0 Aufrufe • 4:51 Min. • April 30th, 2023
- Beginnen Sie mit gewaschenen pelletierten Würmern und fügen Sie Lysepuffer hinzu, der SDS, ein Detergens, und DTT, ein Reduktionsmittel, enthält. Dadurch wird die schützende Kutikula des Wurms abgebaut und der Körper ist der Zelldissoziation ausgesetzt. Vermeiden Sie eine längere Exposition gegenüber dem Lysepuffer, um die Zelllyse und den Zelltod zu minimieren.
Entfernen Sie anschließend die Lysereagenzien mit mehreren Waschgängen mit Kälteisolationspuffer. Es ist wichtig, dass dieser Puffer die richtige Osmolarität hat, um den Zelltod zu verhindern. Verwenden Sie ein Protease-Enzym, um Zell-zu-Zell-Verbindungen aufzubrechen. Unterstützen Sie den Homogenisierungsprozess zusammen mit mechanischer Energie, indem Sie die Mischung gegen die Tubenwand pipettieren.
Fügen Sie Medien hinzu, die Serum enthalten, um die Enzymreaktion zu stoppen, und Antibiotika, um eine Kontamination zu verhindern. Pelletieren und waschen Sie die Probe mehrmals, um den größten Teil des Schmutzes zu entfernen.
Legen Sie das Rohr schließlich auf Eis, um eine Schwerkraftsedimentation zu ermöglichen. Ablagerungen, einschließlich Reste der Kutikula oder Zellklumpen, setzen sich ab, während dissoziierte Zellen
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