Definierte und Scalable Generierung von Leber-ähnlichen Zellen aus humanen pluripotenten Stammzellen

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, humane hepatozytenähnliche Zellen aus pluripotenten Stammzellen unter Verwendung rekombinanter Lamininmatrizen unter definierten Bedingungen herzustellen. Diese Methode ermöglicht es dem Benutzer, funktionsfähige menschliche Hepatozyten individuell herzustellen, um die Leberbiologie in der Schale zu untersuchen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass ihre definierte Natur die Massenproduktion von Hepatozyten mit einem hohen Grad an experimenteller Reproduzierbarkeit ermöglicht. Um das Experiment zu beginnen, tauen Sie 100 Mikrogramm pro Milliliter rekombinantes Laminin-521 oder LN-521 bei vier Grad Celsius auf. Verdünnen Sie das aufgetaute LN-521 in eiskaltem 1xDBPS mit Calcium-Magnesium, um eine Lösung von fünf Mikrogramm pro Milliliter herzustellen. Fügen Sie einen Milliliter der LN-521-Lösung von fünf Mikrogramm pro Milliliter hinzu, um eine Vertiefung einer Platte mit sechs Vertiefungen zu beschichten, und schütteln Sie die Platte, um sie gleichmäßig in der Vertiefung zu verteilen. Inkubieren Sie die Platten anschließend mindestens zwei Stunden lang in einem 37 Grad Celsius heißen 5%CO2-Zellkultur-Inkubator für den dringenden Gebrauch. Bringen Sie die beschichtete Platte aus dem Inkubator in die Gewebekulturhaube. Die Beschichtungslösung LN-521 vorsichtig ansaugen, ohne die beschichtete Oberfläche zu beschädigen. Dann sofort einen Milliliter vorgewärmtes mTeSR hinzufügen