Eine Prellung Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

Die Autoren dieses Videos sind Dr. VOR Krishna, leitender Arzt in der Abteilung für Neurowissenschaften, Abteilung für Neurochirurgie an der Medical University of South Carolina, Dr. Mark Kendi, Professor für Neurowissenschaften an der Medical University of South Carolina und Karrierewissenschaftler am South Carolina VA Medical Center, und Hampton Andrews, Student im zweiten Jahr am College of Medicine an der Medical University of South Carolina. Dieses Video zeigt die Vorbereitung eines Tieres auf einem sterilen Feld für die Operation, den chirurgischen Eingriff selbst und die Methoden der postoperativen Versorgung. Zunächst müssen alle chirurgischen Instrumente und Verbrauchsmaterialien vor der Einrichtung des Operationsfeldes autoklaviert werden.

Wenn Sie mehr als einen Eingriff durchführen, stellen Sie sicher, dass Sie für jedes Tier zusätzliche Instrumente autoklavieren. Reinigen Sie anschließend den Operationsbereich und alle Komponenten mit Alkoholtupfern. Sobald das Operationsfeld vorbereitet ist, legen Sie alle Ihre chirurgischen Instrumente auf ein steriles Tuch.

Wir werden das heutige Verfahren anhand eines erwachsenen weiblichen Sprays demonstrieren. Dolly-Ratte. Bringen Sie Ihre Ratten einige Stunden vor dem Eingriff ins Labor.

Verabreichen Sie mindestens eine Stunde vor dem Eingriff kurz vor der Anästhesie 1,5 Milliliter 0,006 Milligramm Buprenorphin subkutan. Geben Sie 0,1 Milliliter subkutanes Arol in einer Dosierung von vier Milligramm pro Kilogramm. Dann betäuben Sie die App mit einer intraperitonealen Injektion von 90 Milligramm pro Kilogramm Ketamin und warten Sie, bis das Tier eingeschlafen ist.

Palpieren und markieren Sie den markanten Dornfortsatz T 10 in der Brustwirbelsäule. Rasieren Sie den Bereich um die Markierung herum mit einem Elektrorasierer. Sterilisieren Sie dann den Bereich dreimal mit Betadine-Lösung, positionieren Sie die Ratte bequem auf dem Operationsfeld und stellen Sie sicher, dass sie sich auf dem Heizkissen befindet.

Bestätigen Sie die Anästhesie mit dem Schwanzkneifen. Die Aufrechterhaltung der Gegentraktion begann mit einem etwa vier Zentimeter langen Schnitt mit einer Skalpellklinge mit der Nummer 10, die auf der Markierung T 10 zentriert war. Schneiden Sie das lose darunterliegende Bindegewebe heraus und legen Sie die Muskeln und Bänder frei, die die Wirbelsäule umgeben.

Verwenden Sie Retraktoren, um die Haut und das lose Bindegewebe zu trennen. Diese Muskeln und Bänder freizulegen. Fahren Sie fort, um Faszien und Muskelschichten vorsichtig und geduldig von den Dornfortsätzen und Lamina von T 9 bis T 11 zu präparieren.

Verwenden Sie Retraktoren, um den Muskel und die Faszie vom Knochen zu trennen und die Wirbelsäule freizulegen, während der Dornfortsatz von T neun scharf stabilisiert wird. Präparieren Sie das interspinöse Band zwischen T neun und T 10 mit einer kleinen Schere. Wiederholen Sie diesen Vorgang für das interspinöse Band zwischen T 10 und T 11.

Führen Sie vorsichtig die Teilung der Bänder durch das Ligamentum flavum durch und führen Sie mit feinen rohen Jores vorsichtig eine stückweise bilaterale Laminektomie bei T 10 durch. Achten Sie darauf, dass während der Knochenresektion kein Abwärtsdruck auf den Thekalsack ausgeübt wird. Entfernen Sie die Lamina und den Dornfortsatz von T 10 vollständig. Sobald das Rückenmark freigelegt und von Knochentrümmern befreit ist, bringen Sie die Ratte in Position auf der Stereotaxie-Plattform.

Verwenden Sie stereotaktische Klemmen, um die Wirbelsäule zu immobilisieren, indem Sie die lateralen Aspekte des Wirbelkörpers T 11 einklemmen, gefolgt von den lateralen Aspekten des Wirbelkörpers T neun. Bestätigen Sie nach dem Sichern der Wirbelsäule die Einstellungen am computergesteuerten Impaktor. Unser Modell nutzt eine Geschwindigkeit von vier Zentimetern pro Sekunde bis zu einer Tiefe von zwei Millimetern.

Verlängern Sie die Spitze des Schlagkörpers und senken Sie ihn in eine Position, in der Sie nur das Rückenmark berühren, und ziehen Sie die Spitze zurück. Senken Sie dann den Schlagkörper um zwei Millimeter ab. Achten Sie darauf, die Position über dem Kabel beizubehalten.

Feuern Sie nun den Kolben ab, um eine schwere Prellverletzung zu verursachen. Nimm die Ratte aus den stereotaktischen Klammern. Üben Sie dann sanften Druck mit einem Wattestäbchen-Applikator aus, um eine Blutstillung zu erreichen.

Mit einer Achtertechnik werden Muskel- und Faszienschichten mit resorbierbaren Nähten zusammengenäht. Verschließen Sie nun die Haut mit mindestens zwei kleinen Klammern. Sobald der Eingriff abgeschlossen ist, setzen Sie die Ratten für etwa 24 Stunden nach der Operation in eine warme Umgebung.

Sobald die Tiere vollständig wach sind, verabreichen Sie fünf Milliliter Kochsalzlösung, 1,5 Milliliter Buprenorphin und 0,1 Milliliter Atri. Alle subkutan fahren Sie in den nächsten 48 Stunden zweimal täglich mit Buprenorphin und sieben Tage lang einmal täglich mit Atri fort. Die Blase sollte dreimal täglich manuell exprimiert werden, bis die Blasenfunktion zurückkehrt.

Dies wird durch weniger als zwei Milliliter Urin am frühen Morgen angezeigt. Ausdrücke für drei aufeinanderfolgende Tage. Die Tiere sollten während dieser Zeit auch auf Anzeichen einer Infektion untersucht werden.

Dazu gehören eitriges Blut, Ausfluss oder übler Geruch im Urin sowie verminderte Aktivität, Gewichtsverlust und Probleme mit der Wundheilung. Wenn festgestellt wird, dass eine Erhöhung der Dosierung oder die Wiederaufnahme von Antibiotika erforderlich ist, haben Sie gerade gesehen, wie man bei Ratten eine überlebensfähige schwere Rückenmarksverletzung hervorruft. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, das Zielniveau des Rückenmarks für jede Ratte konsistent zu lokalisieren.

Entfernen Sie auch alle Knochenfragmente von der Laminektomiestelle, um andere mögliche Verletzungsmechanismen zu reduzieren. Stellen Sie sicher, dass die Ratte bequem in den stereotaktischen Klemmen positioniert ist, und überwachen Sie die Atmung während des gesamten Eingriffs ständig. Überprüfen Sie das Gewicht des Tieres jeden Tag nach dem Eingriff.

Dies geschieht, um nach Infektionen, Appetitproblemen, Hautschäden und nach einer Rückenmarksverletzung zu suchen. Vielen Dank für das Anschauen unseres Videos und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.