Summary
Denne protokollen beskriver en enkel og effektiv metode for identifisering av 2,4-dibromofenolmetabolitter i planter.
Abstract
Avlinger kan bli utsatt for organiske forurensninger, siden jord er en stor vask for forurensende stoffer som kastes ut i miljøet. Dette skaper potensiell menneskelig eksponering gjennom forbruk av forurensende akkumulerte matvarer. Belysning av opptak og metabolisme av xenobiotika i avlinger er avgjørende for vurderingen av dietteksponeringsrisiko hos mennesker. For slike eksperimenter krever imidlertid bruk av intakte planter langsiktige eksperimenter og komplekse prøveprepareringsprotokoller som kan påvirkes av ulike faktorer. Plantekalluskulturer kombinert med høyoppløselig massespektrometri (HRMS) kan gi en løsning for nøyaktig og tidsbesparende identifisering av metabolitter av xenobiotika i planter, da det kan unngå forstyrrelser fra det mikrobielle eller soppmikromiljøet, forkorte behandlingsvarigheten og forenkle matrikseffekten av intakte planter. 2,4-dibromofenol, et typisk flammehemmende og hormonforstyrrende middel, ble valgt som modellsubstans på grunn av dets utbredte forekomst i jord og dets opptakspotensial av planter. Her ble plantekallus generert fra asepsefrø og utsatt for sterilt 2,4-dibromofenolholdig kulturmedium. Resultatene viste at åtte metabolitter av 2,4-dibromofenol ble identifisert i planten callus vev etter 120 timers inkubasjon. Dette indikerer at 2,4-dibromofenol raskt ble metabolisert i planten callus vev. Dermed er plantekalluskulturplattformen en effektiv metode for å evaluere opptak og metabolisme av xenobiotika i planter.
Introduction
Stadig flere organiske miljøgifter har blitt sluppet ut i miljøet på grunn av menneskeskapte aktiviteter 1,2, og jord regnes som et stort sluk for disse miljøgiftene 3,4. Forurensningene i jorda kan tas opp av planter og potensielt overføres til høyere trofiske organismer langs næringskjedene, ved å komme direkte inn i menneskekroppen gjennom avlingsforbruk, og dermed føre til utilsiktet eksponering 5,6. Planter bruker forskjellige veier for å metabolisere xenobiotika for avgiftning7; Det er viktig å belyse metabolismen av xenobiotika, da den kontrollerer den faktiske skjebnen til forurensninger i planter. Siden metabolittene kan skilles ut av blader (til atmosfæren) eller røttene, gir bestemmelse av metabolittene i de svært tidlige fasene av eksponeringen dermed muligheten til å teste et utvidet antall metabolitter8. Imidlertid krever studier ved bruk av intakte planter langsiktige eksperimenter og komplekse prøveprepareringsprotokoller som kan påvirkes av ulike faktorer.
Plantekalluskulturer er derfor et godt alternativ for å studere metabolismen av xenobiotika i planta, da de i stor grad kan forkorte behandlingstiden. Disse kulturene utelukker mikrobiell interferens og fotokjemisk nedbrytning, forenkler matriseeffekten av intakte planter, standardiserer dyrkingsforholdene og krever mindre eksperimentell innsats. Plant callus kulturer har blitt brukt som en alternativ tilnærming i metabolske studier av triclosan9, nonylfenol10 og tebukonazol8. Disse studiene viste at de metabolske mønstrene i calluskulturer var lik de i intakte planter. Denne studien foreslår en metode for effektiv og nøyaktig identifisering av metabolitter av xenobiotika i planter uten komplekse og tidkrevende protokoller. Her bruker vi plantekalluskulturer i kombinasjon med høyoppløselig massespektrometri for analyse av metabolitter med lavintensitetssignaler11,12.
Til dette formål ble gulrot (Daucus carota var. sativus) kallussuspensjoner utsatt for 100 μg / l 2,4-dibromofenol i 120 timer i en shaker ved 130 o / min og 26 ° C. 2,4-dibromofenol ble valgt på grunn av sin forstyrrende endokrine aktivitet13 og utbredt forekomst i jord14. Metabolittene ble ekstrahert og analysert ved høyoppløselig massespektrometri. Protokollen foreslått her kan undersøke in planta metabolisme av andre typer organiske forbindelser som kan ioniseres.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Differensiering av gulrot callus
MERK: Autoklav alt utstyr som brukes her og utfør alle operasjoner i en UV-sterilisert ultraren arbeidsbenk.
- Vernaliser frøene ved å senke de ensartede gulrotfrøene (Daucus carota var. sativus) i avionisert vann ved 4 °C i 16 timer.
- Overflatesteriliser de vernaliserte frøene med 75% etanol i 20 minutter, og skyll deretter tre ganger med sterilt avionisert vann under aseptiske forhold.
- Steriliser frøene ytterligere med 20%H2O2i 20 minutter, og vask dem med sterilisert avionisert vann seks ganger under aseptiske forhold.
- Aseptisk spire frøene ved å så dem på hormonfritt MS-medium (pH 5,8, autoklavert ved 121 °C i 20 minutter) inneholdende 1% agar-gel, og inkubere ved 26 °C med en 16 timers fotoperiode (350 μmol / m2s) i 15 dager.
- Få eksplantene ved å kutte plantens hypocotyl og cotyledon i små biter (0,5 cm).
- Transformer eksplantene til petriskåler (to til fire eksplanter per tallerken) som inneholder 15-20 ml aseptisk MS-medium tilsatt auximon (2,4-diklorfenoksyeddiksyre; 1 mg/L) og fytokinin (6-benzylaminopurin, 0,5 mg/l) under aseptiske forhold.
- Inkuber eksplantene i mørket ved 26 °C i 3-4 uker for å indusere callus.
- Separat callusvevene (rundt 1 cm diameter) dannet fra de første eksplantene ved hjelp av en steril skalpell og tang.
MERK: De nydannede callusvevene er hvite til kremgule i fargen og festes løst til de første eksplantene.
2. 2,4-dibromofenolbehandling
- Løs opp 1 μg 2,4-dibromofenol i 10 ml aseptisk flytende MS-medium (den endelige konsentrasjonen av 2,4-dibromofenol er 100 ppb, pH 5,6-7,0).
- Tilsett 3 g av den ferske gulrotkallus (trinn 1.8) i glassflasker som inneholder den tilberedte 2,4-dibromofenoloppløsningen (fra trinn 2.1) under aseptiske forhold. Betrakt dette som 2,4-dibromofenolbehandling.
MERK: Glassflaskene ble autoklavert og forseglet med parafinfilm. - Inkluder en middels kontroll som kun inneholder 2,4-dibromofenoloppløsningen (tilberedt i trinn 2.1) for å evaluere den abiotiske nedbrytningen av 2,4-dibromofenol.
- Inkluder en tom kontroll som bare inneholder gulrotkallus (ingen 2,4-dibromofenolløsning) for å se etter potensiell forurensning.
- Forbered den tomme kontrollen som inneholder gulrot ved å tilsette 3 g fersk oppsamlet gulrotkallus bare i 10 ml sterilt MS-medium.
- Inkuber 2,4-dibromofenolbehandlingen og de mellomstore og tomme kontrollene ved 130 o / min og 26 ° C i mørket i en inkubator i 120 timer.
- Fjern glassflaskene fra inkubatoren for å samle prøvene fra 2,4-dibromofenolbehandlingen og kontroller etter 120 timers inkubasjon.
MERK: Alle prøvene ble fremstilt i tre eksemplarer.
3. Forberedelse av prøver
- Separer callus forsiktig fra MS-mediet ved filtrering med glassfiberfiltre (0,45 μm) for 2,4-dibromofenolbehandlingen og kontrollene. Samle callus etter vask med ultrarent vann tre ganger.
- Fryse-tørk den oppsamlede callus med flytende nitrogen, og homogeniser deretter den oppsamlede callus (0,2 g) med en høy gjennomstrømnings vevskvern ved 70 Hz i 3 minutter.
- Spike den homogeniserte callus ved å tilsette 50 μL 25 mg / L surrogat 4-n-NP-d4 med en glassmikrosprøyte og deretter vortexing i 1 min.
- Sonikere prøvene med 5 ml metanol / vann (1: 1, v / v) i en ultralydsapparat (150 W, 40 kHz) fylt med isvann i 30 minutter, for å trekke ut 2,4-dibromofenol og metabolittene.
- Sentrifuger suspensjonene ved 8000 x g ved 4 °C i 10 minutter, og samle supernatantene ved pipettering.
- Gjenta ekstraksjonsprosessene for callusprøven tre ganger og kombiner ekstraktene.
- Før ekstraktene gjennom hydrofile lipofile balanserte fastfaseekstraksjonspatroner (HLB SPE) med en strømningshastighet på 1 ml / min.
MERK: HLB SPE-patronene ble forbehandlet sekvensielt med 6 ml metanol og 6 ml vann for å fjerne eventuelle forstyrrelser. - Elute analyttene ved å føre 6 ml metanol gjennom HLB SPE-patronene. Deretter konsentreres de oppnådde eluentene til 1 ml under en mild strøm av nitrogengass for instrumentanalyse.
- Injiser 10 μL resulterende eluenter i UPLC-Q-TOF-MS for 2,4-dibromofenol og deres metabolittanalyse15.
- Filtrer alle prøvene med en 0,22 μm nylonmembran før instrumentell analyse.
4. Instrumental analyse
MERK: 2,4-dibromofenol og deres metabolitters analyser ble utført på en ultra-ytelse væskekromatograf (UPLC) i kombinasjon med et micrOTOF-QII massespektrometer utstyrt med en elektrosprayionisering (ESI), som opererer i positiv og negativ ionmodus.
- Åpne døren til søylevarmeren og installer UPLC-kolonnen ved å koble kolonneinntaket til injeksjonsventilen og søyleutløpet til massespektrometerets innløp.
MERK: En C18-kolonne (50 mm x 2,1 mm; 1,7 μm partikkelstørrelse) ble brukt til separasjon av analytter ved 40 °C. - Koble mobilfase A (ultrarent vann) og mobil fase B (metanol av kromatografikvalitet) til instrumentet ved å sette enden av løsningsmiddelrørene A og B inn i henholdsvis de tilsvarende løsningsmiddelflaskene.
- Filtrer alle mobile faser (500 ml for hver) gjennom et 0,22 μm filter, og sonicate i mer enn 30 minutter.
- I programvarevinduet klikker du på Instrument | Innløpsmetode for å redigere betingelsene for væskekromatogrammet.
- Still inn gradientforholdene for mobil fase B som følger: en strømningshastighet på 1,0 ml / min; 0-0,5 min, 5%; 0,5-3,5 min, 5% til 50%; 3,5-6,5 min, 50% til 100%; 6,5-7 min, 100%; 7-10 min, 100% til 5%.
- Sett injeksjonshastigheten for prøvene inn i UPLC-Q-TOF-MS til 0,2 ml/min.
MERK: Injeksjonen av prøven programmeres ved hjelp av en helautomatisk prøvetaker.
- I programvarevinduet velger du MS Method og setter deretter opp parametrene for Q-TOF-MS: en tørkegass (N2) strømningshastighet på 8 l / min, en temperatur på 300-350 ° C; en kapillærspenning på 4.500 V; en kollisjonsenergi på 5-45 V; og et fullt skanneområde på 40-800 Da.
- Plasser hetteglassene med prøven på tilsvarende plassering av prøvebrettene etter serienummer, og sett prøvebrettene inn i prøvekammeret igjen.
MERK: Hold prøveskinnene flate og sørg for at døren til prøvekammeret er lukket. - I programvarevinduet velger du File | Nytt for å opprette en database. Gi databasen et navn.
- Last inn eksempelprogrammet som er opprettet ovenfor, ved å velge MS File | Innløpsfil | Injiser volum.
- Lagre databasen i eksempelmappen for prosjektet ved å klikke Fil | Lagre.
- Velg Kjør | Start i programvarens hovedvindu, velg deretter Hent eksempeldata og klikk OK i vinduet i starteksempellisten som kjøres for å samle inn data.
MERK: Sanntidskromatogrammet kan vises ved å klikke på Chromatogram | Oppdatering i sanntid under datainnsamlingsprosessen. - Behandle dataene i programvaren ved å velge måldataraden og klikke på kromatogramvinduet for å vise MS-skannekromatogrammet.
- I kromatogramvinduet klikker du på Skjerm | TIC | ScanWaveDS | Legg til spor | OK for å få datteren skanne massespektra.
- Identifiser metabolittene ved å sammenligne kromatogrammene til 2,4-dibromofenolbehandlingen og kontrollene.
- Belys metabolittkandidatene ved retensjonstid, masse og fragmenteringsmønstre16,17.
MERK: Feilen med massenøyaktighet mellom de eksperimentelle m/z-verdiene til moderionene til metabolittkandidatene til deres tilsvarende teoretiske m/z bør være mindre enn 10 ppm.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Trinnene i protokollen er vist i figur 1. Etter protokollen sammenlignet vi kromatogrammet til gulrotkallusekstraktet fra 2,4-dibromofenolbehandlingen med kontrollene, og fant åtte forskjellige topper som er tilstede i 2,4-dibromofenolbehandlingen, men fraværende i kontrollene (figur 2). Dette indikerer at totalt åtte metabolitter av 2,4-dibromofenol (M562, M545, M661, M413, M339, M380, M424 og M187) ble vellykket påvist i 2,4-dibromofenolbehandlede gulrotkallus. I tillegg ble toppen av modersubstansen 2,4-dibromofenol (retensjonstid = 0,85 min) ikke funnet i kromatogrammet til 2,4-dibromofenolbehandlingen (figur 2), noe som indikerer at 2,4-dibromofenol raskt metaboliseres i gulrotkallus under eksperimentelle forhold.
Kromatografisk informasjon og masseinformasjon som brukes til å identifisere metabolittene av 2,4-dibromofenol i gulrotkallus er oppsummert i tabell 1. 2,4-dibromofenol inkubert i gulrotkallus førte til dannelsen av metabolitter ved direkte konjugering med glukose (M562, M545, M661 og M413) og aminosyrer (M339, M380 og M424). For eksempel produserte M413 fragmenter ved m / z 250.8954 og 163.1485, som tilsvarer dibutylftalat (DBP) og glukose (C6H11O5). M413 ble videre metabolisert for å danne disakkaridkonjugasjonsmetabolittene M661, M545 og M562 ved å tilsette pentose eller heksose. M339, M380 og M424 ble spekulert i å være 2,4-dibromofenolalanin, 2,4-dibromofenolacetylalanin og 2,4-dibromofenolacetylasparginsyre, da de har det karakteristiske nøytrale tapet av aminosyre (C 3 H 6 NO2), acetylalanin (C 5 H 8 NO3) og acetylasparginsyre (C6H8NO5), som produserer de tilsvarende fragmentene ved m / z 89,0932, 129.1140 og 173.1235, henholdsvis15. De presenterte resultatene tyder på at plantekalluskulturer kan brukes som et effektivt og pålitelig verktøy for å belyse metabolismen av xenobiotika i avlinger.
Figur 1: Metode skjematisk. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2 Kromatogrammene for 2,4-dibromofenol (bildet er innsatt) og metabolittene av 2,4-dibromofenol. Denne figuren er tilpasset med tillatelse fra Sun et al.15. Copyright (2018) American Chemical Society. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Metabolitt | RT (min) | ESI-modus | Observert M/Z |
Kalkulert M/Z |
Predikert formel | Fragmenter (m/z) | Konfidensnivå | |||
| M562 | 0.7 | -H | 562.201 | 562.201 | C18H26Br2O10 | 250.8954(-DBP) | Nivå 2b | |||
| 170.9914(-Br) | MS, MS2 | |||||||||
| M545 | 1.6 | -H | 545.151 | 545.1506 | C17H22Br2O10 | 250.8954(-DBP) | Nivå 2b | |||
| 170.9914(-Br) | ||||||||||
| 528.1433(-OH) | MS, MS2 | |||||||||
| M661 | 2.9 | -H | 661.222 | 661.2228 | C21H26Br2O14 | 250.8954(-DBP) | Nivå 2b | |||
| 410.3274 (-C15H23O13) | MS, MS2 | |||||||||
| M413 | 4.1 | -H | 413.036 | 413.036 | C12H14Br2O6 | 250.8954(-DBP) | Nivå 1 | |||
| 163.1485 (-C6H11O5) | ||||||||||
| 207.8938 (250-CO2) | Syntetisk standard, RT, MS,MS 2 | |||||||||
| M339 | 5.2 | +H | 339.994 | 339.9886 | C9 H9Br2NO3 | 250.8954(-DBP) | Nivå 2b | |||
| 87.0773 (-C3H6NO2) | MS, MS2 | |||||||||
| M380 | 5.5 | -H | 380.01 | 380.0094 | C 11 H11Br2NO4 | 250.8954(-DBP) | Nivå 2b | |||
| 129.1140 (-C5H8NO3) | MS, MS2 | |||||||||
| M424 | 5.8 | -H | 424.012 | 424.0189 | C12H11Br2NO6 | 250.8954(-DBP) | Nivå 2b | |||
| 173.1235 (-C6H8NO5) | MS, MS2 | |||||||||
| M187 | 6.1 | -H | 187.995 | 187.9988 | C6H5BrO2 | 109.1027(-Br) | Nivå 1 | |||
| 170,9914(-OH) | Autentisk standard, RT, MS, MS2 | |||||||||
Tabell 1: Sammendrag av 2,4-dibromofenol og dets metabolitter oppdaget i gulrotkallusekstrakter. Denne tabellen er tilpasset med tillatelse fra Sun et al.15. Copyright (2018) American Chemical Society.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokollen ble utviklet for effektivt å identifisere biotransformasjonen av xenobiotika i planter. Det kritiske trinnet i denne protokollen er kulturen til planten callus. Den vanskeligste delen er differensiering og vedlikehold av planten callus, fordi planten callus er lett infisert og utviklet til å plante vev. Derfor er det viktig å sørge for at alt utstyr som brukes er autoklavert, og at alle operasjoner utføres under aseptiske forhold. Differensiering og vedlikehold av planten callus bør gjøres i mørket for å unngå autotrofisk vekst og overutvikling. I tillegg er dosen og typene fytohormoner supplert i MS-mediet kritisk for differensialet til plantekallusen, som bør ta hensyn til planteartene. En overdose av fytohormoner fører til at callus utvikler et vaskulært system, men utilstrekkelige fytohormoner begrenser differensieringen av planten callus18. MS medium og fytohormon aksjer bør tilberedes frisk. Det anbefales sterkt å autoklavere MS-mediet før innføringen av fytohormonene og den aseptiske hypokotylen.
Pigmenter som klorofyll i intakte planter er et generelt problem i LC-HRMS målinger19,20. Planten callus er avledet fra aseptisk hypocotyl og er gjennomsiktig uten klorofyll. Dette betyr at plantekalluskultur kan optimalisere matriseeffekten av den intakte planten og tilby en enkel, men effektiv prøveprepareringsteknikk uten pigmentfjerningstrinn. Analysen av metabolittene av xenobiotika i plantekallus ble oppnådd med LC-HRMS på en ikke-målrettet måte15. Plantekalluskulturen kombinert med ikke-målrettet analyse muliggjør effektiv identifisering av en storskala profilering av metabolske forbindelser. Disse fordelene gjør metoden ideell for den mekanistiske forståelsen av metabolismen av xenobiotika i planter. Det er imidlertid fortsatt flere begrensninger for protokollen. For eksempel kan protokollen bare brukes som referanse for den faktiske situasjonen som oppstår i planter i feltet, på grunn av de komplekse miljøforholdene. I tillegg, siden forskjellige plantecalluser utviser forskjellige metabolske evner, kan de identifiserte metabolittene av xenobiotika variere med typen callus.
Å vite metabolsk transformasjon av kjemikalier i planter er viktig for deres sikre utvikling og anvendelse. Metoden som foreslås her er effektiv og pålitelig for screening av de genererte metabolittene i planter, og kan støtte evalueringen av den tilknyttede risikoen for økosystemer og menneskers helse gjennom overføring av næringskjeden eller direkte diettinntak av avlinger. Denne protokollen kan undersøke persistensen av xenobiotika i planter og hjelpe til med å skjerme nye forurensninger. Med tanke på sin fulle metabolske evne, med færre kostnader og redusert tid og krefter, er plantekalluskulturen et godt verktøy for å sammenligne metabolsk oppførsel av mange forbindelser og bygge opp en database for prediksjon av mulige metabolitter av xenobiotika.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Denne studien ble støttet av National Natural Science Foundation of China (21976160) og Zhejiang Province Public Welfare Technology Application Research Project (LGF21B070006).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2,4-dichlorophenoxyacetic acid | WAKO | 1 mg/L | |
| 20% H2O2 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10011218-500ML | |
| 4-n-NP, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| 4-n-NP-d4 | Pointe-Claire | ||
| 6-benzylaminopurine | WAKO | 0.5 mg/L | |
| 75% ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 1269101-500ML | |
| 7890A-5975 gas chromatography | Agilent | ||
| ACQULTY ultra-performance liquid chromatography | Waters | ||
| Amber glass vials | Waters | ||
| Artificial climate incubator | Ningbo DongNan Lab Equipment Co.,LTD | RDN-1000A-4 | |
| Autoclaves | STIK | MJ-Series | |
| C18 column | ACQUITY UPLC BEH | ||
| Centrifuge | Thermo Fisher | ||
| DB-5MS capillary column | Agilent | ||
| Dichloromethane | Sigma-Aldrich | 40071190-4L | |
| Freeze dryer | SCIENTZ | ||
| High-throughput tissue grinder | SCIENTZ | ||
| Methanol | Sigma-Aldrich | ||
| MicrOTOF-QII mass spectrometer | Bruker Daltonics | ||
| Milli-Q system | Millipore | MS1922801-4L | |
| Murashige & Skoog medium | HOPEBIO | HB8469-7 | |
| N-hexane | Sigma-Aldrich | H109658-4L | |
| Nitrogen blowing instrument | AOSHENG | MD200-2 | |
| NP isomers, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| Oasis HLB cartridges | Waters | 60 mg/3 mL | |
| Research plus | Eppendorf | 100-1000 µL | |
| Seeds of Little Finger carrot (Daucus carota var. sativus) | Shouguang Seed Industry Co., Ltd | ||
| Shaking Incubators | Shanghai bluepard instruments Co.,ltd. | THZ-98AB | |
| Solid phase extractor | AUTO SCIENCE | ||
| Ultrasound machine | ZKI | UC-6 | |
| UV-sterilized ultra-clean workbench | AIRTECH |
References
- Chakraborty, P., et al. Baseline investigation on plasticizers, bisphenol A, polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals in the surface soil of the informal electronic waste recycling workshops and nearby open dumpsites in Indian metropolitan cities. Environmental Pollution. 248, 1036-1045 (2019).
- Abril, C., Santos, J. L., Martin, J., Aparicio, I., Alonso, E. Occurrence, fate and environmental risk of anionic surfactants, bisphenol A, perfluorinated compounds and personal care products in sludge stabilization treatments. Science of the Total Environment. 711, 135048 (2020).
- Xu, Y. W., et al. Determination and occurrence of bisphenol A and thirteen structural analogs in soil. Chemosphere. 277, 130232 (2021).
- Cai, Q. Y., et al. Occurrence of nonylphenol and nonylphenol monoethoxylate in soil and vegetables from vegetable farms in the Pearl River Delta, South China. Archives of Environmental Contamination and Toxicology. 63 (1), 22-28 (2012).
- Wang, S. Y., et al. et al Migration and health risks of nonylphenol and bisphenol a in soil-winter wheat systems with long-term reclaimed water irrigation. Ecotoxicology and Environmental Safety. 158, 28-36 (2018).
- Gunther, K., Racker, T., Bohme, R. An isomer-specific approach to endocrine-disrupting nonylphenol in infant food. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (6), 1247-1254 (2017).
- Van Eerd, L. L., Hoagland, R. E., Zablotowicz, R. M., Hall, J. C. Pesticide metabolism in plants and microorganisms. Weed Science. 51 (4), 472-495 (2003).
- Hillebrands, L., Lamshoeft, M., Lagojda, A., Stork, A., Kayser, O. Evaluation of callus cultures to elucidate the metabolism of tebuconazole, flurtamone, fenhexamid, and metalaxyl-M in Brassica napus L., Glycine max (L.) Merr., Zea mays L., and Triticum aestivum L. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 68 (48), 14123-14134 (2020).
- Macherius, A., et al. Metabolization of the bacteriostatic agent triclosan in edible plants and its consequences for plant uptake assessment. Environmental Science & Technology. 46 (19), 10797-10804 (2012).
- Sun, J. Q., et al. Uptake and metabolism of nonylphenol in plants: Isomer selectivity involved with direct conjugation. Environmental Pollution. 270, 116064 (2021).
- Schymanski, E. L., et al. Identifying small molecules via high resolution mass spectrometry: communicating confidence. Environmental Science & Technology. 48 (4), 2097-2098 (2014).
- Moschet, C., Anumol, T., Lew, B. M., Bennett, D. H., Young, T. M. Household dust as a repository of chemical accumulation: new insights from a comprehensive high-resolution mass spectrometric study. Environmental Science & Technology. 52 (5), 2878-2887 (2018).
- Ren, Z., et al. Hydroxylated PBDEs and brominated phenolic compounds in particulate matters emitted during recycling of waste printed circuit boards in a typical e-waste workshop of South China. Environmental Pollution. 177, 71-77 (2013).
- de Wit, C. A. An overview of brominated flame retardants in the environment. Chemosphere. 46 (5), 583-624 (2002).
- Sun, J. Q., Chen, Q., Qian, Z. X., Zheng, Y., Yu, S. A., Zhang, A. P. Plant Uptake and Metabolism of e,4-Dibromophenol in Carrot: In Vitro Enzymatic Direct Conjugation. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66 (17), 4328-4335 (2018).
- Chibwe, L., Titaley, I. A., Hoh, E., Simonich, S. L. M. Integrated framework for identifying toxic transformation products in complex environmental mixtures. Environmental Science & Technology Letters. 4 (2), 32-43 (2017).
- Hollender, J., Schymanski, E. L., Singer, H. P., Ferguson, P. L. Nontarget screening with high resolution mass spectrometry in the environment: ready to go. Environmental Science & Technology. 51 (20), 11505-11512 (2017).
- Nafisi, M., Fimognari, L., Sakuragi, Y. Interplays between the cell wall and phytohormones in interaction between plants and necrotrophic pathogens. Phytochemistry. 112, 63-71 (2015).
- Zhang, Q., et al. Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants. Environmental Science & Technology. 53 (13), 7473-7482 (2019).
- Hou, X., et al.
