Name: Mikrofluidik-Pufferaustausch für einen störungsfreien Micro / Nanoparticle Zelltechnik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: Lernen Sie eine mikrofluidische Reinigungstechnologie zur effizienten Trennung freier Nanopartikel von Zellen mittels inertialer Mikrofluidik. Diese Methode ermöglicht Hochdurchsatzverarbeitung für die regenerative Medizin.

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Freundliches Geschenk von THP-1-Zellen von Dr. Mark Chong und Unterstützung bei der Mikrofabrikation von Dr. Yuejun Kang und Dr. Nishanth V. Menon (School of Chemical and Biomedical Engineering, Nanyang Technological University) wurden sehr geschätzt. Dieses Projekt wurde vom NTU-Northwestern Institute of Nanomedicine (Nanyang Technological University) finanziert. H.W.H. wurde durch das Postdoktorandenstipendium der Lee Kong Chian School of Medicine (LKCMedicine) unterstützt.

1. Nanopartikel (NPs) Kennzeichnung von mesenchymalen Stammzellen und Monozyten <ol><li> Kultur von mesenchymalen Stammzellen (MSCs) in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) vor der Markierung mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) und Antibiotika zu ≥80% Konfluenz ergänzt. Ähnlich Kultur THP-1 - Zellen (ATCC) in Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 - Medium mit 10% FBS auf eine Dichte von ~ 10 6 Zellen / ml ergänzt. </li><li> Last Silica-Nanopartikel (~ 500 &amp; mgr; m) mit Calceinfarbstoff-Lösung (200 &amp; mgr; M) über Nacht Rühren mit. Fabrizieren PLGA-Calcein AM (CAM) mit einem Protokoll zuvor beschrieben. 22 <ol><li> Man löst 250 ug CAM und 100 mg PLGA (50:50) in Chloroform bei 4 ° C. </li><li> Generieren Sie einzelne NPs Emulsion, die eine High-Speed-Homogenisator (13.600 · g, 60 sec) bei Raumtemperatur. Man dampft das Chloroform in einer chemischen Haube (≥3 hr) vor Sammlung mit Zentrifugation (3.400 × g für 5 min), Waschen (Doppel distiWasser gefüllt), Gefriertrocknung und Lagerung bei -20 ° C. </li></ol></li><li> CAM-PLGA NPs (1 mg) oder Calcein Siliciumdioxid NPs (150 ug) in 0,01% Poly-L-Lysin (PLL) Lösung bei Raumtemperatur inkubieren 15 - 20 min. </li><li> Zentrifuge bei 3.400 xg für 5 min überschüssige PLL Überstand vor NPs Resuspension in 1 ml der jeweiligen Kulturmedium zu entfernen. </li><li> Inkubieren der NPs mit Zellen (MSCs oder THP-1, ~ 1 - 2 mal 10 6 Zellen insgesamt) für etwa 24 Stunden (0,1 mg · ml -1 Markierungskonzentration). </li><li> Dissoziieren und Ernte der markierten anhaftende MSCs unter Verwendung von 2 ml von 0,25% Trypsin (5 min, 37 ° C) und Abschrecken mit 6 ml DMEM. Drehen , um die Zellen bei (1000 xg, 4 min) und resuspendieren zu einer Konzentration von 10 5 - 10 6 Zellen / ml für mikrofluidische Verarbeitung. Verwenden Sie markierten THP-1 - Zellen (10. Mai - 10. JUNI Zellen / ml) direkt für die Mikrofluidik Reinigung. </li></ol> 2. Mikrofluidik-Vorrichtung Vorbereitung <ol><li> Vorrichtung Fabrication <ol><li> Fabrizieren die mikrofluidische Spiraleinrichtung (500 &amp; mgr; m (w) × 115 &amp; mgr; m (h)) mit Polydimethylsiloxan (PDMS) von einem kommerziellen Kit unter Verwendung von Standard weichen Lithographieschritte. 23 </li><li> Mischen Sie 30 g Base Prepolymers und 3 g Mittel gründlich in einem Wägeschiffchen aushärtet. De-Gas das Gemisch in einem Exsikkator für 60 Minuten alle Luftblasen zu entfernen. </li><li> Gießen Sie die PDMS-Mischung auf den Siliziumwafer Masterform mit dem spiralförmigen Kanal Design strukturiert sorgfältig zu einer Höhe von ~ von 5 bis 10 mm. </li><li> De-Gas das Gemisch in einem Exsikkator Vakuum erneut 60 min alle Luftblasen zu entfernen. Wiederholen Sie den Vorgang, bis alle Blasen beseitigt werden. </li><li> Härten des PDMS-Mischung in einem Ofen bei 80ºC für 2 Stunden, bis das PDMS eingestellt ist. Sicherstellen, dass der Wafer nicht während der Aushärtung haben eine konstante Bauhöhe gekippt wird. </li><li> Schneiden Sie die PDMS-Spirale Gerät mit einem Skalpell und vorsichtig schälen die PDMS-Platte aus der Urform. </li><li> Trim, die Kanten der Vorrichtung mit einem Skalpell zum Bonden glatte Oberfläche zu gewährleisten. </li><li> Stanzen zwei Löcher (1,5 mm) für die Einlässe und zwei Löcher (1,5 mm) für die Auslässe auf der PDMS-Gerät mit einem 1,5 mm-Biopsie Tanze verwendet wird. </li><li> Waschen Sie das Gerät mit Isopropanol (IPA) alle Ablagerungen zu entfernen und das Gerät in einem 80 ° C Ofen für 5 Minuten trocknen lassen. </li><li> Reinigen Sie die Bodenfläche der PDMS-Gerät (mit Kanalfunktionen) unter Verwendung von Klebeband. </li><li> Sauber einer Seite eines Glasobjektträger (2 &quot;von 3&quot;) unter Verwendung von Klebeband. </li><li> Vorsichtig legen und die gereinigten Oberflächen der PDMS-Gerät und Glasträger in der Kammer eines Plasmareiniger aussetzen und unterziehen sie für 60 Sekunden Vakuum. Als nächstes schalten Sie die Plasmaleistung auf Maximum und den Kammerdruck zu senken, bis die Kammer rosa Farbe dreht. <ol><li> Expose die Oberflächen Luftplasma für 60 Sekunden. Das Plasma erzeugt reaktive Spezies auf den freiliegenden Oberflächen der PDMS und Glas, die feste Bindung ermöglicht, wenn sie in Physic gebrachtal Kontakt. Schalten Sie den Plasma-Gerät aus und lassen Sie den Druck aus dem Plasma-Reiniger das Gerät und Glasträger abzurufen. </li></ol></li><li> Bond, die PDMS-Gerät und Glasobjektträger zusammen mit dem Plasma ausgesetzten Oberflächen fest gedrückt und sicherzustellen, dass keine Luftblasen zwischen den beiden Oberflächen gefangen sind. </li><li> Erhitzen Sie das gebundene Gerät eine Heizplatte eingestellt bei 80 ° C für 2 Stunden mit der Bindung zu stärken. </li></ol></li><li> Gerätebetrieb <ol><li> Geschnitten, um zwei Schlauchstücke (1,52 mm OD) von ca. 15 bis 20 cm für die Einlass- Spritzen und Befestigen einer Spritzenspitze (Gauge 23) an einem Ende jedes Schlauch. </li><li> Geschnitten, um zwei Schlauchstücke (1,52 mm OD) von ca. 5 - 10 cm für die Auslässe und heften sich an den Austrittsöffnungen des PDMS-Gerät. </li><li> Vor Laufen zu probieren, das Gerät manuell prime mit einer Spritze 70% Ethanol enthält, bis sie aus dem Ablaufschlauch fließt. Ermöglichen das Ethanol sit für 30 sec bis 1 min, das Gerät zu sterilisieren. </li><li> Last 30 ml gefilterter(0,2 um Poren) Mantel-Puffer (Phosphat-gepufferte Saline (PBS) mit 0,1% Rinderserumalbumin (BSA)) in die 60 ml-Spritze und sichern die Spritze auf Spritzenpumpe. Stellen Sie die Pumpe auf die richtigen Einstellungen (Spritzengröße: 60 ml, Volumen: 60.000 ul). Anmerkung: Die Zugabe von BSA zu PBS ist Zell-Zell-Bindung und unspezifischer zwischen Zellen und der PDMS-Gerät Bindung zu minimieren. </li><li> Last 3 ml der markierten Zellen in die 3-ml-Spritze und sichern Sie die Spritze auf einem separaten Spritzenpumpe. Stellen Sie die Pumpe auf die richtigen Einstellungen (Spritzengröße: 3 ml, Volumen: 3000 ul). </li><li> Überprüfen Sie, dass keine Luftblasen in den Spritzen gefangen sind, eine stabile Strömung zu gewährleisten. Entfernen Sie alle Luftblasen durch vorsichtiges paar Tropfen Flüssigkeit Ausstoßen aus der Düse. </li><li> Schließen Sie die Einlass Spritze Spitzen und Schläuche an die Spritzen und fügen Sie sie in die jeweiligen Einlässe der Vorrichtung (Hülle und Probeneingang). Stellen Sie sicher, dass es keine Blasen entlang dem Schlauch sind. </li><li> Montieren Sie die Geräte auf einen Inverted Phasenkontrastmikroskop für die Echtzeitbildgebung während der Zellsortierprozess. </li><li> Sichern Sie sich einen kleinen Abfallbecher und zwei 15-ml-Röhrchen bei dem Gerät auf dem Mikroskoptisch unter Verwendung von Klebstoffen. </li><li> Die Austrittsschläuche in den Abfallbecher. </li><li> Stellen Sie den Stromverhältnis für die Probe zu Hülle Puffer bis 1:10 und starten die beiden Spritzenpumpen den Sortierprozess zu initiieren (Beispiel: 120 ml / min für die Probenspritze und 1200 ml / min für die Hülle Spritze; Kanalströmungsgeschwindigkeit ~ 0,38 m / sec ). </li><li> Führen Sie das Gerät für 1,5 min für die Strömungsgeschwindigkeit zu stabilisieren. Dies kann durch die Anwesenheit von inertially fokussierten Zellen in der Nähe der Kanalinnenwand unter Hellfeld mit Phasenkontrast mit einer Hochgeschwindigkeitskamera (-: 10-50 us 10.000 Frames pro Sekunde (fps), Belichtungszeit ~ 5000) bestätigt werden. </li><li> Positionieren Sie die Austrittsschläuche in verschiedene Röhrchen, die die Eluenten aus der Zelle Auslass und Abfallausgang zu sammeln. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Das DFF Zellreinigung hier beschriebene Technologie ermöglicht eine schnelle und kontinuierliche Trennung der markierten Zellen in einem Hochdurchsatz Weise. Diese Trennung Ansatz ist ideal für große Probenvolumen oder hohe Zellkonzentration Probenverarbeitung und ist besser als herkömmliche Membranbasis Filtration, die zu einer Verstopfung nach längerem Gebrauch anfällig ist. In ähnlicher Weise Affinität basierende magnetische Trennung erfordert eine zusätzliche Markierung von Zellen Schritte, die aufwendig und teuer s...

Zellen , die durch agenten geladen Mikro- / Nanopartikel (NPs) ist eine einfache, genomische Integration frei und vielseitige Methode zur Bioimaging - Fähigkeit zu verbessern und zu erweitern / Ergänzung seiner nativen therapeutischen Eigenschaften in der regenerativen Medizin - Engineering. 1-3 Cellular Modifikationen erreicht werden durch die Kennzeichnung Plasmamembran oder Zytoplasma mit einem Überschuss Konzentration des Mittels belasteten NPs die Bindungsstellen zu sättigen. Jedoch ist ein Hauptnachteil dieses Verfahrens , die signifikante Mengen an ungebundenen Partikel in Lösung verbleibt nach dem Zellmarkierungsverfahren, die möglicherweise eine genaue Identifizierung von partikel manipulierten Zellen vermengen können oder therapeutische Ergebnisse erschweren. 4,5 Zusätzlich Exposition gegen NPs enthält transformierende Mittel (Wachstumsfaktoren, Kortikosteroide, etc.) bei zu hoher Konzentration kann Zytotoxizität und misdirected Exposition verursachen unerwünschte Folgen auf nicht-Zielzellen induzieren kann. partikuläre Träger Selbst umfassend of &quot;biokompatibel&quot; Materialien [zB Poly (milch co-Glykolsäure), PLGA] kann auch potente Immunzell - Reaktionen unter bestimmten Bedingungen anstiften. 6 Dieses bei Personen mit eingeschränkter Immunität besonders riskant ist (zB rheumatoide Arthritis) , die möglicherweise Verzögerungen systemische Clearance Nanopartikels. 7 somit effiziente Entfernung von freien Teilchen vor der Einführung des partikel manipulierten Zellen ist von großer Bedeutung Toxizitätsprofil zu minimieren und misdirected Exposition gegenSubstanz beladenen Partikel in vivo reduzieren. Herkömmliche Gradientenzentrifugation wird oft zu trennen manipulierten Zellen von freien Teilchen verwendet, ist aber umständlich und im Batch-Modus betrieben werden. Darüber hinaus kann durch Zellen erfahrenen Scherspannungen während des hochtourigen Zentrifugation und die Bestandteile des Dichtegradientenmedium kompromittieren Integrität Zelle und / oder Beeinflussung des Zellverhaltens. 8 Microfluidics ist eine attraktive Alternative mit sevrere Trenntechnologien einschließlich deterministische seitliche Verschiebung (DLD) 9, dieletrophoresis 10,11 und acoustophoresis 12 kleine Partikel Trennung und Pufferaustausch - Anwendungen entwickelt wurde. Jedoch leiden diese Methoden von geringem Durchsatz (1-10 &amp; mgr; l · min - 1) und sind anfällig für Probleme zu verstopfen. Aktive Trennungen wie Dielektrophorese-basierten Verfahren benötigen auch Unterschiede in der intrinsischen dielektrophoretischen Zellphänotypen oder zusätzliche Zellmarkierungsschritte zur Trennung erzielen. Ein vielversprechender Ansatz beinhaltet Trägheits Mikrofluidik - die seitliche Wanderung der Partikel oder Zellen über rationalisiert an bestimmten Positionen durch dominante Auftriebskräfte (F L) bei hohen Reynolds - Zahl (Re) 13 Aufgrund der hohen Strömungsverhältnisse und überlegene Größe Auflösung zu konzentrieren. ist es oft für größenbasierte Zellseparation 14,15 und Pufferaustausch - Anwendungen genutzt werden . 16-18 However, Pufferaustauschleistung bleibt mit ~10-30% Verunreinigung Lösung schlecht wie die getrennten Zellen in der Regel zwischen ursprünglichen und neuen Pufferlösungen an die Grenze dicht bleiben. 16-18 Noch wichtiger ist , hat auf die Größenverteilung von Zielzellen ähnlich sein zu erreichen , präzise Trägheits Fokussierung und Trennung von der ursprünglichen Pufferlösung , die ein Problem insbesondere bei der Verarbeitung von heterogenen großen Zelltypen wie mesenchymalen Stammzellen (MSCs) darstellt. 19 Wir haben bereits eine neue Trägheits Mikrofluidik Zellsortierung Technik bezeichnet Dean Flow Fractionation (DFF) zur Isolierung von zirkulierenden Tumorzellen (CTC) 20 und Bakterien 21 aus Vollblut unter Verwendung eines 2-Eingang, 2-Auslass Spiralmikrokanalgerät entwickelt. In diesem Video-Protokoll, werden wir den Prozess der Etikettierung THP-1 (humane akute monozytäre Leukämie-Zelllinie) Suspension monozytären Zellen (~ 15 &amp; mgr; m) und MSCs (10-30 &amp; mgr; m) mit Calcein-l beschreibenoaded NPs, gefolgt von der Herstellung und dem Betrieb der DFF Spiralmikrovorrichtung zur effizienten Rückgewinnung von markierten Zellen und das Entfernen von ungebundenem NPs. 22 Diese einstufigen Reinigungsstrategie ermöglicht eine kontinuierliche Rückgewinnung von markiertem Suspension und haft in frische Pufferlösung ohne Zentrifugation suspendierten Zellen. Darüber hinaus kann es bis zu 10 Millionen Zellen verarbeiten · ml -1, eine Zelldichte zugänglich für die regenerative Medizin - Anwendungen.

<table><tbody><tr><td>Zelllinien & Medien</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mesenchymale Stammzellen (MSCs)</td><td>Lonza</td><td>PT-2501</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco" s modifizierter Eagle" s Medium (DMEM)</td><td>Lonza</td><td>12-614F</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>THP-1 Monozytenzellen (THP-1)</td><td>ATCC</td><td>TIB-202</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medien</td><td>Lonza</td><td>12-702F</td><td></td></tr><tr><td>Reagenzien & Materialien</stark>0,01</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>% Poly-L-Lysin (PLL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr><tr><td>3 ml Spritze</td><td>BD</td><td>302113</td><td>Spritze 3 ml Luer-Lock</td></tr><tr><td>60 ml Spritze</td><td>BD</td><td>309653</td><td>Spritze 60 ml Luer-Lock</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA)</td><td>Biowest</td><td>P6154-100GR</td><td></td></tr><tr><td>Calcein, AM (CAM)</td><td>Life Technologies</td><td>C1430</td><td></td></tr><tr><td>Calcein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0875</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Chemical</td><td>#P/7507/17</td><td>HPLC Grade 2,5 L</td></tr><tr><td>phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Lonza</td><td>17-516Q/12</td><td></td></tr><tr><td>Einfache Objektträger</td><td>Fisher Scientific</td><td>FIS#12-550D</td><td>75 x 25 x 1 mm3</td></tr><tr><td>Polydimethylsiloxan (PDMS)</td><td>Dow Corning</td><td>SYLGARD&reg; 184</td><td></td></tr><tr><td>Klebeband</td><td>3M</td><td>21200702044</td><td>18 mm x 25 m</td></tr><tr><td>Silica NPs (&sim; 200 &mu; m)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>748161</td><td>Porengröße 4 nm</td></tr><tr><td>Spritzenspitze</td><td>JEC Technology</td><td>7018302</td><td>23 G 0,013 x 0,25</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25%)</td><td>Life Technologies</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Tygon Schlauch</td><td>Spectra-Teknik</td><td>06419-01</td><td>0,02 x 0,06" 100</td></tr><tr><td>Poly (D,L-Lactid-co-glycolid) (PLGA; 50:50)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2191</td><td></td></tr><tr><td>EquipmentBiopsie-Stanze</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Harris Uni-Core</td><td>69036-15</td><td>1,50 mm</td></tr><tr><td>Exsikator</td><td>Scienceware</td><td>111/4 IN OD</td><td></td></tr><tr><td>High-speed Kamera</td><td>Phantom&nbsp;</td><td>V9.1</td><td></td></tr><tr><td>Inverses Phasenkontrastmikroskop&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti</td><td></td></tr><tr><td>Plasma Reiniger</td><td>Harrick Plasma</td><td>PDC-002</td><td></td></tr><tr><td>Spritzenpumpe</td><td>Chemyx</td><td>CX Fusion 200</td><td></td></tr></tbody></table>

mikrofluidik-pufferaustausch für einen störungsfreien micro / nanoparticle zelltechnik

Microfluidic Buffer Exchange for Interference-free Micro/Nanoparticle Cell Engineering

Engineering-Zellen, die mit wirkstoffbeladenen Mikro- / Nanopartikel (NPs) ist ein zunehmend beliebte Methode nativen therapeutischen Eigenschaften zu verbessern, Bio-Bildgebung ermöglichen und Zell-Phänotyp steuern. Eine kritische noch unzureichend angesprochen Problem ist die beträchtliche Anzahl von Teilchen, die nach der Zellmarkierungs ungebunden bleiben, die nicht leicht durch herkömmliche Zentrifugation entfernt werden kann. Dies führt zu einer Erhöhung der bio Abbildungshintergrundrauschen und transformierende Wirkung auf benachbarte Nicht-Zielzellen vermitteln. In diesem Protokoll präsentieren wir ein Trägheits Mikrofluidik-basierten Pufferaustausch Strategie bezeichnet als Dean Flow Fractionation (DFF), um effizient markierten Zellen von freien Nanopartikeln in einem hohen Durchsatz Weise trennen. Die entwickelte Spiralmikrovorrichtung ermöglicht eine kontinuierliche Sammlung (&gt; 90% Zell recovery) von gereinigten Zellen (THP-1 und MSCs) in neue Pufferlösung suspendiert, während&gt; 95% Abreicherung von ungebundenen Fluoreszenzfarbstoff zu erreichen oder farbstoffbeladenen NPs (silica oder PLGA). Dieses einstufige, größenbasierte Zellreinigungsstrategie ermöglicht hohe Zellverarbeitungsdurchsatz (10 6 Zellen / min) und ist sehr nützlich für die großvolumige Zelle Reinigung von Mikro- / Nanopartikel - Zellen entwickelt , störungsfreie klinische Anwendung zu erzielen.

Nach der Markierung NPs die Zellen mit Bio - Bildgebungsmittel beladene über Nacht, die markierten Zellen (die freie Teilchen) werden geerntet und gereinigt durch DFF Spirale Mikroeinrichtung zum freien NPs in einem einstufigen Verfahren (1A) zu entfernen. Der 2-Eingang, 2-Auslass Spiralmikrokanal wird durch Engineering-Software entwickelt und mikro Su-8 verwenden. Die strukturierte Silizium - Wafer wird dann als Vorlage für die PDMS Replik Formen mit weichen Lithographi...

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung eines Trägheits Mikrofluidik-basierten Pufferaustausch Strategie zu Mikro- / Nanopartikel manipulierten Zellen mit einer effizienten Abbau von nicht gebundenen Partikel zu reinigen.

Mikrofluidik-Pufferaustausch für einen störungsfreien Micro / Nanoparticle Zelltechnik

Engineering cells with active-ingredient-loaded micro/nanoparticles (NPs) is becoming an increasingly popular method to enhance native therapeutic ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine praktische, effiziente und hochdurchsatzfähige mikrofluidische Reinigungstechnologie zur Trennung freier Nanopartikel von Zellen nach der Zellengineering-Behandlung mit Nanopartikeln zu demonstrieren. Der Hauptvorteil dieser Technologie liegt darin, dass ungebundene Nanopartikel nach dem Zellbehandlungsverfahren schnell und effizient entfernt werden können. Nach dem Zellbehandlungsschritt sammeln wir alle unsere ses-fa-tion. Diese mikrofluidische Zellreinigungstechnologie ermöglicht eine effiziente, größenbasierte Trennung aufgrund der unterschiedlichen trägheitsbedingten Fokussierungseffekte von Zellen und Nanopartikeln in einem spiralförmigen Mikrogerät.Es kann bis zu 10 Millionen Zellen pro Mil-Konzentration verarbeiten, was für die regenerative Medizin sowie für die Verarbeitung von Latch-Volumen-Zellen sehr nützlich ist. Diese Technologie ist im Bereich der Zellengineering stark gefragt, wo häufig Nanopartikel zur Markierung von Zellen für bildgebende Verfahren oder zur Funktionskontrolle eingesetzt werden. Die Durchführung des Verfahrens wird Hui Min Tay, eine wissenschaftliche Assistentin aus meinem Labor, sowie Do

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Dieses Video zeigt ein mikrofluidisches System für einen magnetischen Nanopartikel-basierten Immunoassay. Das Detektionssystem verwendet ein mikrofluidisches Gerät, das eine Magnetfalle in seine Kanäle integriert. In die Kanäle werden vorgeformte Immunkomplexe eingeführt, die aus antigenbeschichteten magnetischen Nanopartikeln bestehen, die an primäre und peroxidase-konjugierte Sekundärantikörper gebunden sind. Die Immunkomplexe werden in der porösen Magnetfalle eingefangen, wenn ein externes...

Ein magnetischer Nanopartikel-basierter Immunoassay mit einem mikrofluidischen Gerät

In diesem Artikel präsentieren wir ein Mikrofluidik-Chip für Einzelzellanalyse. Es ermöglicht die Quantifizierung der intrazellulären Proteine, Enzyme, Cofaktoren und zweiten Boten mittels Fluoreszenzassays oder Immunoassays.

Eine mikrofluidische Chip für die vielseitige chemische Analyse von Einzelzellen

Dieses Protokoll beschreibt eine Systemarchitektur für die Durchführung automatisierter Partikeltrennungen mit kleinen Volumina (0,15–1,5 ml) unter Verwendung eines mikrofluidischen Geräts und diskutiert Methoden zur Optimierung der Leistung und des Betriebs von akustofluidischen Geräten.

Einem mikrofluidischen Plattform für Präzisions-Kleinvolumen Probenbearbeitung und seine Verwendung zur Größe Separate biologische Partikel mit einem Acoustic Microdevice

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Isolierung und Kultivierung einzelner Zellen mit einer mikrofluidischen Plattform, die ein neues Mikrotiter-Designkonzept verwendet, um eine hocheffiziente Einzelzellisolierung und eine langfristige klonale Kultur zu ermöglichen.

Ein Mikrofluidik-Plattform für Hochdurchsatz-Einzelzell-Isolierung und Kultur

Wir schlagen eine einfache Selbstorganisationstechnik von kolloidalen Siliziumdioxid-Nanopartikeln vor, um eine nanofluidische Verbindung zwischen zwei Mikrokanälen in Polydimethylsiloxan (PDMS) zu erzeugen. Mit dieser Technik wurde eine nanoporöse Kügelchenmembran mit einer Porengröße von bis zu ~45 nm in einem Mikrokanal aufgebaut und auf die elektrokinetische Vorkonzentration von DNA-Proben aufgebracht.

Erstellen von Unter 50 Nm nanofluidische Junctions in PDMS mikrofluidischen Chip über Selbstorganisation von kolloidalen Teilchen

Das Protokoll für eine neuartige Ionenkonzentrationspolarisation (ICP) Plattform, die die Ausbreitung der ICP Zone stoppen kann, unabhängig von den Betriebsbedingungen beschrieben. Diese einzigartige Fähigkeit der Plattform liegt in der Verwendung von Ionenerschöpfungs und Anreicherung verschmelzenden, die zwei Polaritäten des ICP Phänomen sind.

Zusammenführen von Ionenkonzentration Polarisierung zwischen Juxtaposed Ionenaustauschermembranen zu blockieren die Ausbreitung der Polarisations Zone

Wir präsentieren ein mikrofluidisches System für Hochdurchsatzstudien an komplexen Lebensmaschinen, das aus 1500 Kultureinheiten, einer Reihe verbesserter Peristaltikpumpen und einem Mischmodul vor Ort besteht. Der mikrofluidische Chip ermöglicht die Analyse der hochkomplexen und dynamischen Mikro-Umgebungsbedingungen in vivo.

Erzeugung dynamischer Umgebungsbedingungen mit einem hochdurchsatzstarken mikrofluidischen Gerät

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine pneumatische mikrofluidische Plattform, die für eine effiziente Mikropartikelkonzentration verwendet werden kann.

Pneumatisch angetriebene mikrofluidische Plattform für die Mikropartikelkonzentration

Die Mikrofluidik ist ein leistungsfähiges Werkzeug für die Entwicklung diagnostischer Tests. Oft sind jedoch teure Geräte und Materialien sowie aufwändige Fertigungs- und Handhabungstechniken erforderlich. Hier beschreiben wir das Herstellungsprotokoll eines mikrofluidischen Acrylgeräts für magnetische Mikro- und Nanopartikel-basierte Immunoassays in einer kostengünstigen und einfach zu bedienenden Umgebung.

Computer Numerical Control Micromilling of a Microfluidic Acrylic Device with a Staggered Restriction for Magnetic Nanoparticle-based Immunoassays

Dieses Protokoll beschreibt ein unkompliziertes Verfahren, bei dem praktische Kunststoff-Mikroformen für einfache Mikroprägevorgänge verwendet werden, um Mikrokanäle auf nanofibrilliertem Zellulosepapier herzustellen, wobei eine Mindestbreite von 200 μm erreicht wird.

Mikroprägung: Ein praktisches Verfahren zur Herstellung von Mikrokanälen auf Mikrofluidik auf Nanozellulosepapier

Das Protokoll beschreibt eine fortschrittliche mikrofluidische Plattform zur quantitativen Messung der Zytokinsekretionsdynamik einzelner mononukleärer Zellen des menschlichen peripheren Blutes. Die Plattform misst bis zu drei Zytokine parallel (IL-6, TNFα und IL-1β) für jede einzelne Zelle, die beispielsweise mit Lipopolysaccharid stimuliert wird.

Mikrofluidischer Ansatz zur Auflösung der gleichzeitigen und sequentiellen Zytokinsekretion einzelner polyfunktioneller Zellen 

Lernen Sie eine mikrofluidische Reinigungstechnologie zur effizienten Trennung freier Nanopartikel von Zellen mittels inertialer Mikrofluidik. Diese Methode ermöglicht Hochdurchsatzverarbeitung für die regenerative Medizin.

Mikrofluidik-Pufferaustausch für einen störungsfreien Micro / Nanoparticle Zelltechnik

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