Isolierung und Charakterisierung von Maus Antral Oozyten Basierend auf Nucleolar Chromatinorganisation

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, alle Schritte zu beschreiben, die zur Charakterisierung von antralen Eizellen von Mäusen auf der Grundlage ihrer Chromatinorganisation erforderlich sind, entsprechend ihrer Fähigkeit, eine prospektive Embryonalentwicklung vollständig aufrechtzuerhalten. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet der Entwicklungsbiologie zu beantworten, z. B. wie man zwei verschiedene Arten von antralen Ooykten unterscheidet und isoliert, SN, umschlossener Nukleolus, und NSN, nicht umgebender Nukleolus, der sich im antralen Kompartiment des Eierstocks von Säugetieren befindet. Um die Eierstöcke zu entnehmen, injizieren Sie zunächst drei bis sechs Wochen alte weibliche Mäuse IP mit 2,5 internationalen Einheiten trächtiger Stutenserumgonadotropin.

Zwei Tage später, etwa eine Stunde vor der Ernte, füllen Sie eine sterile Petrischale mit M2-Medium und geben Sie mehrere 20 Mikriliter M2-Medium in eine zweite Petrischale, wobei Sie jeden Tropfen mit 1,5 Millilitern Mineralöl bedecken. Bringen Sie dann alle Petrischalen in einen 37 Grad Celsius heißen Inkubator mit 5 % Kohlendioxid, damit sich das Medium ausgleichen kann. Als nächstes machen Sie mit einer sterilen Präparierschere einen Schnitt in die Haut, die die Bauchdecke bedeckt, gefolgt von einem Schnitt im Bauchfell der ersten hormoninjizierten Maus.