Summary
Mevcut protokol, bitkilerde 2,4-dibromofenol metabolitlerinin tanımlanması için basit ve etkili bir yöntemi açıklamaktadır.
Abstract
Toprak, çevreye atılan kirleticiler için önemli bir yutak olduğundan, mahsuller organik kirleticilere yoğun bir şekilde maruz kalabilir. Bu, kirletici birikmiş gıdaların tüketimi yoluyla potansiyel insan maruziyeti yaratır. Bitkilerde ksenobiyotiklerin alımını ve metabolizmasını aydınlatmak, insanlarda diyete maruz kalma riskinin değerlendirilmesi için gereklidir. Bununla birlikte, bu tür deneyler için, bozulmamış bitkilerin kullanımı, çeşitli faktörlerden etkilenebilecek uzun vadeli deneyler ve karmaşık numune hazırlama protokolleri gerektirir. Yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi (HRMS) ile birleştirilmiş bitki kallus kültürleri, mikrobiyal veya fungal mikro ortamdan kaynaklanan parazitleri önleyebildiğinden, tedavi süresini kısaltabildiğinden ve bozulmamış bitkilerin matris etkisini basitleştirebildiğinden, bitkilerde ksenobiyotiklerin metabolitlerinin doğru ve zaman kazandıran tanımlanması için bir çözüm sağlayabilir. Tipik bir alev geciktirici ve endokrin bozucu olan 2,4-dibromofenol, toprakta yaygın olarak bulunması ve bitkiler tarafından alım potansiyeli nedeniyle model madde olarak seçilmiştir. Burada, asepsi tohumlarından bitki kallusu üretildi ve steril 2,4-dibromofenol içeren kültür ortamına maruz bırakıldı. Sonuçlar, 120 saatlik inkübasyondan sonra bitki kallus dokularında sekiz 2,4-dibromofenol metabolitinin tanımlandığını gösterdi. Bu, 2,4-dibromofenolün bitki kallus dokularında hızla metabolize olduğunu gösterir. Bu nedenle, bitki kallus kültürü platformu, bitkilerde ksenobiyotiklerin alımını ve metabolizmasını değerlendirmek için etkili bir yöntemdir.
Introduction
Antropojenik faaliyetler 1,2 nedeniyle artan sayıda organik kirletici çevreye atılmıştırve toprak bu kirleticiler için önemli bir yutak olarak kabul edilmektedir 3,4. Topraktaki kirleticiler bitkiler tarafından alınabilir ve mahsul tüketimi yoluyla doğrudan insan vücuduna girerek gıda zincirleri boyunca potansiyel olarak daha yüksek trofik seviyeli organizmalara aktarılabilir ve sonuç olarak istenmeyen maruziyete yol açabilir 5,6. Bitkiler, detoksifikasyon için ksenobiyotikleri metabolize etmek için farklı yollar kullanır7; Ksenobiyotiklerin metabolizmasını aydınlatmak, bitkilerdeki kirleticilerin gerçek kaderini kontrol ettiği için önemlidir. Metabolitler yapraklar (atmosfere) veya kökler tarafından atılabildiğinden, maruziyetin çok erken aşamalarında metabolitlerin belirlenmesi, bu nedenle çok sayıda metaboliti test etme imkanı sağlar8. Bununla birlikte, bozulmamış bitkiler kullanılarak yapılan çalışmalar, çeşitli faktörlerden etkilenebilecek uzun süreli deneyler ve karmaşık numune hazırlama protokolleri gerektirir.
Bu nedenle bitki kallus kültürleri, tedavi süresini büyük ölçüde kısaltabildikleri için plantadaki ksenobiyotiklerin metabolizmasını incelemek için iyi bir alternatiftir. Bu kültürler mikrobiyal girişimi ve fotokimyasal bozunmayı dışlar, bozulmamış bitkilerin matris etkisini basitleştirir, yetiştirme koşullarını standartlaştırır ve daha az deneysel çaba gerektirir. Bitki kallus kültürleri, triklosan9, nonilfenol10 ve tebukonazol8'in metabolik çalışmalarında alternatif bir yaklaşım olarak başarıyla uygulanmıştır. Bu çalışmalar, kallus kültürlerindeki metabolik modellerin bozulmamış bitkilerdekilere benzer olduğunu göstermiştir. Bu çalışma, karmaşık ve zaman alıcı protokoller olmadan bitkilerde ksenobiyotiklerin metabolitlerinin verimli ve doğru bir şekilde tanımlanması için bir yöntem önermektedir. Burada, düşük yoğunluklu sinyallere sahip metabolitlerin analizi için yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi ile birlikte bitki kallus kültürlerinikullanıyoruz 11,12.
Bu amaçla, havuç (Daucus carota var. sativus) kallus süspansiyonları, 130 rpm ve 26 °C'de bir çalkalayıcıda 120 saat boyunca 100 μg/L 2,4-dibromofenole maruz bırakıldı. 2,4-dibromofenol, yıkıcı endokrin aktivitesi13 ve toprakta yaygın olarak görülmesinedeniyle seçilmiştir 14. Metabolitler ekstrakte edildi ve yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi ile analiz edildi. Burada önerilen protokol, iyonize olabilen diğer organik bileşik türlerinin bitki metabolizmasını araştırabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Havuç nasırının farklılaşması
NOT: Burada kullanılan tüm ekipmanları otoklavlayın ve tüm işlemleri UV ile sterilize edilmiş ultra temiz bir tezgahta gerçekleştirin.
- Tek tip havuç tohumlarını (Daucus carota var. sativus) 4 °C'de 16 saat boyunca deiyonize suya batırarak tohumları vernalize edin.
- Vernalize tohumları 20 dakika boyunca %75 etanol ile yüzey sterilize edin ve ardından aseptik koşullar altında steril deiyonize su ile üç kez durulayın.
- Tohumları 20 dakika boyunca% 20H2O2ile sterilize edin ve aseptik koşullar altında altı kez sterilize deiyonize su ile yıkayın.
- Tohumları% 1 agar-jel içeren hormonsuz MS ortamına (pH 5.8, 121 ° C'de 20 dakika otoklavlanmış) ekerek ve 26 ° C'de 16 saatlik bir fotoperiyot (350 μmol / m2s) ile 15 gün boyunca inkübe ederek aseptik olarak çimlendirin.
- Fidelerin hipokotil ve kotiledonunu küçük parçalara (0,5 cm) keserek eksplantları elde edin.
- Eksplantları, aseptik koşullar altında oksimon (2,4-diklorofenoksiasetik asit; 1 mg/L) ve fitokinin (6-benzilaminopurin; 0.5 mg/L) ile takviye edilmiş 15-20 mL aseptik MS ortamı içeren Petri kaplarına (tabak başına iki ila dört eksplant) dönüştürün.
- Nasırı indüklemek için eksplantları karanlıkta 26 °C'de 3-4 hafta inkübe edin.
- Steril bir neşter ve forseps kullanarak ilk eksplantlardan oluşan kallus dokularını (yaklaşık 1 cm çapında) ayırın.
NOT: Yeni oluşan kallus dokuları beyaz ila kremsi sarı renktedir ve ilk eksplantlara gevşek bir şekilde bağlanır.
2. 2,4-dibromofenol tedavisi
- 1 μg 2,4-dibromofenolü 10 mL aseptik sıvı MS ortamında çözün (2,4-dibromofenolün nihai konsantrasyonu 100 ppb, pH 5.6-7.0'dır).
- Aseptik koşullar altında hazırlanan 2,4-dibromofenol çözeltisini (adım 2.1'den itibaren) içeren cam şişelere 3 g taze havuç kallus (adım 1.8) ekleyin. Bunu 2,4-dibromofenol tedavisi olarak düşünün.
NOT: Cam şişeler otoklavlandı ve parafin film kullanılarak kapatıldı. - 2,4-dibromofenolün abiyotik bozunmasını değerlendirmek için yalnızca 2,4-dibromofenol çözeltisini (adım 2.1'de hazırlanan) içeren bir ortam kontrolü ekleyin.
- Herhangi bir potansiyel kontaminasyonu kontrol etmek için yalnızca havuç nasırını (2,4-dibromofenol çözeltisi yok) içeren boş bir kontrol ekleyin.
- 10 mL steril MS ortamına sadece 3 g taze toplanmış havuç nasır ekleyerek havuç içeren boş kontrolü hazırlayın.
- 2,4-dibromofenol tedavisini ve ortam ve boş kontrolleri 130 rpm ve 26 ° C'de karanlıkta 120 saat boyunca bir inkübatörde inkübe edin.
- 120 saatlik inkübasyondan sonra 2,4-dibromofenol tedavisinden ve kontrollerden numuneleri toplamak için cam şişeleri inkübatörden çıkarın.
NOT: Tüm örnekler üç nüsha halinde hazırlanmıştır.
3. Numune hazırlama
- 2,4-dibromofenol tedavisi ve kontroller için cam elyaf filtrelerle (0.45 μm) filtrasyon yaparak nasırı MS ortamından dikkatlice ayırın. Üç kez ultra saf suyla yıkadıktan sonra nasırı toplayın.
- Toplanan kallusu sıvı nitrojen ile dondurarak kurutun ve ardından toplanan kallusu (0,2 g) yüksek verimli bir doku öğütücü ile 70 Hz'de 3 dakika boyunca homojenize edin.
- Bir cam mikroşırınga ile 50 μL 25 mg / L vekil 4-n-NP-d4 ekleyerek ve ardından 1 dakika vorteksleyerek homojenize kallusu artırın.
- 2,4-dibromofenol ve metabolitleri çıkarmak için 30 dakika boyunca buzlu su ile doldurulmuş bir ultrasonicator (150 W, 40 kHz) içinde 5 mL metanol / su (1: 1, v / v) ile örnekleri sonikleştirin.
- Süspansiyonları 8.000 x g'de 4 °C'de 10 dakika santrifüjleyin ve süpernatanları pipetleyerek toplayın.
- Kallus örneği için ekstraksiyon işlemlerini üç kez tekrarlayın ve ekstraktları birleştirin.
- Ekstraktları 1 mL/dk akış hızına sahip hidrofilik lipofilik dengeli katı faz ekstraksiyonu (HLB SPE) kartuşlarından geçirin.
NOT: HLB SPE kartuşları, herhangi bir paraziti gidermek için 6 mL metanol ve 6 mL su ile sırayla ön işleme tabi tutulmuştur. - HLB SPE kartuşlarından 6 mL metanol geçirerek analitleri elute edin. Daha sonra, enstrümantal analiz için elde edilen eluentleri hafif bir nitrojen gazı akışı altında 1 mL'ye konsantre edin.
- 2,4-dibromofenol ve metabolitlerinin analizi için UPLC-Q-TOF-MS'ye 10 μL ortaya çıkan eluentleri enjekte edin15.
- Enstrümantal analizden önce tüm numuneleri 0,22 μm naylon membran ile filtreleyin.
4. Enstrümantal analiz
NOT: 2,4-dibromofenol ve metabolitlerinin analizleri, pozitif ve negatif iyon modunda çalışan bir elektrosprey iyonizasyonu (ESI) ile donatılmış bir mikro-OTOF-QII kütle spektrometresi ile kombinasyon halinde ultra performanslı bir sıvı kromatografı (UPLC) üzerinde gerçekleştirilmiştir.
- Kolon ısıtıcı kapısını açın ve kolon girişini enjeksiyon valfine ve kolon çıkışını kütle spektrometresinin girişine bağlayarak UPLC kolonunu takın.
NOT: 40 °C'de analitlerin ayrılması için bir C18 kolonu (50 mm x 2,1 mm; 1,7 μm partikül boyutu) kullanılmıştır. - Mobil faz A'yı (ultra saf su) ve mobil faz B'yi (kromatografi dereceli metanol), sırasıyla çözücü tüpleri A ve B'nin ucunu ilgili çözücü şişelerine sokarak cihaza bağlayın.
- Tüm mobil fazları (her biri için 500 mL) 0.22 μm'lik bir filtreden geçirin ve 30 dakikadan fazla sonikasyon yapın.
- Yazılım penceresinde, Enstrüman | Sıvı kromatogramının koşullarını düzenlemek için Giriş Yöntemi.
- Mobil faz B'nin gradyan koşullarını aşağıdaki gibi ayarlayın: 1.0 mL/dak'lık bir akış hızı; 0-0.5 dk,% 5; 0.5-3.5 dakika,% 5 ila% 50; 3.5-6.5 dk,% 50 ila% 100; 6.5-7 dakika, %100; 7-10 dakika, %100 ila %5.
- Numunelerin UPLC-Q-TOF-MS'ye enjeksiyon hızını 0,2 mL/dk olarak ayarlayın.
NOT: Numunenin enjeksiyonu, tam otomatik bir örnekleyici kullanılarak programlanır.
- Yazılım penceresinde MS Metodu'nu seçin ve ardından Q-TOF-MS parametrelerini ayarlayın: 8 L/dak'lık bir kurutma gazı (N2) akış hızı, 300-350 °C'lik bir sıcaklık; 4.500 V'luk bir kılcal voltaj; 5-45 V'luk bir çarpışma enerjisi; ve 40-800 Da tam tarama aralığı.
- Numune şişelerini seri numarasına göre numune tepsilerinin ilgili yerlerine yerleştirin ve numune tepsilerini numune odasına yeniden yerleştirin.
NOT: Numune tepsilerini düz tutun ve numune odasının kapısının kapalı olduğundan emin olun. - Yazılım penceresinde Dosya | Veritabanı oluşturmak için yeni. Veritabanını adlandırın.
- MS Dosyası | Giriş dosyası | Hacim enjekte edin.
- Dosya | Kaydet'i tıklayın.
- Çalıştır'ı seçin | Yazılım ana penceresinde başlatın ve ardından Örnek Verileri Al'ı seçin ve veri toplamak için örnek listeyi başlat çalıştırma penceresinde Tamam'a tıklayın.
NOT: Gerçek zamanlı kromatogram, Kromatogram | Veri toplama işlemi sırasında Gerçek Zamanlı Güncelleme. - Hedef veri satırını seçerek ve MS tarama kromatogramını görüntülemek için Kromatogram penceresine tıklayarak yazılımdaki verileri işleyin.
- Kromatogram penceresinde Görüntüle | TİC | ScanWaveDS | İzleme ekle | Kızının kütle spektrumlarını taramasını sağlamak için tamam.
- 2,4-dibromofenol tedavisinin kromatogramlarını ve kontrolleri karşılaştırarak metabolitleri tanımlayın.
- Metabolit adaylarını alıkonma süresi, kütle ve parçalanma paternlerine göre açıklayın16,17.
NOT: Metabolit adaylarının ana iyonlarının deneysel m/z değerleri ile karşılık gelen teorik m/z değerleri arasındaki kütle doğruluğu hatası 10 ppm'den az olmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Protokolün adımları Şekil 1'de gösterilmiştir. Protokolü takiben, 2,4-dibromofenol tedavisinden elde edilen havuç kallus ekstraktının kromatogramını kontrollerle karşılaştırdık ve 2,4-dibromofenol tedavisinde bulunan ancak kontrollerde bulunmayan sekiz farklı pik bulduk (Şekil 2). Bu, 2,4-dibromofenol ile muamele edilmiş havuç kallusunda toplam sekiz 2,4-dibromofenol metabolitinin (M562, M545, M661, M413, M339, M380, M424 ve M187) başarıyla tespit edildiğini gösterir. Ek olarak, 2,4-dibromofenol tedavisinin kromatogramında ana 2,4-dibromofenolün zirvesi (alıkonma süresi = 0.85 dakika) bulunmadı (Şekil 2), bu da 2,4-dibromofenolün havuç kallusunda hızla metabolize edildiğini gösteriyor.
Havuç kallusundaki 2,4-dibromofenol metabolitlerini tanımlamak için kullanılan kromatografik ve kütle bilgisi Tablo 1'de özetlenmiştir. Havuç kallusunda inkübe edilen 2,4-dibromofenol, glikoz (M562, M545, M661 ve M413) ve amino asitler (M339, M380 ve M424) ile doğrudan konjugasyon yoluyla metabolitlerin oluşumuna yol açtı. Örneğin, M413, dibutil ftalat (DBP) ve glikoza (C6H11O5) karşılık gelen m/z 250.8954 ve 163.1485'teparçalar üretti. M413 ayrıca pentoz veya heksoz eklenerek disakkarit konjugasyon metabolitleri M661, M545 ve M562 oluşturmak üzere metabolize edildi. M339, M380 ve M424'ün 2,4-dibromofenol alanin, 2,4-dibromofenol asetilalanin ve 2,4-dibromofenol asetillaspartik asit olduğu tahmin edildi, çünkü karakteristik nötr amino asit kaybına sahipler (C3H6NO2), asetilalanin (C5H88NO3) ve asetillaspartik asit (C6H8NO5), m/z 89.0932'de karşılık gelen fragmanları üreten, Sırasıyla 129.1140 ve 173.1235,15. Sunulan sonuçlar, bitki kallus kültürlerinin mahsullerdeki ksenobiyotiklerin metabolizmasını aydınlatmak için etkili ve güvenilir bir araç olarak kullanılabileceğini göstermektedir.
Şekil 1: Yöntem şeması. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: 2,4-dibromofenol için kromatogramlar (eklenen resim) ve 2,4-dibromofenolün metabolitleri. Bu rakam Sun ve ark.15'in izniyle uyarlanmıştır. Telif Hakkı (2018) Amerikan Kimya Derneği. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Metabolit | RT (dk) | ESI Modu | Gözlenen m/z |
Hesaplanan m/z |
Öngörülen formül | Parçalar (m/z) | Güven düzeyi | |||
| M562 Serisi | 0.7 | -H | 562.201 | 562.201 | C18H26Br2O10 | 250.8954(-DBP) | Seviye 2b | |||
| 170.9914(-BR) | MS, HANIM2 | |||||||||
| M545 Serisi | 1.6 | -H | 545.151 | 545.1506 | C17H22Br2O10 | 250.8954(-DBP) | Seviye 2b | |||
| 170.9914(-BR) | ||||||||||
| 528.1433(-OH) | MS, HANIM2 | |||||||||
| M661 Serisi | 2.9 | -H | 661.222 | 661.2228 | C21H26Br2O14 | 250.8954(-DBP) | Seviye 2b | |||
| 410.3274(-C15saat23O13) | MS, HANIM2 | |||||||||
| M413 Serisi | 4.1 | -H | 413.036 | 413.036 | C12H14Br2O6 | 250.8954(-DBP) | Seviye 1 | |||
| 163.1485(-C6saat11O5) | ||||||||||
| 207.8938(250-CO2) | Sentetik Standart, RT, MS, MS2 | |||||||||
| M339 Serisi | 5.2 | +H | 339.994 | 339.9886 | C9 H9Br2NO3 | 250.8954(-DBP) | Seviye 2b | |||
| 87.0773(-C3H6HAYIR2) | MS, HANIM2 | |||||||||
| M380 Serisi | 5.5 | -H | 380.01 | 380.0094 | C 11 H11Br2NO4 | 250.8954(-DBP) | Seviye 2b | |||
| 129.1140(-C5H8NO3) | MS, HANIM2 | |||||||||
| M424 Serisi | 5.8 | -H | 424.012 | 424.0189 | C12H11Br2NO6 | 250.8954(-DBP) | Seviye 2b | |||
| 173.1235(-C6H8HAYIR5) | MS, HANIM2 | |||||||||
| M187 Serisi | 6.1 | -H | 187.995 | 187.9988 | C6H5BrO2 | 109.1027(-BR) | Seviye 1 | |||
| 170.9914(-OH) | Otantik Standart, RT, MS, MS2 | |||||||||
Tablo 1: Havuç kallus ekstraktlarında keşfedilen 2,4-dibromofenol ve metabolitlerinin özeti. Bu tablo Sun ve ark.15'in izniyle uyarlanmıştır. Telif Hakkı (2018) Amerikan Kimya Derneği.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu protokol, bitkilerde ksenobiyotiklerin biyodönüşümünü verimli bir şekilde tanımlamak için geliştirilmiştir. Bu protokolün kritik adımı, bitki kallusunun kültürüdür. En zor kısım bitki nasırının farklılaşması ve bakımıdır, çünkü bitki nasırı kolayca enfekte olur ve bitki dokularına gelişir. Bu nedenle, kullanılan tüm ekipmanların otoklavlandığından ve tüm işlemlerin aseptik koşullar altında yapıldığından emin olmak önemlidir. Ototrofik büyüme ve aşırı gelişmeyi önlemek için bitki kallusunun farklılaşması ve bakımı karanlıkta yapılmalıdır. Ek olarak, MS ortamına takviye edilen fitohormonların dozu ve türleri, bitki türlerini dikkate alması gereken bitki kallusunun farklılaşması için kritik öneme sahiptir. Aşırı dozda fitohormonlar, kallusun vasküler bir sistem geliştirmesine neden olur, ancak yetersiz fitohormonlar, bitki kallusununfarklılaşmasını sınırlar 18. MS besiyeri ve fitohormon stokları taze olarak hazırlanmalıdır. Fitohormonların ve aseptik hipokotilin eklenmesinden önce MS ortamının otoklavlanması şiddetle tavsiye edilir.
Bozulmamış bitkilerde klorofil gibi pigmentler LC-HRMS ölçümlerinde genel bir sorundur19,20. Bitki kallusu aseptik hipokotilden elde edilir ve klorofil olmadan şeffaftır. Bu, bitki kallus kültürünün, bozulmamış bitkinin matris etkisini optimize edebileceği ve pigment giderme adımları olmadan kolay ama verimli bir numune hazırlama tekniği sunabileceği anlamına gelir. Bitki kallusunda ksenobiyotiklerin metabolitlerinin analizi, LC-HRMS ile hedeflenmemiş bir şekilde gerçekleştirilmiştir15. Hedefsiz analizle birleştirilen bitki kallus kültürü, metabolik bileşiklerin büyük ölçekli bir profilinin etkili bir şekilde tanımlanmasına olanak tanır. Bu avantajlar, yöntemi bitkilerde ksenobiyotiklerin metabolizmasının mekanik olarak anlaşılması için ideal hale getirir. Bununla birlikte, protokol için hala birkaç sınırlama vardır. Örneğin, protokol, karmaşık çevre koşulları nedeniyle yalnızca tarladaki bitkilerde meydana gelen fiili durum için bir referans olarak uygulanabilir. Ek olarak, farklı bitki kallusları farklı metabolik yetenekler sergilediğinden, ksenobiyotiklerin tanımlanmış metabolitleri kallus tipine göre değişebilir.
Bitkilerdeki kimyasalların metabolik dönüşümünü bilmek, güvenli gelişimleri ve uygulamaları için önemlidir. Burada önerilen yöntem, bitkilerde üretilen metabolitlerin taranması için verimli ve güvenilirdir ve besin zinciri transferi veya mahsullerin doğrudan diyet alımı yoluyla ekosistemler ve insan sağlığı için ilişkili riskin değerlendirilmesini destekleyebilir. Bu protokol, bitkilerde ksenobiyotiklerin kalıcılığını araştırabilir ve ortaya çıkan kirleticilerin taranmasına yardımcı olabilir. Daha az maliyet ve daha az zaman ve çaba ile tam metabolik kapasitesi göz önüne alındığında, bitki kallus kültürü, birçok bileşiğin metabolik davranışlarını karşılaştırmak ve ksenobiyotiklerin olası metabolitlerinin tahmini için bir veri tabanı oluşturmak için iyi bir araçtır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Acknowledgments
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (21976160) ve Zhejiang Eyaleti Kamu Refahı Teknolojisi Uygulama Araştırma Projesi (LGF21B070006) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2,4-dichlorophenoxyacetic acid | WAKO | 1 mg/L | |
| 20% H2O2 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10011218-500ML | |
| 4-n-NP, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| 4-n-NP-d4 | Pointe-Claire | ||
| 6-benzylaminopurine | WAKO | 0.5 mg/L | |
| 75% ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 1269101-500ML | |
| 7890A-5975 gas chromatography | Agilent | ||
| ACQULTY ultra-performance liquid chromatography | Waters | ||
| Amber glass vials | Waters | ||
| Artificial climate incubator | Ningbo DongNan Lab Equipment Co.,LTD | RDN-1000A-4 | |
| Autoclaves | STIK | MJ-Series | |
| C18 column | ACQUITY UPLC BEH | ||
| Centrifuge | Thermo Fisher | ||
| DB-5MS capillary column | Agilent | ||
| Dichloromethane | Sigma-Aldrich | 40071190-4L | |
| Freeze dryer | SCIENTZ | ||
| High-throughput tissue grinder | SCIENTZ | ||
| Methanol | Sigma-Aldrich | ||
| MicrOTOF-QII mass spectrometer | Bruker Daltonics | ||
| Milli-Q system | Millipore | MS1922801-4L | |
| Murashige & Skoog medium | HOPEBIO | HB8469-7 | |
| N-hexane | Sigma-Aldrich | H109658-4L | |
| Nitrogen blowing instrument | AOSHENG | MD200-2 | |
| NP isomers, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| Oasis HLB cartridges | Waters | 60 mg/3 mL | |
| Research plus | Eppendorf | 100-1000 µL | |
| Seeds of Little Finger carrot (Daucus carota var. sativus) | Shouguang Seed Industry Co., Ltd | ||
| Shaking Incubators | Shanghai bluepard instruments Co.,ltd. | THZ-98AB | |
| Solid phase extractor | AUTO SCIENCE | ||
| Ultrasound machine | ZKI | UC-6 | |
| UV-sterilized ultra-clean workbench | AIRTECH |
References
- Chakraborty, P., et al. Baseline investigation on plasticizers, bisphenol A, polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals in the surface soil of the informal electronic waste recycling workshops and nearby open dumpsites in Indian metropolitan cities. Environmental Pollution. 248, 1036-1045 (2019).
- Abril, C., Santos, J. L., Martin, J., Aparicio, I., Alonso, E. Occurrence, fate and environmental risk of anionic surfactants, bisphenol A, perfluorinated compounds and personal care products in sludge stabilization treatments. Science of the Total Environment. 711, 135048 (2020).
- Xu, Y. W., et al. Determination and occurrence of bisphenol A and thirteen structural analogs in soil. Chemosphere. 277, 130232 (2021).
- Cai, Q. Y., et al. Occurrence of nonylphenol and nonylphenol monoethoxylate in soil and vegetables from vegetable farms in the Pearl River Delta, South China. Archives of Environmental Contamination and Toxicology. 63 (1), 22-28 (2012).
- Wang, S. Y., et al. et al Migration and health risks of nonylphenol and bisphenol a in soil-winter wheat systems with long-term reclaimed water irrigation. Ecotoxicology and Environmental Safety. 158, 28-36 (2018).
- Gunther, K., Racker, T., Bohme, R. An isomer-specific approach to endocrine-disrupting nonylphenol in infant food. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (6), 1247-1254 (2017).
- Van Eerd, L. L., Hoagland, R. E., Zablotowicz, R. M., Hall, J. C. Pesticide metabolism in plants and microorganisms. Weed Science. 51 (4), 472-495 (2003).
- Hillebrands, L., Lamshoeft, M., Lagojda, A., Stork, A., Kayser, O. Evaluation of callus cultures to elucidate the metabolism of tebuconazole, flurtamone, fenhexamid, and metalaxyl-M in Brassica napus L., Glycine max (L.) Merr., Zea mays L., and Triticum aestivum L. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 68 (48), 14123-14134 (2020).
- Macherius, A., et al. Metabolization of the bacteriostatic agent triclosan in edible plants and its consequences for plant uptake assessment. Environmental Science & Technology. 46 (19), 10797-10804 (2012).
- Sun, J. Q., et al. Uptake and metabolism of nonylphenol in plants: Isomer selectivity involved with direct conjugation. Environmental Pollution. 270, 116064 (2021).
- Schymanski, E. L., et al. Identifying small molecules via high resolution mass spectrometry: communicating confidence. Environmental Science & Technology. 48 (4), 2097-2098 (2014).
- Moschet, C., Anumol, T., Lew, B. M., Bennett, D. H., Young, T. M. Household dust as a repository of chemical accumulation: new insights from a comprehensive high-resolution mass spectrometric study. Environmental Science & Technology. 52 (5), 2878-2887 (2018).
- Ren, Z., et al. Hydroxylated PBDEs and brominated phenolic compounds in particulate matters emitted during recycling of waste printed circuit boards in a typical e-waste workshop of South China. Environmental Pollution. 177, 71-77 (2013).
- de Wit, C. A. An overview of brominated flame retardants in the environment. Chemosphere. 46 (5), 583-624 (2002).
- Sun, J. Q., Chen, Q., Qian, Z. X., Zheng, Y., Yu, S. A., Zhang, A. P. Plant Uptake and Metabolism of e,4-Dibromophenol in Carrot: In Vitro Enzymatic Direct Conjugation. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66 (17), 4328-4335 (2018).
- Chibwe, L., Titaley, I. A., Hoh, E., Simonich, S. L. M. Integrated framework for identifying toxic transformation products in complex environmental mixtures. Environmental Science & Technology Letters. 4 (2), 32-43 (2017).
- Hollender, J., Schymanski, E. L., Singer, H. P., Ferguson, P. L. Nontarget screening with high resolution mass spectrometry in the environment: ready to go. Environmental Science & Technology. 51 (20), 11505-11512 (2017).
- Nafisi, M., Fimognari, L., Sakuragi, Y. Interplays between the cell wall and phytohormones in interaction between plants and necrotrophic pathogens. Phytochemistry. 112, 63-71 (2015).
- Zhang, Q., et al. Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants. Environmental Science & Technology. 53 (13), 7473-7482 (2019).
- Hou, X., et al.
