Name: Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Lernen Sie die Induktion von ischämischem Schlaganfall bei Mäusen mittels Mittelhirnarterienokklusion. Diese Methode ermöglicht die direkte Behandlungsinfusion in die betroffene Hemisphäre für Schlaganfallforschung.

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Wir möchten uns bei Dr. Lei Chen (Icahn School of Medicine at Mount Sinai, NY) bedanken, der dieses Modell zuerst in unserem Labor etabliert hat. Teilweise unterstützt von HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 und NSC 2015/17/B/NZ7/02985. Dr. Luc Bertrand wird unter anderem durch ein Postdoc-Stipendium der American Heart Association (16POST31170002) unterstützt.

Alle Verfahren wurden von der University of Miami Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) in Übereinstimmung mit den National Institutes of Health (NIH) Richtlinien zugelassen. Die Verwendung in sterile Geräte und aseptischer Techniken erforderlich ist. 1. Vorbereiten der Occlusion Suture <ol><li> Verwenden einer Naht von 0,21 mm Durchmesser für Mäuse zwischen 20 bis 25 g und 0,23 mm für Mäuse zwischen 25 - 35 g Körpergewicht. Die Wahl der Art von Nähten für die MCAO Verfahrens beruht auf Tiergewicht. </li><li> Mit einem silbernen Stift, markieren Sie die Naht auf 9 mm von der silikonbeschichteten Spitze beginnen. Dies wird als Leitfaden für die Einbaulänge dienen. </li></ol> 2. Vorbereitung für Chirurgie <ol><li> Anesthetize Maus mit Isofluran mit Sauerstoff gemischt, ein Labor, Anästhesie-System. Verwenden Sie Isofluran bei Einstellung 5 und Sauerstoffstrom bei 2 auf der kommerziellen Maschine (siehe Werkstoff - Tabelle). Übertragen Sie das Tier auf dem Weg surgery Oberfläche und Aufrechterhaltung der Anästhesie einen Nasenkegel mit (Verwendung von Isofluran Einstellung 1,5-2,5 und Sauerstoffstrom bei 2). <ol><li> Stellen Sie sicher, dass die Maus Atemfrequenz liegt bei etwa 1 bis 2 Atmung pro Sekunde ohne Keuchen. Darüber hinaus gewährleisten, dass das Tier nicht Whiskers Stimulation nicht aufweist Reaktion und Pedal Reflex (toe Prise). Überwachen Sie die Atemfrequenz und Aufwand während der Operation, mindestens alle 5 Minuten. </li></ol></li><li> Geben Sie einen Tropfen ophthalmische Schmiermittel auf jedes Auge einen sterilen Tupfer, sie zu verhindern, dass während des Verfahrens zu trocknen. Alternativ gelten ophthalmischen Salbe in das Auge aus einer sterilen pharmazeutischen Röhre. </li><li> Flip das Tier auf den Rücken und rasieren den Schnittbereich. Anschließend desinfizieren gründlich den OP-Bereich 70% Ethanol, gefolgt von Chlorhexidin, und die endgültige Tupfer mit 70% Ethanol. Legen Sie das Tier an einem warmen chirurgischen Oberfläche unter einem Stereomikroskop. </li></ol> 3. Dissektion der Arteria carotis communis und interne / External Branching <ol><li> Mit chirurgische Schere und Pinzette, führen Sie einen flachen Mittelschnitt im Nacken, von oberhalb des Brustbeins bis unterhalb des Kiefers (ca. 3-4 cm). Operationstuch sollte rund um den OP-Bereich platziert werden Instrumente zu verhindern, dass in Kontakt mit nicht sterilen Oberflächen kommen. Das Operationstuch wurde in der aktuellen Video weggelassen Filmen zu unterstützen. </li><li> Mit einer Pinzette vorsichtig getrennte Fett- und Bindegewebe, um die Luftröhre aus. Gewebe sollte leicht und natürlich auf beiden Seiten zu trennen. </li><li> Legen Sie ein Kissen (rundes Objekt, etwa 0,5 cm im Durchmesser) auf der Rückseite des Halses der Mäuse den Hals zu verlängern, das weiterhin den Bereich für die Operation auszusetzen. </li><li> Öffnen Sie den Einschnitt entweder mit einem Geweberetraktor oder Haken. </li><li> Auf der linken Seite der Trachea des Tieres, tweeze sorgfältig das Bindegewebe neben der linken Arteria carotis communis (CCA) zu belichten. Achten Sie darauf, nicht die Nerven zu schädigen und die wichtigsten mit dem CCA gebündelten Adern. </li><li> Fortsetzung der CCA aussetzt, vorsichtig von darunterliegenden Gewebe zu lösen, und setzen die oben &quot;Y&quot; Verzweigung der inneren Hirnarterie (ICA) und externe Arteria cerebri (ECA). Zur Unterstützung des CCA in Abnehmen, legen Sie die gebogenen Pinzette unter der CCA das Bindegewebe zu durchdringen und dann langsam erlauben , sie zu öffnen. </li></ol> 4. Vorbereitung der CCA für die MCAO Suture Insertion <ol><li> Legen Sie drei Segmente von Nylonfaden von etwa 4 cm in der Länge unter der CCA. Stellen Sie sicher, dass der CCA nicht verdreht ist, da dies drastisch um das Einsetzen des Naht erschweren würde. </li><li> Am tiefsten Punkt möglich, schließen Sie die untere Naht einen permanenten Knoten. </li><li> Binden Sie die obere Naht knapp unter dem ICA / ECA Verzweigung einen herausnehmbaren Schlupf Knoten. </li><li> Binden Sie die mittlere Naht einen abnehmbaren Laufknoten verwenden, aber halten Sie es weit offen. Es ist wichtig, viel Platz zu verlassen, da nicht Naht Einsetzen zu verhindern. </li><li> Mit microdissection Frühjahr scissors, führen Sie einen Einschnitt in der CCA zwischen dem unteren und mittleren Nähten. Führen Sie die 0,2 mm Einschnitt nahe dem Boden Naht. </li></ol> 5. Middle Cerebral Artery Occlusion <ol><li> Mit einer Pinzette, legen Sie die MCAO Naht in die CCA Einschnitt, Führungs es bis an die Spitze. Führen Sie diesen Schritt schnell nach dem Schritt 4,5 bis Blutgerinnung und Schließen der CCA Öffnung verhindern. Für den Fall, dass Naht Einsetzen blockiert ist, verwenden Sie die Spitzen der Zange den Schnitt wieder zu öffnen. </li><li> binden vorsichtig die mittlere Naht auf der MCAO Nahtsilikonteil einen Belegknoten mit den Blutfluss um es zu beschränken, aber locker genug, um es zu ermöglichen, sich frei zu bewegen. </li><li> Vorsichtig lösen Sie die obere Naht, um sicherzustellen, dass die MCAO Naht nicht herausrutschen. </li><li> Legen Sie die MCAO Naht in der ICA um ein paar Millimeter und dann die obere Naht wieder geschlossen, in der gleichen Weise wie in Schritt 5.2 beschrieben. </li><li> Führen Sie die MCAO Naht an der Okklusion Bereich. Anzeige der erfolgreichen Insertionoffensichtlich durch die geringe Menge an Blutrückfluss aus dem CCA Schnitt und dass die Silber-9-mm-Markierung wird zwischen dem CCA Einschnitt und der ICA / ECA Bifurkation entfernt. Eine weitere Bestätigung der erfolgreichen Okklusion kann Überwachungsverfahren unter Verwendung von beispielsweise einem Laser - Doppler - Blutströmungsüberwachungssystem 15, 16 erhalten werden. HINWEIS: Ein Tropfen in 90% der den Blutfluss zum Gehirn mittleren Bereich auf der okkludierte Bereich Seite zeigt die erfolgreiche Okklusion. </li><li> Nach dem erfolgreichen Verschluss, binden Sie die mittlere und obere Naht fest nach unten. Wenn Schein Einfügung ausgeführt werden, dürfen nicht Nähte wieder zu verschließen, sondern sofort überspringen 7.3 zu treten. </li></ol> 6. Incision Closing und postoperative Pflege <ol><li> Tuck in den Nähten in den Schnittbereich. </li><li> Entfernen Aufroller oder Gewebehaken und Kissen. </li><li> Saubere Nahtbereich mit einer sterilen Kochsalzlösung und mit einem Wattestäbchen. </li><li> Schließen Sie den Schnitt mit Nylonfaden / Nadel und Pinzette. </li> &lt;li&gt; Verwalten entzündungshemmende (zB Carprofen 10 mg / kg, sc) und analgetische ( zum Beispiel Buprenorphin 0,1 mg / kg sc, zweimal täglich) Drogen postoperative Beschwerden zu lindern. Legen Sie die Mäuse in einem Käfig auf einem Heizkissen platziert Hypothermie zu verhindern und ad labium Zugang zu Wasser und erweicht Nahrung geben. </li><li> Überwachen Sie die Wiederherstellung von Tieren (5 - 10 min) und auf Anzeichen von Schlaganfall. Sie können von einer leichten seitlichen Lähmung variieren und kreisen zu starken Kontraktion der Gegenflanke und Rollen. Mehrere Bewertungspunkte werden in der Diskussion aufgeführt. Tiere Anzeichen von Atemnot oder schwere Anfälle Anzeige sollte eingeschläfert werden. </li><li> Je nach Ischämie Reperfusion Protokoll, lassen Sie die MCAO Naht anstelle von 30 min bis 120 min oder mehr. Okklusionszeit Reduzierung verhindert Mortalität. </li><li> Für einen dauerhaften Verschluss, lassen Sie die MCAO Naht an Ort und Stelle für 24 Stunden, jedoch signifikante Mortalitätsrate zu erwarten ist. Nach dieser Zeit außer Kraft treten, gehen steS. 7. <ol><li> Bei der Verwendung von permanenten Okklusion Modell, halten Mäuse im Käfig bis Endpunkt. Zu diesem Zeitpunkt entfernen Naht (Schritte 7,1-7,8). Dieses Verfahren kann auch nach der Euthanasie durchgeführt werden. </li></ol></li></ol> 7. Reperfusion <ol><li> Anesthetize das Tier wieder (folgen Sie den Anweisungen in 2.1) und Wundverschluss Nähte entfernen. </li><li> Mit einer Pinzette und Gewebe-Separatoren, die Inzision wieder öffnen und die CCA aussetzen. </li><li> Sie vorsichtig die obere Naht entfernen und vorsichtig auf die MCAO Naht ziehen, bis das Silikon beschichtete Teil in der Mitte Knoten befindet. </li><li> Wiederholen Sie die oben Knoten auf der Naht Blut zu verhindern, dass das Fließen des Naht passieren (es muss nicht ein Belegknoten sein). </li><li> Vorsichtig den mittleren Knoten lösen und die Naht nach dem oberen Knoten ziehen, aber es innerhalb des CCA halten. </li><li> Dicht schließen Sie die obere Knoten Arterie den Blutfluss zu blockieren. </li><li> Ziehen Sie vollständig die MCAO Naht und schließen dicht den mittleren Knoten. </li><li> Die MCAO Naht kannwiederverwendet mehrmals. Nach jedem Gebrauch reinigen Sie die Naht vorsichtig in 70% Ethanol Verunreinigungen (zB Blut oder Gewebe) mit einer sterilen Gaze zu entfernen. Danach legen Sie die Naht in einem Sterilisator Beutel und sterilisieren. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 6,1-6,4 und Tier Erholung zu überwachen. </li></ol> 8. Gewebeanalyse <ol><li> Zur Überwachung des Schlagvolumens, sezieren aus dem Gehirn. <ol><li> Euthanize die Maus einen zweistufigen Prozess. Zunächst aussetzen, das Tier zu einer Überdosierung von Isofluran bis Atemstillstand. Für TTC-Färbung, enthaupten die Maus sofort und fahren Sie mit Gehirn-Extraktion. Für Hirnschnitt (zB für Immunofärbung Analysen), die Perfusion über eine Herzpunktion vor der Enthauptung zuführen. </li><li> den Kopf an der Basis des Schädels und schneiden Sie die Kopfhaut von der Halsöffnung an der Oberseite des Schädels bis zwischen den Augen Cut-off. Mit dem Schädel ausgesetzt, schneiden Sie den Knochen auf beiden Seiten von der Schädelbasis Öffnung beginnenbis zur Augenhöhle. Machen Sie diesen Schnitt entlang der breiten Teil des Schädels. Seien Sie vorsichtig, nicht zu tief zu erreichen mit einer Schere zu schädigen das Gehirn zu verhindern. </li><li> Danach schneiden Sie den Knochen zwischen den beiden Augenhöhlen. </li></ol></li><li> Mit einer Pinzette, heben Sie die Oberseite des Schädels bis das Gehirn aus. Es sollte nur ein geringer Widerstand sein. Wenn es nicht leicht anheben, Schädel Einschnitte unvollständig sein kann. Hebeln Sie das Gehirn sanft stumpf gebogenen Pinzette. Das Gehirn kann noch durch mehrere Nerven angebracht werden. Fahren Sie langsam, Anlagen auf dem Weg zu entfernen. </li><li> Legen Sie die frische Gehirn in einem 1 mm Gehirn Matrix, fügen Sie ein paar Tropfen PBS, und in Scheiben schneiden entlang der Matrix mit einer Rasierklinge oder Kryostaten Klinge. </li><li> Übertragen Sie das Gehirn auf eine 100-mm-Schale und fügen Färbelösung (2% 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid [TTC], gelöst in PBS), um den Boden der Schale zu bedecken. Mit Hilfe von zwei Zangen, trennen Sie alle Gehirnscheiben (vorne nach unten) und legen Sie sie an der Unterseite der Schale um. HINWEIS: Die Färbung wird sich lebensfähiges Gewebe rot, mit nicht lebensfähiges Gewebe verbleibenden weißen. Erwärmen der Lösung auf 37 ° C beschleunigt Färbung. Anzeichen für einen Schlaganfall Bereich (weiß) so schnell wie 90 Minuten nach Schlaganfall und bleiben für mehr als 7 Tage sichtbar zu sehen ist. Imaging sollte zusammen mit einem Lineal erfolgen Berechnung des Schlagvolumens zu ermöglichen. </li><li> Prozess seziert Gehirne für das Schneiden, Immunfärbung, Proteinisolierung oder eine Vielzahl von anderen Verfahren 17, 18, 19. </li></ol>

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Autoren haben keine konkurrierenden oder Interessenkonflikte.

Die erfolgreiche Anwendung des beschriebenen Verfahrens MCAO ist stark abhängig von einem Verständnis der Hirndurchblutung Anatomie. Da die korrekte Platzierung der Naht ist schwer aufgrund des fehlenden direkten visuelle Hinweise zu erkennen, wird wiederholt der Praxis wichtig, das Verfahren zu meistern, bevor es für den Untersuchungen verwendet. Hubvolumen sollten konsistente Ergebnisse zu gewährleisten, werden analysiert. Die Zugabe eines Laser-Doppler-System kann dazu beitragen, die erfolgreiche Okklusion des Blutfl...

Die Studie von kardiovaskulären Erkrankungen, wie Schlaganfall, beruht auf der Verwendung von in vivo - Modellen. Um die möglichen Auswirkungen von Ischämie, Arzneimitteltoxizität zu verstehen und / oder Behandlung, besteht ein Bedarf, einen geeigneten, standardisiert, zuverlässig zu verwenden und reproduzierbares Modell der Krankheit, die zwischen den Behandlungsgruppen vergleichende Untersuchungen ermöglicht. In diesem Manuskript, verwenden wir Mäuse, da die Verfügbarkeit einer großen Anzahl von transgenen Mäusen und standardisierte Bewertungsmodelle. Raking Partituren Motor und Verhaltensdefiziten folgenden experimentellen ischämischen Schlaganfall und der folgenden Erholung wurden 1 zu beurteilen , entwickelt, 2. Mehrere ischämischen Schlaganfall-Modelle stehen zur Verfügung, wie zum Beispiel komplette globale zerebrale Ischämie, unvollständige globale Ischämie, multifokale zerebrale Ischämie und fokaler zerebraler Ischämie. Die letztere Gruppe ist auch die Kategorie des Schlaganfalls am häufigsten bei Patienten. Die Mehrheit der Vorabendnts werden durch die Bildung eines embolischen oder thrombotischen Okklusion an oder nahe der mittleren zerebralen Arterie (MCA) initiiert. Vor dem Hintergrund dieser Parameter präsentierte das Modell ahmt Krankheitsätiologie des menschlichen Schlaganfall und macht erhaltenen Ergebnisse höchst relevant 3. Dennoch hat sich die Übersetzung von Entdeckungen aus Tiermodellen auf die Behandlung von Krankheiten beim Menschen erwiesen schwierig. Bisher ist nur die Verwendung der Thrombolyse Gewebe - Plasminogen - Aktivator wurde für die Behandlung des akuten ischämischen Schlaganfalls 4 zugelassen. Unter Modellen von fokaler zerebraler Ischämie in der Maus, sind cerebri posterior Zirkulation Hubmodell und Hirnvenenthrombose-Modell sehr invasiv, deren Anwendbarkeit verringern und die Bandbreite der Analysen zu beschränken, die durchgeführt werden können. Jedoch können auch andere Techniken, wie zum Beispiel die embolischen Modell, photothrombosis Modell, Endothelin-1-induzierten Schlaganfall-Modell und intraluminalen Naht Arteria cerebri media Okklusion (MCAO) Modell sind für den Einsatz ohne solche Einschränkungen zur Verfügung. Das MCAO-Modell ist eine Technik, die in diesem Protokoll beschrieben. Es bietet eine zuverlässige Methode der fokaler zerebraler Ischämie zu induzieren, die leicht Reperfusion und in einem Hochdurchsatz-Art und Weise durchgeführt werden kann. Es gibt zwei Ansätze für dieses Modell, nämlich die Zea-Longa und Koizumi Methoden. Sie unterscheiden sich etwas in der Art und Weise der Okklusion Naht in das Gefäßsystem eingeführt wird. In der Zea Longa-Technik wird der Faden über die Arteria carotis externa 5 eingesetzt. Die Technik , die hier präsentiert wird vom Koizumi Verfahren modifiziert , in der die okkludierende Naht über die Arteria carotis communis 6 eingesetzt ist. Das MCAO-Modell wurde erfolgreich verschiedene Ereignisse, die während ischämischen Schlaganfall zu bewerten angewendet. Nach Reperfusion kann Hirnödem mit dem Zusammenbruch der Blut-Hirn-Schranke beobachtet entlang werden. Peak-neuronalen Tod wird in der Regel bei 24 Stunden beobachtet; Es können jedoch wiederdreht sich auf das Ausgangsniveau nach 7 Tagen 7. Bei Menschen, Geschlecht und Alter sind wichtige Variablen bei Schlaganfall Ergebnis der Bestimmung, dies auch bei Mäusen und Ratten beobachtet 8, 9, 10. Mehrere Veröffentlichungen haben die MCAO - Modell zu zeigen , die Behandlungseffizienz 11, 12, 13, 14 verwendet.

<table><tbody><tr><td>MCAO-Nahtmaterial 0,23 mm</td><td>Doccol</td><td>702345PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>MCAO-Nahtmaterial 0,21 mm</td><td>Doccol</td><td>702145PK5Re Silberne</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Stiftklammern</td><td>503205</td><td></td></tr><tr><td>Anästhesiegerät</td><td>Vetequip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Schere</td><td>Fine-Science-Werkzeug</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Zange gerade Spitze</td><td>Fein Wissenschaftliches Werkzeug</td><td>00108-11</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Zange mit abgewinkelter Spitze</td><td>Fine Science Tool</td><td>00109-11</td><td></td></tr><tr><td>Federschere</td><td>Fine Science Tool</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Nylon-Naht</td><td>Braintree scintific</td><td>SUT-S 104</td><td></td></tr><tr><td>Verschlussnaht</td><td>VWR</td><td>95057-036</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5- Triphenyltetrazoliumchlorid</td><td>FisherSci</td><td>50-121-8005</td><td></td></tr><tr><td>Hirnblock</td><td>Braintree scintific</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Kryostat Klinge</td><td>VWR</td><td>89202-606</td><td></td></tr><tr><td>Optional:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Periflux Laserdopplersystem</td><td>Perimed Periflux</td><td>5000</td><td></td></tr><tr><td>Überwachungseinheit</td><td>Perimed</td><td>PF 5010 - LDPM</td><td></td></tr></tbody></table>

die induktion von ischämischem schlaganfall und ischämie-reperfusion bei mäusen die mittel artery occlusion technik und visualisierung von infarktbereich verwenden

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Zerebrovaskuläre Erkrankungen sind in der Weltbevölkerung weit verbreitet und umfassen verschiedene Arten von Erkrankungen, einschließlich Schlaganfall. Um den Einfluss eines Schlaganfalls auf Gewebeverletzungen zu untersuchen und die Wirksamkeit therapeutischer Interventionen zu bewerten, wurden mehrere experimentelle Modelle in einer Vielzahl von Spezies entwickelt. Dazu gehören die vollständige globale zerebrale Ischämie, die inkomplette globale Ischämie, die fokale zerebrale Ischämie und die multifokale zerebrale Ischämie. Das in diesem Protokoll beschriebene Modell basiert auf dem Verschluss der mittleren Hirnarterie (MCAO) und ist der Kategorie der fokalen Ischämie zugeordnet. Diese Technik führt zu einer konsistenten fokalen Ischämie in einem streng definierten Bereich der Hemisphäre und ist weniger invasiv als andere Methoden. Das beschriebene Verfahren wird an Mäusen durchgeführt, da mehrere genetische Varianten verfügbar sind und eine hohe Anzahl von Tests für Mäuse standardisiert ist, um die Bewertung des Verhaltens und des Neurodefizits zu unterstützen.

Die Einfügungs Route für die Okklusion Naht wird in Abbildung 1 gezeigt. Die MCAO Naht ist in die Okklusion Bereich geführt werden, in der ICA-gegabelt. Erfolgreiche Verschluss der MCA wird auf Gewebeverletzung, sichtbar durch TTC-Färbung führen. Abbildung 2 zeigt Bilder der Färbung von Schein - behandelten Tier (2A) und von einer 60 min MCAO Ischämie Reperfusion Tier (Färbung bei 90 min oder 24 Stunden nach der Okklusion, 2B).</...

Wir beschreiben ein Mausmodell für einen Schlaganfall, der durch den Verschluss der mittleren Hirnarterie mit einer silikonbeschichteten Naht induziert wird. Das Protokoll kann angewendet werden, um einen dauerhaften Verschluss oder eine vorübergehende Ischämie mit anschließender Reperfusion zu induzieren.

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

Das übergeordnete Ziel dieses chirurgischen Eingriffs ist es, offiziell und zuverlässig einen ischämischen Schlaganfall zu induzieren, während die äußere Hirnarterie intakt bleibt. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Schlaganfallforschung zu beantworten, wie z.B. den Einfluss der Behandlung auf die Schwere des Schlaganfalls. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass nach der Schlaganfallinduktion die äußere Hirnarterie zur Verfügung steht, um die Behandlung direkt in die betroffene Hemisphäre zu infundieren.Legen Sie eine mit Isofluran betäubte Maus auf die vorbereitete Operationsoberfläche und setzen Sie einen Nasenkonus ein, um Isofluran gemischt mit Sauerstoff zu verabreichen. Stellen Sie sicher, dass die Atemfrequenz etwa ein bis zwei Atemzüge pro Sekunde beträgt, ohne nach Luft zu schnappen. Stellen Sie außerdem sicher, dass das Tier keine Reaktion auf die Stimulation der Schnurrhaare oder den Pedalreflex zeigt.Geben Sie einen Tropfen Gleitmittel auf jedes Auge und verwenden Sie einen sterilen Tupfer, um zu verhindern, dass es während des Eingriffs austrocknet. Desinfizieren Sie den Operationsbereich nach der Rasur gründlich mit 70%igem Ethanol und einer Lösung auf Chlorhexidinbasis. Halten Sie das Tier auf einer warmen Operationsfläche unter einem Stereomikroskop.Führen Sie anschließend mit einer chirurgischen Schere und Pinzette einen flachen Mittellinienschnitt im Hals von oberhalb des Brustbeins bis unter den Kiefer durch. Trennen Sie mit einer Pinzette vorsichtig Fett- und Bindegewebe, um die Luftröhre freizulegen. Das Gewebe sollte sich leicht und natürlich zu beiden Seiten trennen.Legen Sie dann ein Kissen oder einen anderen runden Gegenstand mit einem Durchmesser von etwa 0,5 Zentimetern unter den Nacken, um den Nacken zu verlängern und den Bereich für die Operation weiter freizulegen. Öffnen Sie den Schnitt entweder mit einem Geweberetraktor oder mit Haken. Zupfen Sie dann auf der linken Seite der Luftröhre das Bindegewebe vorsichtig auseinander, um die linke Halsschlagader freizulegen, ohne die benachbarten Nerven und großen Venen zu beschädigen.Führen Sie dann die gebogene Pinzette unter die CCA ein, um das Bindegewebe zu durchstechen, und lassen Sie sie dann langsam öffnen, um die CCA freizugeben. Löse das CCA vom darunter liegenden Gewebe und lege die obere Verzweigung der Arteria cerebrale interna und der Arteria cerebral externa frei. Sobald das CCA freigelegt ist, führen Sie drei Segmente der Nylonnaht unter das CCA ein.Achten Sie darauf, dass der CCA nicht verdreht ist, da dies das Einsetzen der Naht drastisch erschweren würde. Schließen Sie dann an der tiefstmöglichen Stelle die untere Naht mit einem dauerhaften Knoten. Binden Sie die obere Naht mit einem abnehmbaren Schlupfknoten direkt unter der Verzweigung des ICA und ECA.Binden Sie als Nächstes die mittlere Naht mit einem abnehmbaren Schlupfknoten zusammen, aber halten Sie ihn weit offen. Erzeugen Sie dann mit einer Mikrodissektionsfederschere einen Abstand von 0,2 Millimetern in der CCA zwischen der unteren und mittleren Naht, die näher an der unteren Naht liegt. Führen Sie das MCAO-Nahtmaterial mit einer Pinzette in den CCA-Schnitt ein und führen Sie es zur oberen Naht.Ziehen Sie dann den Schlupfknoten der mittleren Naht vorsichtig auf dem CCA fest, so dass er den Blutfluss um die MCAO-Naht einschränkt, aber locker genug ist, damit sich die MCAO-Naht frei bewegen kann. Löse nun vorsichtig die obere Naht und achte darauf, dass die MCAO-Naht nicht herausrutscht. Führen Sie das MCAO-Nahtmaterial einige Millimeter in den ICA ein und verschließen Sie dann die obere Naht wie zuvor wieder mit einem Schlupfknoten.Führen Sie als Nächstes die MCAO-Naht in den Okklusionsbereich, indem Sie sie zuerst an der ECA vorbei in die ICA führen und dann sicherstellen, dass die Naht in der ICA verbleibt und die Arteria pterygopalatina umgeht. Die Insertion ist erfolgreich, wenn es zu einem geringen Blutrückfluss aus dem CCA-Schnitt kommt und wenn sich die silberne Neun-Millimeter-Markierung zwischen dem CCA-Schnitt und der Bifurkation von ICA und ECA befindet. Nach erfolgreicher Okklusion binden Sie die mittlere und obere Naht fest zusammen und stecken Sie die Nähte in den Schnittbereich.Nachdem Sie den Retraktor oder die Gewebehaken und das Kissen entfernt haben, reinigen Sie den Nahtbereich mit steriler Kochsalzlösung auf einem Wattestäbchen. Dann verschließen Sie die Haut mit einer Nylonnaht. Platzieren Sie die Maus in einem sauberen Käfig auf einem beheizten Pad, um Unterkühlung zu verhindern und ad libitum Zugang zu Wasser und weichem Futter zu ermöglichen.Überwachen Sie das Tier mindestens fünf bis 10 Minuten lang auf Anzeichen eines Schlaganfalls. Lassen Sie die MCAO-Naht je nach Ischämie-Reperfusionsprotokoll zwischen 30 Minuten und 120 Minuten oder länger an Ort und Stelle. Nachdem Sie das Tier wie zuvor betäubt und die wundenschließenden Nähte entfernt haben, verwenden Sie eine Pinzette und Gewebeseparatoren, um den Schnitt wieder zu öffnen und das CCA freizulegen.Entfernen Sie dann vorsichtig die obere Naht und ziehen Sie vorsichtig an der MCAO-Naht, bis sich der silikonbeschichtete Teil am Mittelknoten befindet. Wiederholen Sie die obere Knotennaht, um zu verhindern, dass Blut durch die MCAO-Naht fließt. Löse dann vorsichtig den mittleren Knoten und ziehe das MCAO-Naht am oberen Knoten vorbei, wobei du es im CCA behältst.Schließen Sie den oberen Knoten fest, um den Blutfluss der Arterien zu blockieren. Ziehen Sie als nächstes die MCAO-Naht vollständig heraus und schließen Sie den mittleren Knoten fest. Verschließen Sie die Wunde und führen Sie die postoperative Pflege wie bisher durch.Dieses Schema zeigt den Okklusionsbereich, der sich aus dem in diesem Video demonstrierten Eingriff ergibt, in blau. Der Operationsbereich befindet sich am unteren Rand der Abbildung, was durch die ovale Form gekennzeichnet ist, und die Nahtplatzierung ist durch schwarze Linien gekennzeichnet. Die folgenden Bilder zeigen den TTC-Stand von Hirnschnitten.Dieses Bild zeigt die typische Färbung nach einer Schein-Insertion. Das Bild ist repräsentativ für die Gewebeschädigung, die durch eine 60-minütige MCAO verursacht wird, gefolgt von einer 90-minütigen Reperfusion. Eine größere Gewebeschädigung wird nach 24-stündiger Reperfusion nach einer 60-minütigen MCAO beobachtet.Die Immunfluoreszenzfärbung für den neuronalen Marker MAP2 ermöglicht es, den neuronalen Verlust ab 60 Minuten Okklusion, gefolgt von 23 Stunden Reperfusion, im Bild rechts deutlich sichtbar zu machen. Die Astrogliose ist nach Immunfluoreszenzfärbung mit GFAP sichtbar. Im Bild rechts sind die Astroglia in dem Bereich konzentriert, der an die Gewebeschädigung im Ischämie-Reperfusionsgehirn angrenzt, während bei der schamoperierten Kontrolle ein diffuses Färbungsmuster zu sehen ist.Bei diesem Verfahren ist es wichtig, das Wohlbefinden der Tiere und die Okklusionszeit zu überwachen. Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Techniken wie die Analyse des seltsamen Verhaltens und die Immunfluoreszenz durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zur Gewebeverletzung und -genesung zu beantworten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

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Chirurgische Induktion der ischämischen Hirnschädigung in der Ratte ist ein weit verbreitetes Modell für Schlaganfall-Forschung. Hier zeigen wir die Induktion fokaler zerebraler Ischämie durch Verschluss der mittleren Hirnarterie. Visualisierung der resultierenden Infarkt durch histologischer Färbung und Magnetresonanz-Tomographie wird ebenfalls angezeigt.

Fokaler zerebraler Ischämie-Modell von Endovascular Suture Verschluss der mittleren Hirnarterie im Rat

Filamentous Verschluss der mittleren Hirnarterie ist ein gemeinsames Modell für die Untersuchung einen ischämischen Schlaganfall bei Mäusen.

Modeling Stroke in Mice - Middle Zerebralarterie mit dem Filament-Modell

Wir zeigen in dem Video ein Verfahren zur Herstellung einer mittleren Zerebralarterie in erwachsenen Mäusen mit einem intraluminalen Monofilament. Wir zeigen auch, wie man das Ausmaß der Hirninfarkt von 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) Färbung zu bewerten.

Mouse Model of Middle Zerebralarterie

Die intraluminale Mitte Zerebralarterie (MCAO) Modell ist die häufigste verwendete Modell unter experimentellen Schlaganfall-Modellen. Hier zeigen wir Ihnen das gesamte Modell im Detail mit der Führung des Laser-Doppler-Flussmessung und seine repräsentative Ergebnisse.

Intraluminale Nahen Zerebralarterie (MCAO) Modell des ischämischen Schlaganfalls mit Laser-Doppler-Flussmessung Guidance in Mäuse

Der intraluminale cerebri Okklusion in Mäusen wird hier vorgestellt. Das Ausmaß der Hirninfarkt wird durch eine neurologische Partitur und Cresylviolett Färbung, eine alternative Färbung zur TTC bietet den großen Vorteil, dass sie parallel viele interessante Marker testen ausgewertet.

Maus-Modell der Intraluminal MCAO: Hirninfarkt Evaluation durch Cresylviolett Staining

Um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu verstehen, ist es wichtig, zuverlässige Modelle zu verwenden. Dieses Papier wird eine der am häufigsten verwendeten Taktmodelle bei Mäusen beschreiben, die Arteria cerebri media Okklusion (MCAo) Modell genannt (auch bezeichnet als die intraluminale Faden oder Naht Modell) mit Reperfusion.

Chirurgische Ansatz für Arteria cerebri media Occlusion und Reperfusion fokaler zerebraler Ischämie bei Mäusen

Intraluminal Filament Okklusion der mittleren zerebralen Arterie ist das am häufigsten verwendete in Vivo Modell der experimentellen Schlaganfall bei Nagetieren. Ein alternativer chirurgischer Ansatz ermöglichen gemeinsame Halsschlagader Reparatur erfolgt hier, wodurch der Reperfusion der gemeinsame Halsschlagader und eine vollständige Reperfusion auf das mittlere zerebrale Arterie-Gebiet.

Mittlere zerebrale Arterie Okklusion so dass Reperfusion über gemeinsame Halsschlagader Reparatur bei Mäusen

Ein Maus-Modell der zerebralen Ischämie-Reperfusion wird gegründet, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu untersuchen. Wir nach distal verbinden rechts mittlere zerebrale Arterie und rechts gemeinsame Halsschlagader und Blutfluss nach 10 oder 40 min der Ischämie wiederherstellen.

Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion

Hier beschreiben wir eine einfache und reproduzierbare Methode, die bei Mäusen durch Präzisionsligation der linken vorderen absteigenden Koronararterie durch Mikromanipulation einen Myokardinfarkt oder eine myokardiale Ischämie-Reperfusionsverletzung induzieren kann.

Induktion von Myokardinfarkt und myokardialer Ischämie-Reperfusionsschädigung bei Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt das Modell der transienten fokalen zerebralen Ischämie bei Mäusen durch intraluminalen Verschluss der mittleren Hirnarterie. Darüber hinaus werden Beispiele für die Ergebnisbewertung mit Hilfe von Magnetresonanztomographie und Verhaltenstests gezeigt.

Transienter mittlerer Hirnarterienverschluss Modell des Schlaganfalls

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Etablierung eines distalen Modells für einen Verschluss der mittleren Hirnarterie (dMCAO) durch transkranielle Elektrokoagulation bei C57BL/6J-Mäusen vor und bewerten das anschließende neurologische Verhalten und die histopathologischen Merkmale.

Induktion eines akuten ischämischen Schlaganfalls bei Mäusen mit der Technik des distalen Mittelarterienverschlusses

Lernen Sie die Induktion von ischämischem Schlaganfall bei Mäusen mittels Mittelhirnarterienokklusion. Diese Methode ermöglicht die direkte Behandlungsinfusion in die betroffene Hemisphäre für Schlaganfallforschung.

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden (Video) | JoVE Journal

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden

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