Dichtegradientenzentrifugation: Eine Methode zur Isolierung von CLL-Zellen aus peripherem Blut

- Bei Patienten mit chronischer lymphatischer Leukämie (CLL) nehmen die B-Zell-Lymphozyten im Knochenmark und im Blut signifikant zu. Um diese CLL-Zellen aus einer Blutprobe zu isolieren, behandeln Sie die Probe zunächst mit einem humanen B-Zell-Anreicherungscocktail, der B-Zellen durch Negativselektion trennt. Die Antikörper im Cocktail erkennen und vernetzen spezifisch die Antigene, die von Nicht-B-Zellen und Erythrozyten exprimiert werden, und bilden dichte Komplexe.

Als nächstes schichten Sie die Probe über ein Dichtegradientenmedium mit einer für die Lymphozytenisolierung optimalen Dichte. Bei der anschließenden Zentrifugation trennen sich die verschiedenen Blutbestandteile aufgrund von Schwankungen in ihrer Dichte relativ zum Gradientenmedium. Die RBC-Nicht-B-Zell-Komplexe mit höherer Dichte setzen sich durch das Medium ab und bilden ein Pellet. Die am wenigsten dichte Plasmafraktion bildet die oberste Schicht. Die weniger dichten CLL-Zellen bilden eine weiße Schicht an der Grenzfläche zwischen Plasma-Dichte und Medium.

Übertragen Sie die weiße Schicht vorsichtig in eine frische Tube. Zentrifugieren Sie erneut, um ein Pellet mit gereinigten CLL-Zellen zu erhalten. Im folgende