Name: Hohe Auflösung Elektronenmikroskopie der Helicobacter pylori Cag Typ IV-Sekretionssystem Pili Produziert in variierenden Bedingungen von Iron Verfügbarkeit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: Erfahren Sie hochauflösende Elektronenmikroskopie des Cag-T4SS in Helicobacter pylori unter variierenden Eisenbedingungen. Diese Methode ermöglicht die Visualisierung bakterieller Virulenzfaktoren.

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Diese Forschung wurde unterstützt durch den Department of Veterans Affairs Career Development Award 1IK2BX001701 und den CTSA Award UL1TR000445 vom National Center for Advancing Translational Sciences. Der Inhalt liegt ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und stellt nicht notwendigerweise die offizielle Meinung des National Center for Advancing Translational Sciences oder der National Institutes of Health dar. Rasterelektronenmikroskopie-Experimente wurden zum Teil mit Hilfe der VUMC Cell Imaging Shared Resource durchgeführt, die durch NIH-Zuschüsse CA68485, DK20593, DK58404, DK59637 und EY08126 unterstützt wurde.

1. H. pylori Wachstum bei unterschiedlichen Bedingungen von Iron Verfügbarkeit und Co-Kultur mit Menschen Magenepithelzellen <ol><li> Wählen H. pylori-Stamm PMSS1 für diese Untersuchungen, weil es ein intaktes cag Pathogenität Insel und drückt eine IV-Sekretionssystem Funktionieren Typ. Auch verwenden einen isogenen Cage Mutante (PMSSI Δ Cage) als Negativkontrolle. Wachsen Bakterien auf TSA-Platten mit 5% Schafblut (Blut-Agar-Platten) für 24 h ergänzt war, bei 37 ° C in Gegenwart von 5% CO 2. HINWEIS: Bereiten Reagenzien und montieren Materialien wie in der Materialien und Geräte Tabelle skizziert. Endkonzentrationen für jedes Reagenz ist in Klammern aufgeführt. </li><li> Kratzen Bakterien von der Platte mit einem sterilen Wattestäbchen und impfen in modifizierte Brucellabrühe aus den Komponenten (siehe Materialien und Geräte Tabelle) und mit Cholesterin ergänzt. Kulturen über Nacht bei 37 inkubieren° C in Raumluft mit 5% CO 2, ergänzt mit 200 Umdrehungen pro Minute (rpm) schüttelt. HINWEIS: Cholesterin anstelle von fötalem Rinderserum auf die Tatsache zurückzuführen, dass Serum-Komplex verwendet; mit zahlreichen Quellen von Nährstoffen Eisen wie Häm, die Variabilität der Ergebnisse verursacht. </li><li> Am Tag der Kultivierung bakterieller, Samen AGS menschlichen Magen-Epithelzellen (ATCC CRL-1739) auf Poly-D-Lysin-behandelten Deckgläschen in 12-Well-Platten (ca. 1 x 10 5 Zellen pro Vertiefung). </li><li> Am folgenden Tag, verdünnte Bakterienkulturen bis zu einer OD600 von 0,3 in modifizierten Brucellabrühe allein oder mit 100 &amp; mgr; M FeCl 3, 200 &amp; mgr; M Dipyridyl (ein synthetisches Eisen-Chelator) oder 200 uM Dipyridyl plus 250 &amp; mgr; M FeCl 3 ergänzt. Diese Kulturen für 4 Stunden bei 37 ° C inkubieren in Raumluft mit 5% CO 2, ergänzt mit Schütteln bei 200 Upm. </li><li> Zentrifuge Bakterien bei 1.000 xg, um Zellen zu sammeln und die Überstände zu entfernen, bevor Resuspendieren in ein gleiches Volumen frischer modifiziert Brucella-Brühe, ergänzt mit Cholesterin. Maßnahme OD600 der Kultur (OD 600 = 1,0 = 5,5 x 10 8 Zellen / ml) und Bakterien in den Epithelzellen in einer Multiplizität der Infektion (MOI) von 20: 1. Führen serielle Verdünnungen und Platte Bakterienzellen auf Blutagarplatten, um bakterielle Zelllebensfähigkeit zu beurteilen. </li><li> Inkubieren H. pylori und AGS menschlichen Magen-Epithelzellen Co-Kulturen für 4 Stunden bei 37 ° C in Gegenwart von 5% CO 2 in statischen Bedingungen vor dem Durchführen der Rasterelektronenmikroskopie (SEM) Probenvorbereitung. </li></ol> 2. SEM Probenvorbereitung zur H. Visualisieren pylori Cag-T4SS Pili <ol><li> Entfernen H. pylori und AGS Co-Kulturen aus dem Inkubator und dekantieren Kulturüberstand (außer für IL-8 ELISA). Vorsichtig mit 0,05 M Natriumcacodylat-Puffer (pH 7,4), drei Mal waschen. Fix Proben für 2-4 Stunden bei Raumtemperatur in einer Lösung von 2,0% Paraformaldehyd, 2,5% Glutaraldehyd und 0,05 M Natriumcacodylatpuffer. Nach der primären Fixierung, waschen Proben dreimal mit 0,05 M Natriumcacodylatpuffer. </li><li> Zuführen Sekundärfixation mit 0,1% Osmiumtetroxid in 0,05 M Natriumcacodylatpuffer in zwei aufeinanderfolgenden 10 min Fixierungsschritte. Nach sekundäre Fixierung, waschen Proben dreimal mit 0,05 M Natriumcacodylatpuffer. </li><li> Nach der primären und sekundären Fixierung, Dehydratisierung Proben durch aufeinanderfolgende Waschen mit steigenden Konzentrationen von Ethanol gemäß Tabelle 1. </li><li> Nach Ethanol-Dehydratisierung, führen drei sequentielle Wasch von flüssigem Kohlendioxid. Dann trockenen Proben an einem kritischen Punkt mit einem kritischen Punkt Trockner bei einer Temperatur von 31,1 ° C und einem Druck von 1073 PSI. </li><li> Berg Deckgläser auf Aluminium SEM Proben Stubs und malen Sie mit einer dünnen Linie von kolloidalem Silber an der Probenkante geeignete Erdung zu erreichen und zu vermeiden Lade während SEM-Bildgebung. </li><li> Coat Proben mit 5 nmGold-Palladium mit einem Sputter-Mantel Maschine Probe Sekundärelektronensignal und Kanteneffekt zu erhöhen. </li></ol> 3. Imaging Parameter für die hochauflösende SEM Analysen <ol><li> Ansicht Proben mit einem Feldemissions-Gun Rasterelektronenmikroskop (FEG-SEM). </li><li> Bild in einem Hochvakuumbetrieb bei einem Arbeitsabstand von 5-10 mm. </li><li> Stellen Sie die Beschleunigungsspannung bis 5 kV. </li><li> Stellen Punktgröße auf 2-2,5. </li><li> Kippen Sie die Probe zwischen 15-25 Grad, um eine bessere Sicht auf die Wirt-Pathogen-Schnittstelle zu erreichen. </li><li> Priorisieren Abbilden Bakterien haft zu den Kanten der Epithelzellen bei hoher Vergrößerung Betrachtung, da diese Bereiche der Wirt-Pathogen-Wechselwirkungen sind für die Pili-bildenden Bakterien angereichert. </li></ol> 4. Statistische Analysen zu Pili Quantifizierungen auswerten <ol><li> Analysieren H. pylori CAG T4SS Pili mit ImageJ Software Anzahl von Pili / Zelle sowie Prozent der Zellen zu quantifizieren zeigt die piliated pheNOTYPE pro Erklärung unten. </li><li> Offene mikroskopische Aufnahme Dateien in ImageJ Software. Identifizierung Pili als Strukturen zwischen der Bakterienzelle und Wirtszelle mit einheitlicher Breite (10-13 nm) und Länge (60-150 nm) gebildet. HINWEIS: Die Pilus Struktur auf WT Bakterienstämme vorhanden, aber abwesend isogenen Stämme wie Δ Cage Mutantenstämme, die eine Inaktivierung des Gens die Haupt ATPase, die Befugnisse Typ IV Sekretion Pilus-Zusammenbau kodiert Hafen ist. </li><li> Kalibrieren Sie das Messwerkzeug durch Ziehen einer Linie mit der Geraden Werkzeug und dann auf der Registerkarte &quot;Analysieren&quot;. Wählen Sie &quot;Scale&quot; aus dem Dropdown-Menü und geben Sie den Vergrößerungs bar Wert in das Feld &quot;bekannte Strecke&quot; und stellen Sie die Einheit der Länge in der entsprechenden Einstellung (nm). Klicken Sie auf &quot;OK&quot;. </li><li> Messen Sie Cag-T4SS Pili mit der geraden Linie Werkzeug, um über die Länge oder Breite des Pilus ziehen und drücken Sie &quot;Strg-M&quot;, um jeden Pilus messen. Beachten Sie eine Dialogbox mit den gemessenen Werten. Notieren Sie diese Werte oder Kopieren und Einfügen in ein Tabellenkalkulationsprogramm. </li><li> Verwenden Sie die Länge und Breite Parameter vorher festgelegten 24, Missachtung Features, die passen nicht in das Profil der Cag-T4SS. Dann quantifizieren die Anzahl der Pili basierend auf Werten, die in den 10 bis 13 nm Breite und 60 bis 150 nm Länge Cutoffs sind. </li><li> Analysieren Sie den Quantifizierung von Pili statistisch durch zweiseitigen Student t-Test mit GraphPad Prism Software. </li></ol> 5. Optional: Auswertung der IL-8-Sekretion mit Pilus Produktion Korrelieren <ol><li> Mit Überstände aus Schritt 2.1, führen Sie eine IL-8 ELISA gemäß den Herstellerangaben mit dem Kit (siehe Materialien und Ausstattungstabelle). </li><li> Analysieren Sie den IL-8 durch Wirtszellen sezerniert und berechnen die prozentuale IL-8 Induktion nach WT PMSS1 allein im Medium gezüchtet. Statistische Analysen mit zweiseitigen Student t-Test mit GraphPad Prism software. </li></ol>

<ol><li>Cover, T. L., Blaser, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori in health and disease.</a> Gastroenterology. (6), 1863-1873 (2009).</li>
<li>Sycuro, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptidoglycan+crosslinking+relaxation+promotes+Helicobacter+pylori%27s+helical+shape+and+stomach+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Peptidoglycan crosslinking relaxation promotes Helicobacter pylori's helical shape and stomach colonization.</a> Cell. 141 (5), 822-833 (2010).</li>
<li>Kodaman, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+Helicobacter+pylori+coevolution+shapes+the+risk+of+gastric+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Human and Helicobacter pylori coevolution shapes the risk of gastric disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (4), 1455-1460 (2014).</li>
<li>Tegtmeyer, N., Wessler, S., Backert, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+cag-pathogenicity+island+encoded+type+IV+secretion+system+in+Helicobacter+pylori+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Role of the cag-pathogenicity island encoded type IV secretion system in Helicobacter pylori pathogenesis.</a> FEBS J. 278 (8), 1190-1202 (2011).</li>
<li>Fischer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+and+molecular+mode+of+action+of+the+Helicobacter+pylori+Cag+type+IV+secretion+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Assembly and molecular mode of action of the Helicobacter pylori Cag type IV secretion apparatus.</a> FEBS J. 278 (8), 1203-1212 (2011).</li>
<li>Odenbreit, S., Puls, J., Sedlmaier, B., Gerland, E., Fischer, W., Haas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translocation+of+Helicobacter+pylori+CagA+into+gastric+epithelial+cells+by+type+IV+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion.</a> Science. 287 (5457), 1497-1500 (2000).</li>
<li>Bourzac, K., Guillemin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori-host+cell+interactions+mediated+by+type+IV+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori-host cell interactions mediated by type IV secretion.</a> Cell Microbiol. 7 (7), 911-919 (2005).</li>
<li>Bronte-Tinkew, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+cytoxin-associated+gene+A+activates+the+signal+transducer+and+activator+of+transcription+3+pathway+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori cytoxin-associated gene A activates the signal transducer and activator of transcription 3 pathway in vitro and in vivo.</a> Cancer Res. 69 (2), 632-639 (2009).</li>
<li>Johnson, E. M., Gaddy, J. A., Cover, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+Helicobacter+pylori+triggered+by+contact+with+gastric+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Infect.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Alterations in Helicobacter pylori triggered by contact with gastric epithelial cells.</a> Front. Cell. Infect. Microbiol. (2), 17(2012).</li>
<li>Rohde, M., Puls, J., Buhrdorf, R., Fischer, W., Haas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+sheathed+surface+organelle+of+the+Helicobacter+pylori+cag+type+IV+secretion+system%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A novel sheathed surface organelle of the Helicobacter pylori cag type IV secretion system.</a> Mol. Microbiol. 49 (1), 219-234 (2003).</li>
<li>Cover, T. L., Peek, R. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet%2C+microbial+virulence+and+Helicobacter+pylori+induced+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Diet, microbial virulence and Helicobacter pylori induced gastric cancer.</a> Gut Microbes. 4 (6), 482-493 (2013).</li>
<li>Queiroz, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+gastric+IL-1%CE%B2+concentration+and+iron+deficiency+parameters+in+Helicobacter+pylori+infected+children%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Increased gastric IL-1β concentration and iron deficiency parameters in Helicobacter pylori infected children.</a> PLoS One. 8 (2), 57420(2013).</li>
<li>Harris, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori-associated+hypochlorhydria+and+development+of+iron+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori-associated hypochlorhydria and development of iron deficiency.</a> J. Clin. Pathol. 66 (4), 343-347 (2013).</li>
<li>Noto, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+deficiency+accelerates+Helicobacter+pylori-induced+carcinogenesis+in+rodents+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Iron deficiency accelerates Helicobacter pylori-induced carcinogenesis in rodents and humans.</a> J. Clin. Invest. 123 (1), 479-492 (2013).</li>
<li>Tan, S., Noto, J. M., Romero-Gallo, J., Peek, R. M. Jr, Amieva, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+perturbs+iron+trafficking+in+the+epithelium+to+grow+on+the+cell+surface%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori perturbs iron trafficking in the epithelium to grow on the cell surface.</a> PLoS Pathog. 7 (5), (2011).</li>
<li>Danielli, A., Roncarati, D., Delany, I., Chiarini, V., Rappouli, R., Scarlato, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+dissection+of+the+Helicobacter+pylori+Fur+regulatory+circuit+by+genome-wide+location+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">In vivo dissection of the Helicobacter pylori Fur regulatory circuit by genome-wide location analysis.</a> J. Bacteriol. 188 (13), 4654-4662 (2006).</li>
<li>Pich, O. Q., Carpenter, B. M., Gilbreath, J. J., Merrell, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+analysis+of+Helicobacter+pylori+Fur-regulated+promoters+reveals+a+Fur+box+core+sequence+and+novel+Fur-regulated+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detailed analysis of Helicobacter pylori Fur-regulated promoters reveals a Fur box core sequence and novel Fur-regulated genes.</a> Mol. Microbiol. 84 (5), 921-941 (2012).</li>
<li>Cassat, J. E., Skaar, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+in+infection+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Iron in infection and immunity.</a> Cell Host Microbe. 13 (5), 509-519 (2013).</li>
<li>Nielubowicz, G. R., Mobley, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions+in+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Urol%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions in urinary tract infection.</a> Nat. Rev. Urol. 7 (8), 430-441 (2010).</li>
<li>Brickman, T. J., Cummings, C. A., Liew, S. Y., Relman, D. A., Armstrong, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+of+the+iron+starvation+response+in+Bordatella+pertussis+provides+new+insights+into+siderophore+utilization+and+virulence+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling of the iron starvation response in Bordatella pertussis provides new insights into siderophore utilization and virulence gene expression.</a> J. Bacteriol. 193 (18), 4798-4812 (2011).</li>
<li>Mobley, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+factors+associated+with+disease+development%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori factors associated with disease development.</a> Gastroenterology. 113 (6), 21-28 (1997).</li>
<li>Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+requirements+and+antibiotic+resistance+patterns+of+Helicobacter+species+in+chemically+defined%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined.</a> J. Clin. Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).</li>
<li>Senkovich, O., Ceaser, S., McGee, D. J., Testerman, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+host+iron+utilization+mechanisms+of+Helicobacter+pylori+revealed+with+iron-deficient+chemically+defined+media%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Unique host iron utilization mechanisms of Helicobacter pylori revealed with iron-deficient chemically defined media.</a> Infect. Immun. 78 (5), 1841-1849 (2010).</li>
<li>Shaffer, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+exploits+a+unique+repertoire+of+type+IV+secretion+system+components+for+pilus+assembly+at+the+bacteria-host+cell+interface%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori exploits a unique repertoire of type IV secretion system components for pilus assembly at the bacteria-host cell interface.</a> PLoS Pathog. 7 (9), (2011).</li>
<li>Barrozo, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+plasticity+in+the+type+IV+secretion+system+of+Helicobacter+pylori%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Functional plasticity in the type IV secretion system of Helicobacter pylori.</a> PLoS Pathog. 9 (2), (2013).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Eisen ist ein wesentliches Spurenelement für die meisten Lebensformen, einschließlich bakterieller Pathogene. In dem Bemühen, die Lebensfähigkeit der eindringenden Mikroorganismen zu beschränken, Wirbeltierwirten maskieren Nährstoff Eisen in einem Prozess als &quot;Ernährungs Immunität&quot; 18 bekannt. In Reaktion darauf wurden bakterielle Pathogene entwickelt, um Eisen als globales Signal-Molekül zu verwenden, um die Umgebung zu erfassen und zu regeln für die Ausarbeitung von Virulenz-Eigenschaften, wie Eis...

H. pylori-Infektion ist ein signifikanter Risikofaktor für Magenkrebs1. Die Krankheitsverläufe variieren jedoch und hängen von zahlreichen Faktoren ab, wie z. B. der Wirtsgenetik, der genetischen Vielfalt der H. pylori-Stämme und Umweltfaktoren wie der Ernährung des Wirts11. Frühere Berichte haben gezeigt, dass eine Korrelation zwischen einer H. pylori-Infektion, Eisenmangel (gemessen an verringerten Ferritin- und Hämoglobinkonzentrationen im Blut) und einer erhöhten proinflammatorischen Zytokinproduktion, einschließlich der IL-8-Sekretion, besteht, die letztendlich zu einem verstärkten Fortschreiten der Magenerkrankung führt12. Eine akute H. pylori-Infektion ist auch mit einer Hypochlorhydrie verbunden, die die Fähigkeit des Wirts, den Nährstoff Eisen aufzunehmen, beeinträchtigt und letztendlich zu Veränderungen der Eisenhomöostase führt13. Diese klinischen Befunde deuten darauf hin, dass die Verfügbarkeit von Eisen in der gassistischen Nische ein wichtiger Faktor für den Krankheitsverlauf sein könnte. Tatsächlich haben Tiermodelle der H. pylori-Infektion gezeigt, dass ein geringer Eisenkonsum über die Nahrung die Magenerkrankung verschlimmert14. Die reduzierten Eisenwerte bei diesen Tieren machen es erforderlich, dass H. pylori eine Eisenaufnahmereaktion induziert, um das für die bakterielle Replikation benötigte Eisen zu erhalten. H. pylori hat die Fähigkeit, den Eisentransport innerhalb der Wirtszellen zu stören, um die bakterielle Replikation auf CagA-abhängige Weise zu erleichtern15. Interessanterweise wurde gezeigt, dass die Cag-Pathogenitätsinsel durch den eisenresponsiven Transkriptionsfaktor Fur16,17 reguliert wird. Darüber hinaus werden Cag+-Stämme mit vermehrten Entzündungen und Magenerkrankungen wie Krebs in Verbindung gebracht1. Diese Ergebnisse unterstützen ein Modell, bei dem H. pylori die Cag-T4SS-Expression verändert, um Eisen aus Wirtszellen zu gewinnen, die sich in einer eisenarmen Umgebung befinden, was zu verschlimmerten Krankheitsergebnissen führt. 
Zwei Faktoren, die Entzündungen und Morbidität erhöhen, sind die Cag-Expression und die geringe Eisenaufnahme über die Nahrung. Diese Fakten stützen die Hypothese, dass eine verminderte Eisenverfügbarkeit die Produktion von Cag-T4SS-Pili an der Schnittstelle des Wirtserregers erhöht, was zu einer Verschlechterung der Magenerkrankung führt11-14. Das Ziel der in diesem Manuskript vorgestellten Methode ist es, die Rolle des Mikronährstoffs Eisen bei der Regulation der Cag-T4SS-Pilus-Biogenese zu etablieren. In früheren Arbeiten haben wir zwei Ansätze verwendet, um einen eisenabhängigen Anstieg der Cag-T4SS-Expression zu beobachten. Zunächst wurden Ausgangsstämme von Tieren analysiert, die mit hoher und niedriger Eisendiät gehalten wurden, und zeigten, dass eisenarme Diätstämme mehr Cag-T4SS-Pili produzierten als eisenreiche Diätstämme14. Zweitens führte die Züchtung des Stammes H. pylori 7.13 in vitro unter eisenhaltigen Bedingungen zu einer reduzierten Pili-Bildung, während Zellen, die in Gegenwart eines Eisenchelators gezüchtet wurden, signifikant mehr Pili produzierten. 
Wir haben die eisenabhängige Regulation des Cag-T4SS-Pili-Phänotyps weiter untersucht und bieten das folgende optimierte Protokoll und repräsentative Ergebnisse an, die mit einem zusätzlichen Helicobacter pylori-Stamm, PMSS1, durchgeführt wurden. Der Grundgedanke hinter der Entwicklung dieser Technik bestand darin, eine erhöhte Cag-T4SS-Aktivität unter Bedingungen der Eisenlimitierung mit einer erhöhten Cag-T4SS-Pilusbildung zu korrelieren. Die breitere Implikation und Anwendung dieser Technik wird optimierte Kulturbedingungen bieten, die zu einer erhöhten Produktion der Cag-T4SS-Pili führen. Dieser Assay wird für Forscher nützlich sein, die versuchen, die Zusammensetzung und Architektur des Cag-T4SS durch Anreicherung für dieses wichtige bakterielle Oberflächenmerkmal zu bestimmen. Die Probenvorbereitung und -visualisierung mittels Feldemissions-Kanonenelektronenmikroskopie hat zahlreiche Vorteile gegenüber alternativen Techniken, wie z.B. lichtmikroskopischen Methoden zur Visualisierung des Cag-T4SS, und ist für Forscher geeignet, die daran interessiert sind, die Regulation dieser Organellezu untersuchen 10.

<table><tbody><tr><td>Modifizierte Brucella-Brühe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pepton aus Kasein (10 g/L)</td><td>Sigma</td><td>70172</td><td></td></tr><tr><td>Peptischer Verdau aus tierischem Gewebe (10 g/L)</td><td>Sigma</td><td>70174</td><td></td></tr><tr><td>Hefeextrakt (2 g/L)</td><td>Sigma</td><td>92144</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose (1 g/L)</td><td>Sigma</td><td>D9434</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid (5 g/L)</td><td>Thermo Fisher</td><td>S271-10</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterin (250X) (4 ml/L)</td><td>Life Technologies</td><td>12531018</td><td></td></tr><tr><td>Eisenchlorid (100 oder 250 μM)</td><td>Sigma</td><td>157740-100G</td><td></td></tr><tr><td>Dipyridyl (200 μM)</td><td>Sigma</td><td>D216305-100G</td><td></td></tr><tr><td>modifiziertes RPMI</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI+HEPES (1X)</td><td>Life Technologies</td><td>22400-121</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum ( 100 ml/L)</td><td>Life Technologies</td><td>10438-026</td><td></td></tr><tr><td>Elektronenmikroskopie-Vorbereitung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (2,0 % wässrig)</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>Gluteraldehyd (2,5 % wässrig)</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>16220</td><td></td></tr><tr><td>Natriumcacodylat (0,05 M)</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>12300</td><td></td></tr><tr><td>Osmiumtetroxid (0,1 % wässrig)</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>19150</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (absolut)</td><td>Sigma</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Kolloidale Silberfarbe</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>12630</td><td></td></tr><tr><td>REM-Probenstummel</td><td>Elektronenmikroskopie</td><td>Sciences 75220</td><td></td></tr><tr><td>Deckgläser</td><td>Thermo Fisher</td><td>08-774-383</td><td></td></tr><tr><td>IL-8 Sekretionsbewertung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Quantikine IL-8 ELISA Kit</td><td>R& D Systems</td><td>D8000C</td><td></td></tr></tbody></table>

hohe auflösung elektronenmikroskopie der helicobacter pylori cag typ iv-sekretionssystem pili produziert in variierenden bedingungen von iron verfügbarkeit

High Resolution Electron Microscopy of the Helicobacter pylori Cag Type IV Secretion System Pili Produced in Varying Conditions of Iron Availability

Helicobacter pylori ist ein helikalförmiges, gramnegatives Bakterium, das die menschliche Magennische der Hälfte der menschlichen Bevölkerung besiedelt1,2. H. pylori ist die Hauptursache für Magenkrebs und die zweithäufigste krebsbedingte Todesursache weltweit3. Ein Virulenzfaktor, der mit einem erhöhten Risiko für Magenerkrankungen in Verbindung gebracht wurde, ist die Cag-Pathogenitätsinsel, eine 40 kb große Region innerhalb des Chromosoms von H. pylori, die für ein Typ-IV-Sekretionssystem und das verwandte Effektormolekül CagA4,5 kodiert. Das Cag-T4SS ist für die Translokation von CagA und Peptidoglykan in Wirtsepithelzellen verantwortlich5,6. Die Aktivität des Cag-T4SS führt zu zahlreichen Veränderungen in der Wirtszellbiologie, einschließlich der Hochregulierung der Zytokinexpression, der Aktivierung proinflammatorischer Signalwege, des Umbaus des Zytoskeletts und der Induktion onkogener Zellsignalnetzwerke5-8. Der Cag-T4SS ist eine makromolekulare Maschine, die aus Baugruppen besteht, die die innere und äußere Membran überspannen und sich von der Zelle in den extrazellulären Raum erstrecken. Der extrazelluläre Teil des Cag-T4SS wird als "Pilus"5 bezeichnet. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass die Cag-T4SS-Pili an der Wirt-Pathogen-Grenzfläche gebildet werden9,10. Die Umweltmerkmale, die die Biogenese dieses wichtigen Organels regulieren, bleiben jedoch weitgehend im Dunkeln. Kürzlich berichteten wir, dass Bedingungen mit geringer Eisenverfügbarkeit die Cag-T4SS-Aktivität und die Pilus-Biogenese erhöhten. Hier stellen wir ein optimiertes Protokoll vor, um H. pylori unter unterschiedlichen Bedingungen der Eisenverfügbarkeit vor der Co-Kultur mit menschlichen Magenepithelzellen zu züchten. Des Weiteren stellen wir ein umfassendes Protokoll zur Visualisierung des hyperpiliierten Phänotyps vor, der unter eisenbeschränkten Bedingungen durch hochauflösende Rasterelektronenmikroskopie-Analysen gezeigt wird.

In diesem Bericht haben wir gezeigt, dass die Bedingungen der unterschiedlichen Eisenverfügbarkeit die Fähigkeit, H. modulieren pylori Cag-T4SS Pilus-Biogenese im Wirt-Pathogen-Schnittstelle. Wenn in Medium allein, H. kultiviert pylori bildet einen Durchschnitt von 3 Pili / Zelle. Wenn H. pylori ist in Eisen gewachsen erschöpfen Bedingungen (unter Verwendung des synthetischen Chelator Dipyridyl), die Unter hemmend auf das Bakterienwachstum (Abbildung 1) sind,...

Hier beschreiben wir eine Methode zur Visualisierung der onkogenen Bakterienorganelle, die als Cag Type IV Secretion System (Cag-T4SS) bekannt ist. Wir stellen fest, dass das Cag-T4SS auf der Oberfläche von H. pylori als Reaktion auf unterschiedliche Bedingungen der Eisenverfügbarkeit unterschiedlich produziert wird.

Hohe Auflösung Elektronenmikroskopie der Helicobacter pylori Cag Typ IV-Sekretionssystem Pili Produziert in variierenden Bedingungen von Iron Verfügbarkeit

Helicobacter pylori is a helical-shaped, gram negative bacterium that colonizes the human gastric niche of half of the human population1,2.  H. pylori is ...

Das Verfahren visualisiert die Hyperproduktion von CAG-Typ-4-Sekretionssystem pii, die unter Bedingungen der Eisenlimitierung auftritt, die erste Kultur h pylori unter Bedingungen der Eisenlimitierung. Der zweite Schritt besteht darin, h pylori mit Magenepithelzellen zu co-kultivieren. Als nächstes bereiten Sie die Co-Kultur-Proben für die Rasterelektronenmikroskopie auf.Letztendlich wird die hochauflösende Rasterelektronenmikroskopie verwendet, um eine erhöhte PI-Augenproduktion des CAG-Typ-4-Sekretionssystems unter Bedingungen der Eisenlimitierung zu zeigen. Die Technik in diesem Manuskript ist wichtig für h pylori-bedingte Krankheiten wie Magenkrebs, da das CAG-Sekretionssystem vom Typ 4 mit einem erhöhten Risiko für negative Krankheitsergebnisse verbunden ist. Damit ein besseres Verständnis der Regulation dieser wichtigen Bakterienoberfläche.Organelle könnte neue chemotherapeutische Angriffspunkte aufdecken Und der Vorteil der hochauflösenden Rasterelektronenmikroskopie gegenüber bestehenden Methoden wie der Fluoreszenzmikroskopie besteht darin, dass die einzelne Typ-4-Sekretpille I sichtbar gemacht werden kann. Personen, die mit dieser Methode der Elektronenmikroskopie noch nicht vertraut sind, haben Probleme mit dem Verfahren, insbesondere mit der Nasschemie, da sie ein sorgfältiges Timing und eine feinfühlige Hand am Blut erfordert. Agarplatten wachsen.H Pylori PMs, S one Bakterien und ihre isogene CAG e-Mutante, der ein funktionierendes Typ-4-Sekretionssystem fehlt. Impfen Sie Kulturen und modifizierte Ella-Brühe, die mit Cholesterin angereichert ist, um über Nacht zu wachsen. Als nächstes säen Sie eine GS-humane Magenepithelzelle auf Polylysin-behandelte Deckgläser in 12-Well-Platten für unterschiedliche Bedingungen der Eisenverfügbarkeit.H pylori wird auf eine optische Dichte 600 von 0,3 in modifizierter Bru-Bouillon verdünnt. Medien, die 100 Mikromolaren Eisenchlorid, 200 Mikromolare des synthetischen Eisenchelator-Dippers oder 200 Mikromolare des Dippers plus 200 Mikromolaren Eisenchlorid-Kultur enthalten. Die Proben zentrifugieren nun vier Stunden lang die Bakterien bei 1000 g und Resus suspendiert die Pellets in einem gleichen Volumen frischer, modifizierter Bru-Brühe, die mit Cholesterin ergänzt ist.Messen Sie die Bakteriendichte. Als nächstes infizieren Sie die Epithelzellen mit den h pylori bei einer Infektionsvielfalt von 20 zu eins. Führen Sie serielle Verdünnungen durch und plattieren Sie die Bakterienzellen auf Blutagarplatten.Um die Lebensfähigkeit der bakteriellen Zellen zu beurteilen, legen Sie die Co-Kulturen für vier Stunden in den Zellkultur-Inkubator. Dekantieren Sie den Überstand aus den h pylori I und a GS Co-Kulturen. Waschen Sie die adhärenten Zellen vorsichtig dreimal mit 0,05 molaren Natriumschichtpuffern.Anschließend fixieren Sie die Proben für zwei bis vier Stunden bei Raumtemperatur. Waschen Sie anschließend die Proben dreimal mit 0,05 molaren Natrium-Cacoat-Puffer. Für eine sekundäre Fixierung werden 0,1%Osmiumtetroxid in 0,05 molaren Natrium-Cacoat-Puffer in zwei aufeinanderfolgenden 10-minütigen Fixierungsschritten zugegeben.Nach drei Wäschen dehydrieren Sie die Proben mit erhöhten Ethanolkonzentrationen. Geben Sie die Proben in eine Trocknermaschine für kritische Punkte und füllen Sie dann die Kammer mit flüssigem Kohlendioxid. Ethanol wird aus der Kammer gespült und die Kammer wieder mit flüssigem Kohlendioxid gefüllt.Die Probe wird dann auf den kritischen Punkt von 31,1 Grad Celsius und 1073 PSI gebracht. Montieren Sie nun die Deckgläser auf Aluminium-REM-Probenstummel und malen Sie eine dünne Linie aus kolloidalem Silber an den Probenrand zur Erdung. Während der REM-Bildgebung werden die Proben mit einer Sputterbeschichtungsmaschine mit fünf Nanometern Gold-Palladium beschichtet, um das Sekundärelektronensignal der Probe und den Kanteneffekt zu erhöhen. Untersuchen Sie die Proben mit einem Rasterelektronenmikroskop mit einer Feldemissionskanone im Hochvakuummodus bei einem Arbeitsabstand von fünf bis 10 Millimetern.Stellen Sie die Beschleunigungsspannung auf fünf Kilovolt ein. Stellen Sie dann die Spotgröße auf zwei bis 2,5 ein. Kippen Sie nun die Probe um 15 bis 25 Grad, um eine bessere Sicht auf die Schnittstelle zwischen Wirt und Erreger für die Betrachtung mit hoher Vergrößerung zu erhalten.Priorisieren Sie die Bildgebung von Bakterien, die an den Rändern der Epithelzellen anhaften, für PI lebenserwärmende Bakterien, die durch Wirts-Erreger-Interaktionen angereichert sind. Öffnen Sie die Mikrographendateien in der Image J-Software. Identifizieren Sie Pi li als Strukturen, die sich zwischen der Bakterienzelle und der Wirtszelle mit einer einheitlichen Breite von 10 bis 13 Nanometern und einer Länge von 60 bis 150 Nanometern bilden.Kalibrieren Sie das Messwerkzeug, indem Sie mit dem Werkzeug für gerade Linien eine Linie zeichnen und dann im Dropdown-Menü auf die Registerkarte "Analysieren" klicken. Wählen Sie Maßstab einstellen und geben Sie den Wert des Vergrößerungsbalkens unter bekannter Abstand ein und stellen Sie die Längeneinheit auf den Nanometer ein. Klicken Sie dann auf OK.Zeichnen Sie nun mit einem Geradenwerkzeug über die Länge oder Breite der Piloten und drücken Sie dann Strg M, um jeden Piloten zu messen und die gemessenen Werte in einem Tabellenkalkulationsprogramm aufzuzeichnen. Verwenden Sie zuvor festgelegte Längen- und Breitenparameter, um Merkmale zu ignorieren, die nicht zum Profil des CAG-Sekretionssystems vom Typ vier passen. Quantifizieren Sie dann die Anzahl der PI I auf der Grundlage von Werten, die im Bereich liegen, statistisch analysiert, eine Quantifizierung des PI LI mit einem zweiseitigen Schüler-T-Test.In diesem Experiment wurden h pylori unter eisenarmen Bedingungen unter Verwendung des synthetischen Chelators Dip Parital in Konzentrationen kultiviert, die das Wachstum nicht signifikant hemmen. Die Bakterien produzierten bei der Co-Kultivierung mit menschlichen Magenzellen zahlreiche PII des CAG-Typ-4-Sekretionssystems. Umgekehrt, wenn eine exogene Quelle für den Nährstoff Eisen vorhanden ist, wird die Bildung von CAG-Typ-4-Sekretionssystem PII unterdrückt.Die Quantifizierung des PII an der Schnittstelle des Wirtserregers zeigt, dass h pylori unter Bedingungen der Eisenrestriktion eine zweifache Erhöhung des CAG-Typ-4-Sekretionssystems PI eye aufweist, der prozentuale Anteil der pilierten Zellen steigt um 11% im Vergleich zu Zellen, die nur in Medium gezüchtet werden. Interessanterweise bleiben die PI LI-Dimensionen unter allen Bedingungen der Eisenverfügbarkeit konsistent, obwohl die Aktivität des CAG-Typ-4-Sekretionssystems, gemessen durch die IL-8-Sekretion des Wirts, unter Bedingungen der Eisenrestriktion erhöht und unter Bedingungen der überschüssigen Eisenverfügbarkeit unterdrückt wird. In Übereinstimmung mit der Beteiligung des CAG-Typ-4-Sekretionssystems verändert die Eisenverfügbarkeit die Biogenese von PI LI auf der Oberfläche einer CAG-e-Mutante nach ihrer Entwicklung nicht.Diese REM-Technik ebnete den Weg für Forscher auf dem Gebiet des CAG-Typ-4-Sekretionssystems, um die Proteinlokalisierung zu erforschen. In Bezug auf den CAG-Typ vier Sekretionssystem-Kissen. Kürzlich wurde entdeckt, dass das Effektorprotein CAG a an der Spitze der Sekretpille vom Typ 4 lokalisiert ist.

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Erfahren Sie hochauflösende Elektronenmikroskopie des Cag-T4SS in Helicobacter pylori unter variierenden Eisenbedingungen. Diese Methode ermöglicht die Visualisierung bakterieller Virulenzfaktoren.

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