C. elegans Blastomer-Dissektion: Eine Methode zur Entfernung der Eierschale und zur Dissoziation embryonaler Zellen

- Verwenden Sie für diese Dissektion zwei Mikropipetten: eine mit einer Öffnung, die etwa so breit wie eine Eizelle ist, und eine mit einer doppelt so breiten Öffnung, und eine Reihe von Lösungen, die in Vertiefungen angeordnet sind, um einen schnellen Transfer zwischen ihnen zu ermöglichen.

Zuerst legen Sie adulte Hermaphroditen in eine Eisalzlösung, die osmotisch ausgeglichen ist, um ein Platzen der Embryonen zu verhindern. Schneiden Sie die Würmer in zwei Hälften, um die sich entwickelnden Embryonen freizusetzen.

Identifizieren Sie dann Embryonen im Zweizellstadium. Diese Zellen sind die Blastomere, die durch die Teilung der befruchteten Eizelle gebildet werden. Verwenden Sie die Mikropipette mit der größeren Öffnung, um einen Embryo in eine Hypochloritlösung, Bleichmittel, zu übertragen, die beginnt, die schützende Eierschale aufzubrechen.

Nach nur 40 bis 55 Sekunden übertragen Sie den Embryo auf das Wachstumsmedium von Shelton (SGM). Waschen Sie jeden Embryo kurz in zwei Vertiefungen SGM, um alle Spuren des Bleichmittels zu entfernen, bevor Sie ihn in eine dritte Vertiefung legen.

Verwenden Sie nun die kleinere Mikropipette, um den Embryo wiederholt zu pipettieren und die mech