Isolierung mehrerer Zelltypen aus einem Mausgehirn durch mechanische Homogenisierung

Beginnen Sie damit, die Komponenten des Tissue-Grinders auf Eis zu legen. Dieses Gerät besteht aus einem Mörser und zwei Stößeln mit unterschiedlichen Durchmessern.

Gießen Sie einen gekühlten Salzpuffer in den Mörser und fügen Sie dann Mäusehirngewebe hinzu.

Der Puffer hält das osmotische Gleichgewicht aufrecht und bewahrt so die Zellstruktur und -funktion.

Mahlen Sie das Gewebe mit mehreren sanften Bewegungen mit dem Stößel mit kleinerem Durchmesser, der das Gewebe mechanisch in kleinere Stücke schert.

Streichen Sie anschließend mit dem Stößel mit größerem Durchmesser, um die weitere Zerlegung des Gewebes in seine einzelnen Zellen zu erleichtern.

Die Mischung in ein Röhrchen geben und zentrifugieren.

Entfernen Sie den Überstand.

Fügen Sie gekühltes Salz, Puffer und Wirbel hinzu, um die Zellklumpen und das Myelin aufzubrechen.

Fügen Sie als Nächstes ein Dichtegradientenmedium und eine Zentrifuge hinzu.

Aufgrund von Unterschieden in Form und Masse siedeln sich Zellen in der unteren Schicht an, während sich Ablagerungen und Myelin in der oberen Schicht ansammeln.

Entsorgen Sie den Überstand.

Fügen Sie eine geeignete Lösung hinzu, um eine mehrzellige Suspension für die weitere Verwend