Gezielte Leberablation: Induktion des Hepatozytentods mit Metronidazol bei transgenen Zebrafischlarven

- Lösen Sie Metronidazol in Eiwasser auf, das das Lösungsmittel DMSO enthält, und fügen Sie Phenylthioharnstoff hinzu, das die Pigmentbildung in Embryonen verhindert. Übertragen Sie einige Larven des entsprechenden Alters auf Behandlungs- und Kontrollplatten. Geben Sie anschließend die gewünschte Konzentration der Metronidazollösung auf die Testplatte und Eiwasser, das DMSO enthält, auf die Kontrollplatte.

Lassen Sie die Larven in beiden Platten bei 28 Grad Celsius wachsen. Die transgenen Larven produzieren Nitroreduktase nur in Hepatozyten, die das Metronidazol in ein zytotoxisches Medikament umwandelt, was zum Tod nur der Zielhepatozyten führt. Nehmen Sie nach der Behandlung die Metronidazollösung von der Behandlungsplatte und waschen Sie die Embryonen mit Eiwasser.

Fügen Sie Tricain hinzu, um die Larven zu betäuben, und untersuchen Sie sie unter einem Epifluoreszenzmikroskop auf schwere Hepatozytenablation - die Zerstörung von Leberzellen. Sie werden bei behandelten Personen eine viel kleinere Leber beobachten als bei Personen der Kontrollgruppe. Im Beispielprotokoll werden wir Metronidazol für die Hepatozytenablation in transgenen Zebrafischlarven verwenden, um die Leberregener