Isolierung mononukleärer Zellen aus dem Gehirn von Mäusen: Eine Dichtegradienten-Zentrifugationstechnik zur Isolierung von im Gehirn ansässigen mononukleären Zellen

Mononukleäre Zellen im Gehirn, bestehend aus Lymphozyten und Monozyten, spielen eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung der Gehirnfunktion und der Homöostase.

Um diese mononukleären Zellen zu isolieren, nehmen Sie zunächst ein frisch entnommenes Mäusegehirn, das mit Kochsalzlösung durchblutet ist.

Die Perfusion ermöglicht die Entfernung von Blut und seinen Bestandteilen aus den Blutgefäßen, wodurch in den nachfolgenden Schritten die Isolierung von im Gehirn ansässigen Immunzellen ermöglicht wird.

Spülen Sie nun das Gehirn mit geeigneten Medien aus, um anhaftende rote Blutkörperchen zu entfernen. Nach dem Spülen wird es zerkleinert, um kleine Taschentuchstücke zu erhalten.

Homogenisieren Sie die Gewebestücke, um eine Suspension aus einzelnen Zellen und Zellfragmenten zu erhalten.

Zu dieser Suspension fügen Sie dann gekühltes Medium und geeignetes Dichtegradientenmedium in geeigneten Volumina hinzu, um ein Gradientenmedium mit niedriger Dichte zu bilden.

Fügen Sie als Nächstes ein bestimmtes Volumen eines Gradientenmediums mit hoher Dichte hinzu. Das Verlaufsmedium mit hoher Dichte bildet unten eine separate Schicht, wodurch ein diskontinuierlicher Dichtegradient entsteht.