Visualisierung von Vesikelmotilitäten in Neuronen mittels Fluoreszenzbildgebung

Nehmen Sie das gewünschte Plasmid in serumfreien Medien ein. Dieses Plasmid kodiert vesikelspezifische Proteine mit fluoreszierenden Tags.

Nehmen Sie in einem anderen Röhrchen das Transfektionsreagenz in serumfreiem Medium verdünnt.

Mischen Sie die beiden Lösungen und inkubieren Sie.

Das Transfektionsreagenz verbindet sich mit dem Plasmid und bildet einen Komplex.

Nehmen Sie eine Vertiefung mit adhärenten Neuronen in den Medien mit Serum. Fügen Sie die Komplexe hinzu und inkubieren Sie. Der Komplex erleichtert den Eintritt des Plasmids in die Zelle.

Entsorgen Sie das Medium, um nicht internalisierte Komplexe zu entfernen.

Fügen Sie frische Medien hinzu und inkubieren Sie dann.

Das Plasmid gelangt in den Zellkern, um transkribiert zu werden, und wird dann in vesikelspezifische fluoreszierende Proteine übersetzt, die die Vesikel in den Neuronen markieren.

Nehmen Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop unter kontrollierter Temperatur Bilder in bestimmten Zeitintervallen auf.

Um die Bilder zu analysieren, definieren Sie Tracking-Parameter.

Identifizieren Sie das interessierende Vesikel und notieren Sie seine Koordinaten in jedem der Bilder.

Kompilieren Sie die Daten, um die Bewegung des Ves