Name: Die orale Verabreichung von Rotenon mit einem Gavage und Bildanalyse von Alpha-Synuclein Einschlüsse in den enterischen Nervensystem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-26T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Lernen Sie die orale Gavage von Rotenon bei Mäusen zur Analyse von Alpha-Synuclein-Akkumulation im enterischen Nervensystem. Diese Methode erlaubt präzise Studien zur Neurotoxizität und Parkinson-Pathologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Pedro Barrie de la Maza-Stiftung unterstützt diese Arbeit.

1) Intragastric Verwaltung von Rotenon <ol><li> Wiegen des Tieres. </li><li> Berechnen Sie das Gesamtvolumen der Rotenon / Fahrzeug-Lösung benötigt. In diesem Fall 0,01 ml pro Gramm des Tieres Gewicht. </li><li> Laden Sie eine 1 ml-Spritze mit den zuvor berechneten Volumen von Rotenon Lösung (0,625 mg / mL Rotenon, 4% Carboxymethylcellulose und 1,25% Chloroform) oder Vehikel-Lösung (4% Carboxymethylcellulose und 1,25% Chloroform). In diesem Fall entspricht es einem 5 mg / kg Rotenon Dosis. </li><li> Pick-up mit der Maus und die Maus am Schwanz mit einer Hand, erstrecken sich die Haut des Halses, indem Sie es mit den ersten zwei Fingern der anderen Hand. </li><li> Sobald der Kopf zwischen den beiden Fingern fixiert ist, lehnen sie gegen die Handfläche und drehen Sie ihn auf den Kopf. Fix der Schwanz mit dem vierten und fünften Finger. </li><li> Keeping den Kopf nach hinten, drücken Sie den Gaumen mit der Maus in den Mund zu öffnen. Vorsichtig einführen Magensonde in den Mund. Es ist wichtig, eine Magensonde Nadel und nicht einer regulären Nadel verwenden. Langsam bewegen sich die Sonde in Richtung des Magens weit genug. Dadurch wird vermieden, Material immer in der Lunge. </li><li> Verwalten Sie die Rotenon Lösung oder Fahrzeug durch sanftes Drücken der Embolus. Wenn Sie fertig sind, langsam extrahieren Sie die Magensonde. </li><li> Legen Sie das Tier wieder in einem anderen Käfig, bis alle Tiere aus einem Käfig fertig sind. </li></ol> 2) Immunfärbung Procedures <ol><li> Nach der Behandlung werden die Mäuse betäubt mit Ketamin 100 mg / kg und Xylazin 10 mg / kg ip und intrakardial mit 4% Paraformaldehyd in PBS perfundiert. </li><li> Die Eingeweide werden dann durch Dissektion extrahiert, und in 15% Saccharose über Nacht. Am nächsten Tag wird das Gewebe auf 30% Saccharose überführt und erneut über Nacht bei 4 ° C. </li><li> Das Gewebe wird dann in Tissue-tek gelegt und in einem -80 ° C Gefrierschrank bis zur Verwendung. </li><li> Mit einem Kryostaten, 20 micron Darm Querschnitte Superfrost Objektträger übertragen. </li><li> Blocking und Immunfärbung Verfahren mit anti-βIII-Tubulin-und anti-alpha-Synuclein-Antikörper sind dann wie zuvor beschrieben 9 durchgeführt. </li></ol> 3) Alpha-Synuclein Inclusion Image Analysis Es wird empfohlen, eine externe Person nicht bewusst images 'Herkunft der Analyse durchführt. Daher sollten die Daten zu kodifizieren. Die Bildanalyse erfolgte mit FIJI Software. <ol><li> Öffnen Sie die konfokale Bilddatei. Dann teilen Sie die Kanäle, so dass es möglich ist, auf jedem Kanal unabhängig voneinander arbeiten. </li><li> Schließen Sie die Kanäle, die nicht gehen, um zu verwenden, und wählen Sie Analyse&gt; Set Scale und setzen Sie die Pixelgröße auf 1. Setzen Sie die bekannte Strecke bis 0,13 (dieser wird auf der objektiven und der Auflösung abhängen) und klicken Sie auf global. Die Größe des Bildes wird nun in Mikron gezeigt werden. </li><li> Wählen Sie Alpha-Synuclein-Kanal und wählen Ganglion, stellen Sie sicher, dass die Auswahl das Ganglion umschließt in allen Schichten. </li><li> Drücken Sie Bild&gt; Duplizieren, um das Bild zu duplizieren. Mit dem Ganglion gewählt, nur ein Bild der Größe des Ganglion dupliziert werden. </li><li> Drücken Sie Bearbeiten&gt; Löschen Outside. Der Teil des Bildes außerhalb der gewählten Region wird schwarz. </li><li> Duplizieren Sie das Bild erneut in späteren Schritten, wie gut die Verfahren ging zu bestimmen. Bilder, die ein hohes Signal-Rausch-Verhältnis in den Hintergrund haben, sollten nicht für die Bildanalyse verwendet werden. </li><li> Wählen Sie Bild&gt; Anpassen&gt; Schwellenwert und wählen Sie dann MaxEntropy. Dann über die Scheiben in das freigestellte Bild und das Original zu bewegen, um sicherzustellen, dass das Verfahren gut gelaufen ist. Die entropischen Schwelle wählt eine Intensität Signalpegel auf das Bild Histogramm und nur die Pixel mit Intensitäten größer als dieser Schwellenwert wird in einem weißen über schwarzes Bild angezeigt basiert. </li><li> Wählen Sie Prozess, dann auf glatte klicken. Dieser Schritt wandelt die pixeligen Kanten der Bilder in glatte Kanten. </li><li> Wählen Sie Prozess, dann auf Binary klicken, und wählen Sie Binary. Das Bild wird als ein schwarzer über Weiß-Bild angezeigt werden. </li><li> Duplizieren Bild zum nächsten Schritt auf dem duplizierten Bild durchzuführen. </li><li> Klicken Sie auf Analysieren&gt; Analyze Partikel. Dann wählen Sie Zeigen: Outlines und klicken Sie auf Auswerten. Der Rest der Einstellungen sollten leaved in Verzug ist. Diese Funktion erkennt die Gesamtzahl der Pixel mit einem Signal und diejenigen, die gruppiert werden. Die Gesamtfläche der Pixel mit Signal plus der Anzahl der Gruppen von Pixeln und die mittlere Größe gemeldet werden. </li><li> Vergleichen Sie und wählen Sie das größte Segment, das gut passt. Die Scheibe markiert. </li><li> Kopieren Sie die Daten-Tabelle mit der gesamten Alpha-Synuclein Oberfläche, die Anzahl der Einschlüsse und die mittlere Partikelgröße. Fügen Sie die Daten in eine Excel-Tabelle oder Anmerkungen an anderer Stelle. </li><li> Return to FIJI und finden Sie die zuvor ausgewählten Slice in der β-Tubulin-Kanal, und wählen Sie es. </li><li> Wählen Ganglion Bereich und klicken Sie auf Analysieren und wählen Sie dann messen. Eine andere Tabelle erscheint und zeigt dieGesamtfläche des Ganglion. </li><li> Entpacken Sie die Daten aus der Tabelle der Excel-Tabelle in der Nähe des Alpha-Synuclein-Messung oder kopieren Sie es an anderer Stelle. </li><li> Mit Excel, teilen sich die verschiedenen Parameter in der alpha-Synuclein Messung durch das Ganglion Oberfläche erhalten, um insgesamt alpha-Synuclein Oberfläche und die Einbeziehung Anzahl von Ganglienzellen Größe normiert zu erhalten. </li></ol> 4) Repräsentative Ergebnisse Wenn eine Magensonde Verwaltung Protokoll korrekt durchgeführt wird, die Nachteile für das Tier sind minimal. Die Behandlung mit dieser Konzentration von Rotenon ermöglicht eine lokale Wirkung von Rotenon auf die ENS ohne Rotenon-Spiegel im Blut und keine Hemmung des Muskel oder Gehirn mitochondrialen Komplex I auch nach 1,5 Monaten der Behandlung (siehe Abbildung 1). Wenn Bildanalyse korrekt durchgeführt wird, eine strenge Analyse von Alpha-Synuclein-Muster sollte möglich sein. Es gibt verlässliche Daten über den Gesamtbetrag von Alpha-Synuclein (Gesamtfläche), alpha-Synuclein-Muster in der Zelle (Anzahl der Einschlüsse) und das Vorhandensein von Alpha-Synuclein Einschlüsse (Einbeziehung Größe) (Abbildung 2). <img src="/files/ftp_upload/2123/2123fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Motor Dysfunktion bei Rotenon behandelten Mäuse ohne Nachweis von Rotenon in Blut-oder ZNS. A, Standard (50 ng / mL) und Chromatogramm vom Gehirn Proben von 20, 10 und 5 mg / kg behandelten Mäuse. B und C, die Quantifizierung von Rotenon-Spiegel im Blut (B) und CNS (C). B-, Blut-Level 1 , 2 und 3 Stunden nach der Behandlung. Mäuse in drei Gruppen (n = 3) wurden geteilt und mit 2,5, 5, 10 und 20 mg / kg Rotenon (n = 3) wurden 300 ul Blut 1, 2 und 3 Stunden nach Rotenon Verwaltung extrahiert und zusammen gebündelt HPLC-Analyse. C, wurden die Mäuse für eine Woche behandelt werden einmal täglich mit 5 (n = 3), 10 (n = 3) und 20 (n = 1) mg / kg Rotenon, Gehirn und Hirnstamm 1 extrahiert wurden und 2 Stunden nach letzten Verabreichung und vorbereitet für die HPLC-Analyse. D, mitochondriale Komplex I-Aktivität in den Muskeln und Gehirn Proben von 1,5 Monate behandelten Mäuse. <img src="/files/ftp_upload/2123/2123fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Lokal verwaltete Rotenon induziert alpha-Synuclein Phosphorylierung, Akkumulation und Aggregation mit Gliose in ENS Ganglien. (Maßstab 20 mu m). A, B, C, anti βIII-Tubulin, alpha-Synuclein und DAPI-Färbung in Zwölffingerdarm (B) und Ileum ( A, C) Abschnitte. Pfeil in B, induziert 1,5 Monate der Behandlung eine erhöhte Alpha-Synuclein punktförmige Muster innerhalb enterale Nervensystem Ganglien, wenn bis 3 Monate kontrolliert (A) verglichen. Pfeil in C, 3 Monate Behandlung induzierte Bildung von größeren alpha-Synuclein Einschlüsse (ø&gt; 6 um). D, Immunfluoreszenzfärbung mit anti-alpha-Synuclein, Thioflavin S und DAPI. Pfeil in D, nur 3 Monate behandelten Mäuse zeigten Aggregation dieser größeren alpha-Synuclein Ansammlungen. E, E ', E'', Bildanalyse Quantifizierung Schritte. E, immungefärbt Beispiel Bild in Quantifizierung zeigt eine ENS Ganglion eingesetzt gegen alpha Synuclein zeigen verschiedene Einschlüsse. E ', beispielsweise der Bild für Bild-Analyse-Protokoll erhalten. E'', Überschneidungen zwischen einigen der ursprünglichen Einschlüsse (grün) und die Darstellung nach der Durchführung des Protokolls (gelbe Linien) erhalten. FG, Quantifizierung des Experiments gezeigt, in AC wurde mit Hilfe der automatischen Segmentierung und Entropie-basierte Schwellwertverfahren. Single-Sternchen, P &lt;0,05, und doppelklicken Sie Sternchen, P &lt;0,01. F, jede Spalte entspricht insgesamt alpha-Synuclein Oberfläche / ganglion Oberfläche. G repräsentiert jede Spalte Gesamtzahl von Alpha-Synuclein Einschlüsse / ganglion Oberfläche. Alle Diagramme zeigen Mittelwerte ± SEM

<ol><li>Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastric+alpha-synuclein+immunoreactive+inclusions+in+Meissner%27s+and+Auerbach%27s+plexuses+in+cases+staged+for+Parkinson%27s+disease-related+brain+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner's and Auerbach's plexuses in cases staged for Parkinson's disease-related brain pathology.</a> Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).</li>
<li>Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+an+immunohistochemical+study+of+Lewy+body-containing+neurons+in+the+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: an immunohistochemical study of Lewy body-containing neurons in the enteric nervous system.</a> Acta Neuropathol. 79, 581-583 (1990).</li>
<li>Wakabayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restricted+occurrence+of+Lewy+bodies+in+the+dorsal+vagal+nucleus+in+a+patient+with+late-onset+parkinsonism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism.</a> J Neurol Sci. 165, 188-191 (1999).</li>
<li>Braak, H., Sastre, M., Bohl, J. R., de Vos, R. A., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+lesions+in+dorsal+horn+layer+I%2C+involvement+of+parasympathetic+and+sympathetic+pre-+and+postganglionic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: lesions in dorsal horn layer I, involvement of parasympathetic and sympathetic pre- and postganglionic neurons.</a> Acta Neuropathol. 113, 421-429 (2007).</li>
<li>Braak, H., Ghebremedhin, E., Rub, U., Bratzke, H., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+in+the+development+of+Parkinson%27s+disease-related+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Stages in the development of Parkinson's disease-related pathology.</a> Cell Tissue Res. 318, 121-134 (2004).</li>
<li>Gorell, J. M., Johnson, C. C., Rybicki, B. A., Peterson, E. L., Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+Parkinson%27s+disease+with+exposure+to+pesticides%2C+farming%2C+well+water%2C+and+rural+living%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">The risk of Parkinson's disease with exposure to pesticides, farming, well water, and rural living.</a> Neurology. 50, 1346-1350 (1998).</li>
<li>Semchuk, K. M., Love, E. J., Lee, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease+and+exposure+to+agricultural+work+and+pesticide+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease and exposure to agricultural work and pesticide chemicals.</a> Neurology. 42, 1328-1335 (1992).</li>
<li>Butterfield, P. G., Valanis, B. G., Spencer, P. S., Lindeman, C. A., Nutt, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+antecedents+of+young-onset+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Environmental antecedents of young-onset Parkinson's disease.</a> Neurology. 43, 1150-1158 (1993).</li>
<li>Pan-Montojo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+of+Parkinson%27s+disease+pathology+is+reproduced+by+intragastric+administration+of+rotenone+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Progression of Parkinson's disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice.</a> PLoS One. 5, e8762-e8762 (2010).</li>
<li>Sherer, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+toxicity+in+rotenone+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson's disease.</a> J Neurosci. 23, 10756-10764 (2003).</li>
<li>Bove, J., Prou, D., Perier, C., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxin-induced+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Toxin-induced models of Parkinson's disease.</a> NeuroRx. 2, 484-494 (2005).</li>
<li>Inden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurodegeneration+of+mouse+nigrostriatal+dopaminergic+system+induced+by+repeated+oral+administration+of+rotenone+is+prevented+by+4-phenylbutyrate%2C+a+chemical+chaperone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neurodegeneration of mouse nigrostriatal dopaminergic system induced by repeated oral administration of rotenone is prevented by 4-phenylbutyrate, a chemical chaperone.</a> J Neurochem. 101, 1491-1504 (2007).</li>
</ol>

Francisco Pan-Montojo hat ein Patent angemeldet für dieses Tiermodell (Anmeldenummer PCT / EP 2009/005688).

Intragastric Verwaltung wurde bereits 12 durchgeführt. Doch nach Inden Manuskript, Rotenon verabreicht wurde in 0,5% Carboxymethylcellulose-Natriumsalz (CMSS) allein aufgelöst. Rotenon ist ein High liphophylic Substanz. Daher kann Rotenon nicht in 0,5% CMSS aufgelöst allein sein und Niederschlag, wenn getan. Der Einsatz von Chloroform entsteht eine gleichmäßig verteilte Rotenon Federung vermeiden Niederschlag. Außerdem wird durch den höheren Konzentrationen des Pestizids in der CMSS ist das endgültige Volumen...

<table><tbody><tr><td>Rotenon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3313.1</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Carboxymethylcellulose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5678</td><td>Deutschland</td></tr><tr><td>Gavage 1,2 mm x 60 mm</td><td>Unimed</td><td></td><td>Schweiz</td></tr><tr><td>LSM 510</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FIJI</td><td>http://pacific.mpi-cbg.de</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

die orale verabreichung von rotenon mit einem gavage und bildanalyse von alpha-synuclein einschlüsse in den enterischen nervensystem

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

In der Parkinson-Krankheit (PD)-Patienten, folgt der damit verbundenen Pathologie ein charakteristisches Muster mit unter anderem die enterale Nervensystem (ENS) 1,2, der Riechkolben (OB), der Nucleus dorsalis des Vagus (DMV) 3, die intermediolateralen Kern des Rückenmarks 4 und der Substantia nigra, die die Grundlage für die neuropathologischen Inszenierung der Krankheit 4,5. Die ENS und der OB sind die am stärksten exponierten Nerven Strukturen und die ersten, die betroffen sein. Interessanterweise hat PD um Pestizidbelastung 6-8 in Verbindung gebracht. Hier zeigen wir im Detail zwei Methoden in unserer vorherigen Studie 9 verwendet. Um die Effekte von Rotenon lokal handeln auf der ENS zu analysieren, wir Rotenon mit einer Magensonde zur einjährigen C57/BL6-Mäusen verwaltet. Rotenon ist eine weit verbreitete Pestizid, das stark hemmt mitochondrialen Komplex I 10. Es ist sehr lipophilen und schlecht im Magen-Darm-Trakt 11 absorbiert. Unsere Ergebnisse zeigten, dass die Gabe von 5 mg / kg Rotenon nicht hemmen mitochondrialen Komplex I-Aktivität in den Muskeln oder dem Gehirn. So, was darauf hindeutet, dass die Verwendung unserer Verwaltung Methode Rotenon nicht über die hepatoportal und war ausschließlich auf die ENS tätig. Hier zeigen wir eine Methode, um Pestizide mit Hilfe eines Magensonde und die Bildanalyse-Protokoll verwendet, um die Auswirkungen des Pestizids in alpha-Synuclein Anreicherung in der ENS analysieren zu verwalten. Der erste Teil zeigt eine Methode, intragastrische Verabreichung von Pestiziden (Rotenon) ermöglicht bei einer gewünschten genaue Konzentration. Die zweite Methode ist eine semi-automatische Bildanalyse-Protokoll zu alpha-Synuclein Anreicherung in der ENS analysieren mit Hilfe eines Bildanalyse-Software.

Parkinson-Krankheit ist die Exposition gegenüber Pestiziden in Zusammenhang gebracht. Hier zeigen wir eine Methode, um Pestizide mit einer Magensonde in der gewünschten Konzentration und eine Methode, um ihre Wirkung in alpha-Synuclein Anreicherung zu analysieren, die enterale Nervensystem liefern.

Die orale Verabreichung von Rotenon mit einem Gavage und Bildanalyse von Alpha-Synuclein Einschlüsse in den enterischen Nervensystem

Bei Patienten mit Parkinson-Krankheit (PD) folgt die damit verbundene Pathologie einem charakteristischen Muster, das unter anderem das enterische Nervensystem (ENS) betrifft 1,2, ...

Die Symptome der Parkinson-Krankheit, einschließlich motorischer und Sprechstörungen, resultieren aus einer verminderten Aktivität dopaminerge Zellen im Gehirn. Das enterische Nervensystem und die Riechbülbe sind die am stärksten exponierten Nervenstrukturen und die ersten, die betroffen sind. Die Parkinson-Krankheit wurde mit einer Exposition gegenüber Pestiziden in Verbindung gebracht.Um die Wirkungen von Pestiziden auf das enterische Nervensystem zu analysieren, wird die Gabe des Pestizids Roone an Mäuse mittels oraler Gavage durchgeführt. Anschließend erfolgt eine intrakardiale Perfusion der Mäuse mit 4 % Paraform, Aldehyd Gehirn und enterischem Nervensystem. Das Gewebe wird entnommen, aufbereitet und mittels Immunfärbung auf Proteine, die mit der Parkinson-Krankheit (PD) assoziiert sind, untersucht.Beta-tubulin-3- und Alpha-Synuclein-Bilder, die mittels konfokaler Mikroskopie aufgenommen wurden, zeigen die Anreicherung von Alpha-Synuclein in Neuronen des enterischen Nervensystems bei Tieren, die Pestiziden ausgesetzt waren. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der systemischen Verabreichung von Rotenon besteht darin, dass mit dieser Technik sicher

oral-administration-rotenone-using-gavage-image-analysis-alpha

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieses Video zeigt die Injektion von Alpha-Synuclein-Fibrillen in eine Maus, um eine Neuroinflammation zu induzieren. Die Fibrillen werden intraperitoneal in eine transgene Maus injiziert, die mutierte Alpha-Synuclein-Proteine exprimiert. Beim Erreichen des Zentralnervensystems dringen die Fibrillen in die Neuronen ein und induzieren die Aggregation der mutierten Proteine. Die Aggregate breiten sich auf benachbarte Neuronen, Mikroglia und Astrozyten aus. Die Erkennung der Aggregate löst bei...

Induktion von Neuroinflammation bei Mäusen durch Injektion von Alpha-Synuclein-Fibrillen

Es wird ein ELISA beschrieben, der einen neuartigen quantitativen Ansatz bietet. Er erkennt spezifisch krankheitsassoziiertes α-Synuclein (αSD) in einem transgenen Mausmodell (M83) der Synucleinopathie unter Verwendung mehrerer Antikörper entweder gegen die Serin129-phosphorylierte αS-Form oder den C-terminalen Teil des Proteins.

Nachweis von krankheitsassoziierten α-Synuclein durch verbesserte ELISA im Gehirn von transgenen Mäusen Expression Menschen A53T Mutierte α-Synuclein

Dieses Manuskript beschreibt, wie die virale vektorvermittelte lokale Genabgabe eine attraktive Möglichkeit bietet, Transgene im zentralen Nervensystem zu exprimieren.  Das Protokoll beschreibt alle wichtigen Schritte zur Durchführung einer viralen Vektorinjektion in die Substantia nigra der Ratte, um ein auf viralen Vektoren basierendes Tiermodell für die Parkinson-Krankheit zu entwickeln.

Entwicklung eines Alpha-Synuklein Based Rattenmodell für Parkinson-Krankheit durch stereotaktische Injektion eines rekombinanten Adeno-assoziierten viralen Vektor,

Periphere Injektion von alpha-Synuclein - Fibrillen in das Peritoneum oder die Zunge von Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) Mäuse, der humanen alpha-Synuclein mit der familial A53T - Mutation exprimieren und Glühwürmchen - Luciferase kann Neuropathologie, einschließlich neuroinflammation induziert in ihrem Zentralnervensystem.

Biolumineszenz-Bildgebung von Neuroinflammation in transgenen Mäusen nach peripherer Inokulation von Alpha-Synuclein

Hier stellen wir eine automatisierte Methode zur semi-quantitativen Bestimmung der dopaminergen Neuronenzahl in der Rattensubantia nigra pars compacta vor.

Semi-quantitative Bestimmung der dopaminergen Neuronendichte in der Substantia Nigra von Nagetiermodellen mittels automatisierter Bildanalyse

In diesem Artikel zeigen wir, wie man ein Sieben-Punkte-Scoring-System verwendet, um Veränderungen der dopaminergen Neuronen-Dendritenmorphologie bei C. eleganskonsistent zu quantifizieren. Dieses System ist für die Analyse dopaminerger Neurodegenerationsassays unter Verwendung genetischer, chemischer und altersbasierter Modelle neurodegenerativer Erkrankungen vorgesehen.

Quantifizierung der Dopaminergen Neuron morphologische Veränderung und Degeneration bei Caenorhabditis elegans

Diese Arbeit analysiert die Vektordosis und die Expositionszeit, die erforderlich sind, um Neuroinflammation, Neurodegeneration und motorische Beeinträchtigung in diesem präklinischen Modell der Parkinson-Krankheit zu induzieren. Diese Vektoren, die das menschliche α-Synuclein kodieren, werden in die Substantia nigra geliefert, um die mit der Parkinson-Krankheit verbundene Synuclein-Pathologie zu rekapitulieren.

Analyse des Parkinson-Mausmodells, das durch Adeno-assoziierte virale Vektoren induziert wird, die menschliches α-Synuclein kodieren

Eine bequeme Schwerkraft-gefütterte Perfusionsmethode zur histologischen Analyse des zentralen Nervensystems der Maus wird vorgestellt. Der immunfluoreszierende Nachweis von phosphoryliertem α-Synuclein wird in einem Mausmodell der Parkinson-Krankheit demonstriert. Diese Arbeit beschreibt auch umfassend die transkardialen Perfusions-, Dissektions-, Gewebegefrier- / Einbettungs- und gefrorenen Schnittschritte.

Eine schwerkraftgespeiste transkardiale Perfusionsmethode zur histologischen Analyse des zentralen Nervensystems der Maus

Das vorliegende Protokoll beschreibt ein Verfahren zur intranasalen Verabreichung von α-Synuclein-Aggregaten. Diese Methode gibt Aufschluss über die α-Synuclein-Ausbreitung von der Riechschleimhaut zum Riechkolben bei der Parkinson-Krankheit.

Technik zur intranasalen Verabreichung von α-Synuclein-Aggregaten

Dieser Artikel beschreibt im Detail, ein Protokoll zur in utero elektroporieren die Hirnrinde und im Hippocampus bei E14.5 bei Mäusen. Wir zeigen auch, dass dies eine wertvolle Methode, um Dendriten und Dornen in diesen beiden Hirnregionen zu untersuchen ist.

Visualisierung und genetische Manipulation von Dendriten und Dornen in der Maus Hirnrinde und im Hippocampus mit<em&gt; In utero</em&gt; Die Elektroporation

Lernen Sie die orale Gavage von Rotenon bei Mäusen zur Analyse von Alpha-Synuclein-Akkumulation im enterischen Nervensystem. Diese Methode erlaubt präzise Studien zur Neurotoxizität und Parkinson-Pathologie.

Die orale Verabreichung von Rotenon mit einem Gavage und Bildanalyse von Alpha-Synuclein Einschlüsse in den enterischen Nervensystem (Video) | JoVE Journal

Die orale Verabreichung von Rotenon mit einem Gavage und Bildanalyse von Alpha-Synuclein Einschlüsse in den enterischen Nervensystem

Weitere Videos entdecken