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Der interstitielle Flüssigkeitsdruck (IFP) ist die Kraft, die von der Flüssigkeit in den Räumen zwischen den Zellen in einem Gewebe ausgeübt wird. Zuerst wird eine tumortragende Maus mit 2 % Isofluoran, gemischt mit Sauerstoff, anästhesiert und auf der Computertomographie- oder CT-IFP-Roboterplattform immobilisiert. Injizieren Sie nun in die laterale Schwanzvene einer Maus Liposomen, die mit einem Kontrastmittel verkapselt sind, um den Tumor sichtbar zu machen. Bringen Sie das Tier in seinen Käfig zurück und lassen Sie es sich erholen.
Befestigen Sie die anästhesierte Maus zwischen 48 und 72 Stunden nach der Injektion auf der CT-IFP-Plattform und wählen Sie einige gleichmäßig verteilte Positionen auf dem Tumor für die Messung des IFP aus. Spülen Sie anschließend die Nadel des IFP-Systems vor dem Einführen mit einer Heparin-Kochsalzlösung. Bringen Sie die Nadel auf die gewählte Position und führen Sie sie in das Tumorgewebe ein.
Erfassen Sie nun Bilder an allen Positionen und messen Sie den IFP mit der Software. Das IFP im Tumor ist in der Regel aufgrund seiner dichten Beschaffenheit, seiner abnormalen Blutgefäße und seines defekten Lymphsystems hoch. Dies kann zur Ansammlung von Liposomen in der Tumorperipherie führen. Im folgenden Protokoll werden wir die Technik zur Messung des IFP in einem soliden Tumor demonstrieren.
Um das IFP zu messen, kleben Sie das Tier auf die CT-IFP-Roboterplattform, so dass der Tumor immobilisiert und für das CT-IFP-Robotersystem zugänglich ist. Führen Sie einen anatomischen Mikro-CT-Scan durch, wie gerade gezeigt, laden Sie dann die Daten vor dem Einsetzen der Nadel in die CT-IFP-Roboterausrichtungssoftware und passen Sie das Fenster und die Wasserwaage an, um den Tumor zu visualisieren. Klicken Sie auf den Rand des Tumors in einem beliebigen Bild, gefolgt von der Auswahl einer zweiten Randposition auf der angrenzenden Seite des Tumors.
Die Software berechnet eine Reihe von Positionen entlang einer linearen Linie zwischen den beiden Punkten. Wählen Sie dann die X-, Y- und Z-Koordinaten für eine Reihe von fünf bis acht gleichmäßig verteilten Positionen aus der Liste aus. Spülen Sie anschließend die Nadel des IFP-Systems mit einer salzhaltigen Heparinlösung und geben Sie die ersten vorgegebenen Nadelpositionen in die XYZ-Koordinatenfenster der CT-IFP-Robotersteuerungssoftware ein.
Drücken Sie die Go-Taste, um den Roboter an den gewünschten Ort zu bewegen. Klicken Sie dann für jede Nadelposition nacheinander auf die Schaltfläche Nadel einführen, um die Nadel in das Gewebe einzuführen. Klemmen Sie den PE-20-Schlauch zusammen und lösen Sie ihn, um eine gute Flüssigkeitskommunikation zwischen der IFP-Nadel und dem Gewebe zu bestätigen, und beobachten Sie, dass die IFP-Messung ansteigt und zum Voreinklemmwert in der IFP-Erfassungssoftware zurückkehrt. Führen Sie abschließend einen anatomischen CT-Scan mit eingeführter Nadel durch und klicken Sie am Ende des Scans auf die Schaltfläche Nadel zurückziehen, um die Nadel aus dem Gewebe zu entfernen.
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