solid phase extractor | AUTO SCIENCE | ||
| Ultrasound machine | ZKI | UC-6 | |
| UV-sterilized ultra-clean workbench | AIRTECH |
References
- Chakraborty, P., et al. Baseline investigation on plasticizers, bisphenol A, polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals in the surface soil of the informal electronic waste recycling workshops and nearby open dumpsites in Indian metropolitan cities. Environmental Pollution. 248, 1036-1045 (2019).
- Abril, C., Santos, J. L., Martin, J., Aparicio, I., Alonso, E. Occurrence, fate and environmental risk of anionic surfactants, bisphenol A, perfluorinated compounds and personal care products in sludge stabilization treatments. Science of the Total Environment. 711, 135048 (2020).
- Xu, Y. W., et al. Determination and occurrence of bisphenol A and thirteen structural analogs in soil. Chemosphere. 277, 130232 (2021).
- Cai, Q. Y., et al. Occurrence of nonylphenol and nonylphenol monoethoxylate in soil and vegetables from vegetable farms in the Pearl River Delta, South China. Archives of Environmental Contamination and Toxicology. 63 (1), 22-28 (2012).
- Wang, S. Y., et al. et al Migration and health risks of nonylphenol and bisphenol a in soil-winter wheat systems with long-term reclaimed water irrigation. Ecotoxicology and Environmental Safety. 158, 28-36 (2018).
- Gunther, K., Racker, T., Bohme, R. An isomer-specific approach to endocrine-disrupting nonylphenol in infant food. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (6), 1247-1254 (2017).
- Van Eerd, L. L., Hoagland, R. E., Zablotowicz, R. M., Hall, J. C. Pesticide metabolism in plants and microorganisms. Weed Science. 51 (4), 472-495 (2003).
- Hillebrands, L., Lamshoeft, M., Lagojda, A., Stork, A., Kayser, O. Evaluation of callus cultures to elucidate the metabolism of tebuconazole, flurtamone, fenhexamid, and metalaxyl-M in Brassica napus L., Glycine max (L.) Merr., Zea mays L., and Triticum aestivum L. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 68 (48), 14123-14134 (2020).
- Macherius, A., et al. Metabolization of the bacteriostatic agent triclosan in edible plants and its consequences for plant uptake assessment. Environmental Science & Technology. 46 (19), 10797-10804 (2012).
- Sun, J. Q., et al. Uptake and metabolism of nonylphenol in plants: Isomer selectivity involved with direct conjugation. Environmental Pollution. 270, 116064 (2021).
- Schymanski, E. L., et al. Identifying small molecules via high resolution mass spectrometry: communicating confidence. Environmental Science & Technology. 48 (4), 2097-2098 (2014).
- Moschet, C., Anumol, T., Lew, B. M., Bennett, D. H., Young, T. M. Household dust as a repository of chemical accumulation: new insights from a comprehensive high-resolution mass spectrometric study. Environmental Science & Technology. 52 (5), 2878-2887 (2018).
- Ren, Z., et al. Hydroxylated PBDEs and brominated phenolic compounds in particulate matters emitted during recycling of waste printed circuit boards in a typical e-waste workshop of South China. Environmental Pollution. 177, 71-77 (2013).
- de Wit, C. A. An overview of brominated flame retardants in the environment. Chemosphere. 46 (5), 583-624 (2002).
- Sun, J. Q., Chen, Q., Qian, Z. X., Zheng, Y., Yu, S. A., Zhang, A. P. Plant Uptake and Metabolism of e,4-Dibromophenol in Carrot: In Vitro Enzymatic Direct Conjugation. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66 (17), 4328-4335 (2018).
- Chibwe, L., Titaley, I. A., Hoh, E., Simonich, S. L. M. Integrated framework for identifying toxic transformation products in complex environmental mixtures. Environmental Science & Technology Letters. 4 (2), 32-43 (2017).
- Hollender, J., Schymanski, E. L., Singer, H. P., Ferguson, P. L. Nontarget screening with high resolution mass spectrometry in the environment: ready to go. Environmental Science & Technology. 51 (20), 11505-11512 (2017).
- Nafisi, M., Fimognari, L., Sakuragi, Y. Interplays between the cell wall and phytohormones in interaction between plants and necrotrophic pathogens. Phytochemistry. 112, 63-71 (2015).
- Zhang, Q., et al. Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants. Environmental Science & Technology. 53 (13), 7473-7482 (2019).
- Hou, X., et al.
