Name: Herstellung und Analyse von In Vitro Three Dimensional Mammakarzinoms Surrogates (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Erfahren Sie die Herstellung von 3D-Mammakarzinom-Surrogaten in einem Perfusionsbioreaktor zur Analyse von Zelldichte und Wachstum. Diese Methode ermöglicht physiologisch relevante in-vitro-Modelle für Krebsforschung und Therapietests.

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Das Zentrum für metabolische Knochenkrankheit der Universität von Alabama in Birmingham führte die histologische Bearbeitung und Sektionierung von Leihmüttern durch. Southern Research (Birmingham, AL) unterstützte die Herstellung des Bioreaktorsystems. Die Finanzierung erfolgte durch das Breast Cancer Research Program (BC121367 des US-Verteidigungsministeriums.

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Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Hierin wurde ein Verfahren der 3D-Kultur beschrieben, die Komponenten des Gewebemikroumgebung beinhaltet, einschließlich der extrazellulären Matrix (ECM) und menschliche Stromazellen Fibroblasten, in einem Volumen, das genauer Modelle menschlichen Brustkrebs für die Entwicklung eines zusammenfassenden 3D-Morphologie zu ermöglichen, . Die 3D-Kultivierungsverfahren beschrieben ist repräsentativer für menschliche Krankheiten als herkömmliche 2D-Zellkultur, dass mehrere Zelltypen werden in einem 3D-Volumen von ECM integrier...

Dreidimensionale (3D) Kulturmodelle , die genauer den Tumor Architektur und Mikroumgebung in vivo nachahmen sind wichtig für die Studien mit dem Ziel , die komplexen Wechselwirkungen zwischen Zellen und ihrer Mikroumgebung zu sezieren und die Wirksamkeit von Therapien Kandidaten zu testen. Tumor Dimensionalität Auswirkungen von Nährstoffen und Sauerstoff - Gradienten, die Gleichförmigkeit der Wirkstoffexposition, interstitielle Druck / Durchblutung und 3D - Architektur 1-4. Die Anwesenheit eines geeigneten stromalen Mikroumgebung trägt zur Tumor Dimensionalität und Einflüsse zell ECM Signalisierungs- und parakrine Signalisierung zwischen Stromazellen und maligne Epithelzellen. Die Auswirkungen von Tumor Dimensionalität und der Mikroumgebung auf die Zellfunktion sind gut etabliert, mit beiden Faktoren verändern Arzneimittelreaktion 1,3,5-8. Zusätzlich Zellwachstum Kinetik, Stoffwechselraten und Zellsignalisierung unterscheiden sich zwischen den zweidimensionalen (2D) Kultur und Kultur in 3D, mit diesen Faktoren affefesselndes zelluläre Antwort 1,3,8-10. In vitro kann der Tumor - Mikroumgebung Surrogat indem repräsentative ECM Bestandteile und Stroma - Zellpopulationen moduliert werden. Maligne Epithelzellen werden durch das ECM und Krebs-assoziiertes Stroma - Zellen , die entweder in einer synergistischen / protektiv Weise beeinflusst Tumorprogression oder in einer unterdrückenden Art und Weise weiter zu fördern Tumorausbreitung 5,6,10 hemmen. In jedem Zusammenhang kann das Stroma beeinflussen therapeutische Reaktion und Arzneimittelabgabe über parakrine Signalisierungs- und / oder durch interstitiellen Druck in dem Tumor Erhöhung was zu einer verringerten Medikamentenabgabe 1,6. Daher hilft die Zugabe von ECM und Stromazellen in präklinischen Modellen Aspekte des Tumors rekapitulieren, die nicht gut in 2D Kultur modelliert werden können. Hierin wird ein Verfahren Brustkrebs Surrogate zu etablieren, die eine zusammenfassender Mikro integrieren, einschließlich ECM Bestandteile und stromal Zellen in einem 3D-Volumen beschrieben. In Brustkarzinom ist die stromale Zellpopulation überwiegend wird Krebs-Fibroblasten (CAF) und dem Stroma ECM besteht aus weitgehend von Kollagen Typ zusammengesetzt I mit einem kleineren Anteil der Matrixkomponenten, die in der Basalmembran gefunden werden, einschließlich Laminin und Kollagen Typ IV 1,4,11-13. Daher werden diese Komponenten des Mammakarzinoms Mikroumgebung (dh, CAF, Kollagen I und Basalmembran) wurden in die Surrogate eingebaut. Dieses Verfahren kann verwendet werden , um feste, nicht-perfundierten 3D Surrogate (1A) zu erzeugen , oder können angepasst werden Perfusion des Mediums durch das Surrogat über ein Bioreaktorsystem (1B) aufzunehmen. Beide Ansätze werden hier beschrieben. Dieses Verfahren könnte auch auf andere stromalen Elemente modifiziert werden, wie beispielsweise Tumor-assoziierten Makrophagen, oder andere feste Tumore zu modellieren, indem die zellulären und ECM-Komponenten, gegebenenfalls anzupassen. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; Für das Surrogat Mammakarzinoms hier beschrieben, haben wir die MDA-MB-231 (231) Brustkrebs-Zelllinie, CAF zuvor von menschlichen Brustkarzinom 14 und eine ECM , bestehend aus 90% Kollagen I isoliert verwendet ( 6 mg / ml) und 10% Wachstumsfaktor reduziert Basalmembran Material (BM). Der Ersatz wird in einem 8-Well-Kammerobjektträger (fest Surrogat) oder ein Bioreaktorsystem verwendet wird, um entweder angebaut kontinuierliche Nährstoff Perfusion zu liefern (durchbluteten Surrogat). Jede Perfusions - Bioreaktor - System , das ein Volumen von ECM enthaltenden Zellen aufnehmen kann , kann 15 verwendet werden. Als Beispiel beschreiben wir die Herstellung der Gewebe Surrogate im Bioreaktorsystem. Dieses System wurde im eigenen Haus entwickelt und ist nicht im Handel erhältlich. Weil unsere hier konzentrieren sich auf die Vorbereitung und Analyse der 3D-Gewebe Surrogate ist, haben wir nicht in umfangreichen Detail in Bezug auf die Besonderheiten der Herstellung und Montage unserer Bioreaktorsystem gegangen. Jedoch wird eine detaillierte Beschreibung vonDieses System und seine Entwicklung wurde 16 veröffentlicht. In diesem Bioreaktorsystem, ein Polydimethylsiloxan (PDMS) Strömungskanal des Surrogat zu Haus verwendet wird, die von einem PDMS - Schaum unterstützt wird (gebildet Methoden ähnlich denen von Calcagnile beschriebenen et al. 17). Dieses Volumen wird von 4 Mikrokanäle (jeweils 400 &amp; mgr; m im Durchmesser) durchsetzt, die durch Medium über eine microphysiologic Pumpe kontinuierlich durchblutet werden Sauerstoff und Nährstoffe zum Ersatz zu liefern. Entsprechende Analyse der Surrogate ist entscheidend wichtige Informationen in Bezug auf die Zellfunktion in Reaktion auf die Behandlung oder andere Manipulationen zu gewinnen. Surrogates kann durch verschiedene Verfahren einschließlich der direkten Bildgebung von intaktem Surrogate mittels konfokaler Mikroskopie oder andere Mittel der nichtinvasiven Bildgebung, indirekte Zellanalyse durch Bestimmung des konditionierten Medien oder Perfusat, für sezernierte Produkte oder Analyse auf histologischen Schnitten nach der Fixierung und Verarbeitung analysiert werden, nachParaffin. Ein solcher Parameter, der auf histologischen Schnitten ausgewertet werden kann, ist die Zelldichte. Wir stellen einen Ansatz Zelldichte zu messen (dh die Anzahl von nukleierten Zellen pro Querschnittsfläche) unter Verwendung von halbautomatischen Bildverarbeitungstechniken auf Mikrophotographien von Surrogat histologischen Schnitte angewendet gefärbt mit Hämatoxylin und Eosin (H &amp; E). Die Zelldichte kann als ein Indikator der relativen Änderung der Zellzahl über die Zeit verwendet werden, oder dass die Ergebnisse von unterschiedlichen Wachstumsbedingungen und Behandlungen. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/54004/54004fig1.jpg" /> Abbildung 1. 3D - Volumen und Bioreaktorsystem. A) Schematische Darstellung des Prozesses solide 3D ​​- Surrogate zu erzeugen. Top: Karikatur von festen 3D-Volumen enthalten, ECM (pink), epithelialen Karzinomzellen (gelb) und CAF (orange); Unten:. Draufsicht auf 8-Well - Kammer - Folie mit Surrogaten B) Schematische Darstellung des Prozesses 3D Surrogate durchbluteten zu erzeugen. Top: cartoon von 3D-Volumen mit Kanälen für mittlere Perfusion und enthält ECM (pink), epithelialen Karzinomzellen (gelb) und CAF (orange) zu ermöglichen; Mitte: Bild von PDMS Strömungskanal enthält PDMS Schaum (schwarzer Pfeil), um mit Zelle injiziert + ECM und drang durch polymerbeschichteten rostfreien Stahldrähten (pink Pfeil) Messung 400 &amp; mgr; m im Durchmesser; Unten:. Bild des PDMS Strömungskanal einen Surrogat und mit dem Bioreaktorsystem zu ermöglichen , für die kontinuierliche Mediumperfusion (Schlauchpumpe und Medienspeicher nicht dargestellt) C) Bilder von Verarbeitungsschritten für sowohl feste als auch perfundiert Surrogate nach Kultur enthält. Links: Bild des cryomold Probenverarbeitung Gel und Surrogat enthält; Mitte: Bild eines Paraffinblock eine feste und verarbeitet Surrogat enthält; Rechts:. Bild von einem Glasträger mit einem H &amp; E-gefärbten histologischen Schnitt eines Ersatz <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54004/54004fig1large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54004/54004fig1large.jpg" target="_blank">um anzuzeigen</a>Größere Version der Figur.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco's Modified Eagel Medium 1x (DMEM)</td><td>Corning CellGro</td><td>10-014-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>0,25% Trypsin + 2,21&nbsp; mM EDTA 1x</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>Gewebekulturplatten, 100&nbsp; mm</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229620</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>Gewebekulturplatten, 35&nbsp; mm</td><td>CellTreat Scientific Produkte</td> 229638 <td>Für die PDMS-Schaumbildung&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>9" Glaspipette</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>13-678-20D</td><td>Steril</td></tr><tr><td>10 ml Pipette</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229210B</td><td>Steril</td></tr><tr><td>1.000 & Mikro; l Piptettenspitzen</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-166</td><td>Steril gefiltert</td></tr><tr><td>200 & Mikro; l Pipettenspitzen</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-141</td><td>Steril gefiltert</td></tr><tr><td>10 & Mikro; l Pipettenspitzen</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-158</td><td>Sterile gefilterte</td></tr><tr><td>15 ml konische Röhrchen</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229410</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>50 ml konische Röhrchen</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229422</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>FisherBrand</td><td>05-408-129</td><td>Steriles</td></tr><tr><td>Trypanblau</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-900-CI</td><td>keimfrei</td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>24236-10</td><td>PDMS-Elastomer und Härtungsmittel. Wird für unseren hauseigenen Bioreaktor verwendet.</td></tr><tr><td>PDMS-Schaum</td><td></td><td></td><td>Aus eigenem Haus für den Einsatz in unserem hauseigenen Bioreaktor.</td></tr><tr><td>Hochkonzentriertes Rinderkollagen Typ I</td><td>Advanced Biomatrix</td><td>5133-A</td><td>FibriCol ~10 mg/ml</td></tr><tr><td>Wachstumsfaktor Reduziertes Matrigel (Basalmembran)</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>Basalmembranmaterial</td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Sigma</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>Wasser in molekularbiologischer Qualität</td><td>Fisher</td><td>BP2819-1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 10x&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2429</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek Kammer-Gleitsystem&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>177402</td><td>8-Well-Bioreaktor</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>aus eigener Herstellung.</td></tr><tr><td>Rückfederung 304 Edelstahl Beschichtet mit PTFE-Polymer</td><td>McMaster-Carr</td><td>1749T19</td><td>Edelstahldrähten zur Erzeugung von Mikrokanälen in unserem hauseigenen Bioreaktorsystem. 0,016"</td></tr><tr><td>Durchmesser BioPharm Plus platingehärteter Silikonpumpenschlauch, L/S 14</td><td>Masterflex</td><td>EW-96440-14</td><td>Für den Einsatz in unserem hauseigenen Bioreaktorsystem. Schlauch-ID: 1,6 mm, Schlauchtülle: 1/16 Zoll</td></tr><tr><td>2-Stopp-Schlauchsätze, PVC nicht aufgeweitet, 1,52&nbsp; mm ID</td><td>Cole-Parmer&nbsp;</td><td>EW-74906-36</td><td>Für den Einsatz in unserem hauseigenen Bioreaktorsystem (mit mikroperistalischer Pumpe).&nbsp;</td></tr><tr><td>Sechskanalige Präzisions-Mikroperistaltikpumpe</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-74906-04</td><td>Zur Verwendung mit unserem hauseigenen Bioreaktorsystem</td></tr><tr><td>Tuberculin Syringes</td><td>BD Medical</td><td>309625</td><td>26 Gauge 3/8 Zoll Nadel; Sterile</td></tr><tr><td>Präparierzange</td><td>FisherBrand</td><td>13-812-36</td><td>5,5-Zoll-Mini-Röhrenrotator</td></tr><tr><td></td><td>Boekel Scientific</td><td>260750</td><td>Ausrüstungsoption für die Leihmutterrotation. Verwendung mit Karussell für 50 ml Röhrchen (Modellnummer 260753)</td></tr><tr><td>50 ml Röhrchenkarussell</td><td>Boekel Scientific</td><td>260753</td><td>Verwendung mit Mini-Röhrchenrotator</td></tr><tr><td>Bambino&nbsp; Hybridisierungsofen</td><td>Boekel Scientific</td><td>230301</td><td>Ausrüstungsoption für die Surrogatrotation</td></tr><tr><td>HistoGel für die Probenverarbeitung</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td>Gel für die Probenverarbeitung, beschrieben in Schritt 5.2</td></tr><tr><td>Cryomold</td><td>Andwin Scientific</td><td>4566</td><td>15 mm x 15 mm x 5 mm</td></tr><tr><td>Gewebemarkierungsfarbstoff</td><td>Cancer Diagnostics, inc.&nbsp;</td><td>03000P</td><td>Kann zur Markierung von Surrogaten verwendet werden&nbsp; so dass mehrere Proben in eine Gewebekassette aufgenommen werden können&nbsp;</td></tr><tr><td>Klappbare Gewebekassetten&nbsp;</td><td>FisherBrand</td><td>22-272-416</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher</td><td>23-245-685</td><td></td></tr><tr><td>GoldSeal Objektträger Thermo</td><td>Scientific</td><td>3048-002</td><td></td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Fisher</td><td>X3P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, 200 proof (100%), USP</td><td>Decon Laboratories, Inc.</td><td>2805M</td><td></td></tr><tr><td>Hämatoxylin</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>Klärer</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7401</td><td></td></tr><tr><td>Bläuelösung</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7301</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal XYL-Aufnahme Medien</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>83124</td><td></td></tr><tr><td>Deckgläser</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-548-5G</td><td></td></tr></tbody></table>

herstellung und analyse von<em&gt; in vitro</em&gt; three dimensional mammakarzinoms surrogates

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

Dreidimensionale (3D) Kultur ist eine physiologisch relevante Methode Zellverhalten in vitro als zweidimensionale Kultur zu modellieren. Karzinome, Brustkarzinome, einschließlich, sind komplexe 3D-Gewebe von Krebs besteht Epithelzellen und Stromazellen Komponenten, einschließlich Fibroblasten und extrazelluläre Matrix (ECM). Doch die meisten in vitro - Modelle von Mammakarzinom nur von Krebs epithelialen Zellen bestehen, Weglassen des Stromas und damit die 3D - Architektur eines Tumors in vivo. Entsprechende 3D-Modellierung von Karzinomen ist wichtig für eine genaue Verständnis der Tumorbiologie, Verhalten und Ansprechen auf die Therapie. Jedoch wird die Dauer der Kultur und das Volumen von 3D-Modellen durch die Verfügbarkeit von Sauerstoff und Nährstoffe in der Kultur beschränkt. Hierin zeigen wir ein Verfahren, bei dem Mammakarzinom Epithelzellen und Stromazellen Fibroblasten in ECM integriert sind ein 3D Brustkrebs Surrogat zu erzeugen, das Stroma enthält und als kultiviert werden,solide 3D-Struktur oder durch eine Perfusionsbioreaktorsystem System unter Verwendung von Sauerstoff und Nährstoffe zu liefern. Nach Einrichtung und einer anfänglichen Wachstumsperiode Surrogate können für die präklinische Drogentests verwendet werden. Alternativ können die zelluläre und Matrixkomponenten des Surrogat modifiziert werden, um eine Vielzahl von biologischen Fragen anzugehen. Nach der Kultur werden fixiert und Surrogate, in einer Weise zur Auswertung von Parametern von Interesse für die Behandlung der klinischen Brustkarzinom Proben, ähnlich zu Paraffin verarbeitet. Die Auswertung eines solchen Parameters, der Dichte der Zellen vorhanden ist, erklärt, wobei ImageJ und CellProfiler Bildanalysesoftwaresysteme Photomikrographien von histologischen Schnitten von Surrogaten angewendet werden, um die Anzahl von nukleierten Zellen pro Fläche zu quantifizieren. Dies kann als ein Indikator für die Veränderung der Zellzahl über die Zeit oder der Veränderung der Zellzahl verwendet werden, die aus unterschiedlichen Wachstumsbedingungen und Behandlungen.

Sowohl feste und durchbluteten Surrogate 3D Brustkrebs wurden wie oben beschrieben hergestellt und gezüchtet für 7 Tage. Anschließend wurden Surrogate fixiert, verarbeitet zu Paraffin, geschnitten und gefärbt mit Hämatoxylin und Eosin, wie oben beschrieben. Die Zahl der kernhaltigen Zellen pro Fläche (beide 231-Zellen und CAF) jedes Surrogat wurde gemessen. Wie in Figur 12 repräsentativ Photomikrographien der H &amp; E-gefärbten Schnitten zeigen eine höhere Konzentration...

Wir demonstrieren eine Methode zur Erzeugung von 3D-Brustkrebs-Surrogaten, die mit einem Perfusionsbioreaktorsystem kultiviert werden können, um Sauerstoff und Nährstoffe zu liefern. Nach dem Wachstum werden Surrogate fixiert und zu Paraffin verarbeitet, um die interessierenden Parameter zu bewerten. Die Auswertung eines solchen Parameters, der Zelldichte, wird erläutert.

Herstellung und Analyse von<em&gt; In Vitro</em&gt; Three Dimensional Mammakarzinoms Surrogates

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, ...

Das übergeordnete Ziel dieser Verfahrensreihe besteht darin, dreidimensionale Zellkulturen zu erzeugen, die als in-vitro-Ersatzmodelle für Brustkrebs dienen, und eine Methode zur Messung des Zellwachstums in histologischen Schnitten dieser Ersatzmodelle vorzustellen. Die dreidimensionale Zellkultur ist eine physiologisch relevantere Methode zur Modellierung des Zellverhaltens in vitro im Vergleich zur zweidimensionalen Zellkultur. Durch die gezielte Veränderung der zellulären Zusammensetzung unter experimentellen Bedingungen kann diese Verfahrensreihe an eine Vielzahl biologischer Fragestellungen angepasst werden und ermöglicht die Bewertung der Wirksamkeit potenzieller therapeutischer Wirkstoffe.Um die Zellen in die ECM einzubetten, geben Sie die Zellen und die ersten vier in Tabelle 1 der begleitenden Veröffentlichung aufgeführten Komponenten auf Eis in ein 2-Millimeter-Mikrozentrifugenröhrchen. Mischen Sie die Komponenten anschließend vorsichtig durch Pipettieren und vermeiden Sie die Bildung von Blasen. Überwachen Sie den pH-Wert mithilfe des Phenolrots im 10XD MEM, um sicherzustellen, dass die Mischung eine orangerote Farbe aufweist, was einem pH-Wert von sieben entspricht.Wen

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Mit quantitative PCR, zeigen wir, wie die etablierten chick CAM-Modell verwendet werden, um quantitativ zu analysieren die Metastasierung von humanen Tumorzellen zu entfernten Organen sein.

Quantitative Analyse von Krebs Metastasen mit einem Vogelembryo Modell

Langfristige Culture of Human Breast Cancer Proben und deren Analyse mit Hilfe von optischen Projektion Tomography

In diesem Video beschreiben wir die Methode zur Co-Kultur von dorsalen Wurzelganglien und Krebszellen auf der chorioallantoischen Membran oder CAM von Küken, um die perineurale Invasion zu untersuchen.

Chorioallantoische Membran des Kükens oder CAM-Tumormodell: Eine In-Ovo-Methode zur Simulation der perineuralen Invasion von Tumorzellen

Dieser Artikel enthält detaillierte Methoden für die Verwendung von dreidimensionalen (3D-) Assays auf Brustkrebszellinvasion zu quantifizieren. Insbesondere diskutieren wir die Verfahren erforderlich, um solche Tests einrichten, Quantifizierung und Datenanalyse, sowie Methoden, um den Verlust der Membranintegrität, die bei Zellen eindringen tritt zu untersuchen.

Quantifizierung der Brustkrebs-Zelle Invasivität Mit einem Drei-dimensionale (3D) Modell

Die Invasion des umgebenden normalen Gewebes ist ein definierendes Merkmal von bösartigen Tumoren. Wir stellen hier einen einfachen, halbautomatischen Mikroplatten-Assay der Invasion in eine natürliche 3D-Biomatrix zur Verfügung, der mit einer Reihe von Modellen fortgeschrittener menschlicher Krebsarten veranschaulicht wurde.

Dreidimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasionsassay

Krebszellen werden in ein Kollagengel eingebettet und dann in ein azelluläres Fibringel eingebettet, um ein 3D-Kultursystem zu erzeugen, in dem die Invasivität und Bildung von Satellitentumoren überwacht werden kann.

Dreidimensionale Kulturtest auf Krebszelle Invasivität und Satelliten Tumorbildung erkunden

Hier beschreiben wir eine dreidimensionale Kultur-Methode, um die Morphologie des primären Brustkrebs-Zellen, sowie deren direkte/indirekte Wechselwirkungen mit Monozyten und die Ergebnisse wie Kollagen-Abbau, Immunzelle Rekrutierung, Zelle studieren analysieren Invasion, und Förderung der Krebs-in Verbindung stehenden Entzündung.

Analyse der Kommunikation zwischen Monozyten und primären Brustkrebs-Zellen in einer extrazellulären Matrix (ECME) extrahieren-basiertes dreidimensionales System

Diese Arbeit setzt ein fortschrittliches Protokoll vor, um die Tumorbelastung durch den Nachweis von grünen Fluoreszenzprotein- und Biolumineszenzsignalen sowie die Integration quantitativer molekularer Detektionstechniken genau zu bewerten.

Studieren von dreifach negativem Brustkrebs mit orthotopischem Brustkrebsmodell

Dieses experimentelle Protokoll beschreibt die Isolierung von BCSCs aus Brustkrebszell- und Gewebeproben sowie die in vitro und in vivo Assays, die zur Beurteilung des BCSC-Phänotyps und der BCSC-Funktion verwendet werden können.

Isolierung und funktionelle Beurteilung menschlicher Brustkrebsstammzellen aus Zell- und Gewebeproben

Dieser Artikel listet die Schritte auf, die erforderlich sind, um Neuroblastom-Zelllinien auf zuvor beschriebenen dreidimensionalen kollagenbasierten Gerüsten auszusäen, das Zellwachstum für einen vorbestimmten Zeitrahmen aufrechtzuerhalten und Gerüste für verschiedene Zellwachstums- und Zellverhaltensanalysen und nachgeschaltete Anwendungen zu gewinnen, die an eine Reihe von experimentellen Zielen angepasst werden können.

Dreidimensionales biomimetisches In-vitro-Modell des Neuroblastoms unter Verwendung von kollagenbasierten Gerüsten

Crosstalk zwischen Brustepithelzellen und Endothelzellen trägt wesentlich zum Fortschreiten von Brustkrebs, Tumorwachstum und Metastasierung bei. In dieser Studie wurden Sphäroide aus Brustkrebszellen zusammen mit vaskulären und/oder lymphatischen Endothelzellen hergestellt und demonstrieren ihre Anwendbarkeit als In-vitro-System für die Brustkrebsforschung.

Brustepithel- und Endothelzell-Sphäroide als potenzielles funktionelles In-vitro-Modell für die Brustkrebsforschung

Erfahren Sie die Herstellung von 3D-Mammakarzinom-Surrogaten in einem Perfusionsbioreaktor zur Analyse von Zelldichte und Wachstum. Diese Methode ermöglicht physiologisch relevante in-vitro-Modelle für Krebsforschung und Therapietests.

Herstellung und Analyse von

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