Name: Eine Vorrichtung zur Durchführung Zellmigration / Wundheilung in einer 96-Well-Platte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: Lernen Sie eine kostengünstige Methode zur Untersuchung der Zellmigration mit einem mechanischen Acht-Kanal-Wundheilungsassay in einer 96-Well-Platte. Dieses Protokoll ermöglicht die schnelle Quantifizierung von Behandlungseffekten.

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Die Autoren möchten sich Herr Tam Po Leung, Mr. Wong Chi Kin und das technische Personal der Fakultät Werkstatt, Hong Kong Baptist University, für ihre technischen Fähigkeiten und Beratung bei der Herstellung der Prototyp dieser wounder danken.

1. Einführung in die Teile des wounder (Abbildung 1) <ol><li> Bereiten Sie den Stifthalter durch die Verwundung Stifte in gleichen Abständen zu fixieren. Halten Sie die Pipettenspitzen und stellen Sie die Spitzenhöhe und die einstellbaren Verwundung Stifte nach oben und unten durch Bewegung. </li><li> Den verstellbaren Führungsschiene auf verschiedene Marken von 96-Well-Kulturplatten und stellen Sie sicher, dass die Verwundung Bereich in einer festen Position ist. </li><li> Befestigen Sie den verstellbaren Verwundung Stift durch die Sechskantschraube anziehen. Befestigen Sie den Führungsgriff in der Position, die durch die Kopfkappen Sechskant Anzugs an beiden Enden. </li></ol> 2. Einstellen der Breite des Stifthalters (Abbildung 2) <ol><li> Lösen Sie die Sechskantkappen mit dem M5 Inbusschlüssel. </li><li> Legen Sie eine geeignete Anzahl von Ringen auf beiden Seiten des Stifthalters so eingestellt wird, dass die Führungsstangen passen perfekt mit der Breite der 96-Well-Kulturplatte. HINWEIS: Corning und Iwaki Platten erfordert ein Paar von großen Ringen und 1 Paar kleine Ringe. Falcon und Nunc plAtes benötigen ein Paar große Ringe. </li><li> Ziehen Sie die Sechskantkappen der Führungsstange zu befestigen. </li></ol> 3. Einstellen der Führungsstangen (Abbildung 3) <ol><li> Montieren Sie die Verwundung Stifte mit sterilen 10-ul Kunststoff Pipettenspitzen. </li><li> Lösen Sie die Sechskantkappen mit dem M5 Inbusschlüssel. </li><li> Halten Sie die wounder und tauchen Sie die Verwundung Stifte in eine Spalte einer 96-Well-Kulturplatte. </li><li> Stellen Sie die Höhe der Führungsstangen, bis alle Spitzen kaum den Boden der Vertiefungen berührt. </li><li> Ziehen Sie die Sechskantkappen. Stellen Sie sicher, dass die wounder jetzt perfekt auf der Kulturplatte passt und dass die Stifte sind gut positioniert in der Mitte der Brunnen. </li></ol> 4. Kalibrierung der Pins <ol><li> Halten Sie die wounder senkrecht zu einer flachen sterilen Oberfläche (dh Petrischale) und lösen Sie alle Sechskantschrauben mit dem M3 - Inbusschlüssel. </li><li> Tippen Sie auf die wounder bis alle Spitzen gleichmäßig flach sterile Oberfläche berühren. &lt;/ Li&gt; <li> Ziehen Sie die Sechskantschrauben wieder die Stifte in Position zu verriegeln. </li><li> Schauen Sie sich die Gleichmäßigkeit jeder Spitze durch die wounder sanft auf der flachen sterilen Oberfläche aus. </li></ol> 5. Verkratzen Zellmonolayer (Figur 4) <ol><li> Seed humane Nabelschnur vaskuläre Endothelzellen auf einer 0,1% Gelatine beschichtete 96-Well-Zellkulturplatte. Kulturzellen in Medium 199 mit 20% hitzeinaktiviertem fötalem Rinderserum, 1% Penicillin / Streptomycin und 0,09 g / L Heparin. Pflegen Zellen in einem befeuchteten Inkubator mit 5% Kohlendioxid bei 37 ºC über Nacht vor der Verwendung. Die Zellen sollten 100% Konfluenz erreichen, bevor der Verwundung. </li><li> Legen Sie die Verwundung Spitzen an der linken (oder der ganz rechten) Seite jeder Vertiefung innerhalb der gleichen Spalte der Kulturplatte. Schieben Sie die wounder auf die andere Seite des Bohrlochs; sicherstellen, dass die Verwundung Tipps, um den Boden des Bohrlochs berühren. </li><li> Wiederholen Sie das Kratzen (Schritt 5.2) für alle Spalten. </li><li> Nach Verwundung Verwerfungs ter Medium in jeder Vertiefung und ersetzen Sie sie durch frisches Medium, das Testen von Verbindungen. </li></ol> 6. Datenerfassung und Bildanalyse <ol><li> Bild das ganze auch mit der mechanischen Wunde auf der Zellschicht ein Low-Power - Mikroskop mit Digitalkamera (zB 10X - Objektiv) unmittelbar nach der Verwundung (t = 0 h) verwendet wird . </li><li> In Testverbindungen, wenn für die gewünschte Länge der Zeit gewünscht und brüten. Bild das ganze gut mit dem Wundbereich nach der gewünschten Inkubationszeit (t = &amp; Delta; h). </li><li> Mit Hilfe der Bildanalyse - Software wie ImageJ ( <a href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> ), messen Sie den verwundeten Bereich auf dem Bild mit dem Freihand - Werkzeug. </li><li> Berechnen Sie den Prozentsatz des Wundverschlusses: <img alt="Gleichung" src="/files/ftp_upload/55411/55411eq1.jpg" /></li></ol>

<ol><li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-cell+invasion+and+migration%3A+diversity+and+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li>
<li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prespecification+and+plasticity%3A+shifting+mechanisms+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li>
<li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li>
<li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A. Jr, Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration%3A+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li>
<li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound%3A+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980(2015).</li>
<li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing%2C+a+comparsion+of+image-based+readout+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21(2004).</li>
<li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li>
<li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration%2F+wound+healing+in+96-well+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li>
<li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg%281%29+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li>
<li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Unsere Zelle wounder hat einige einzigartige Eigenschaften in die Probleme der traditionellen Zellmigration Assays zu lösen. Der 8-Kanal-mechanischen Zell wounder ist aus hochwertigem Edelstahl (Stahl 304) mit einer langen Lebensdauer hergestellt, die im Autoklaven sterilisiert werden kann. Fast alle Handelsmarken von 96-Well-Kulturplatten auf dem Markt mit dieser mechanischen Zell wounder verwendet werden, da der verstellbaren Führungsstange. Die Konstruktion der verstellbaren Führungsleiste gewährleistet auch, dass da...

Zellmigration spielt eine wichtige Rolle bei der zellulären Prozessen, wie der Embryonalentwicklung, der Neurogenese, Angiogenese, Wundheilung, Schleimhautreparatur, epithelial-mesenchymalen-Übergänge unter normalen Entwicklung und Krankheitslage 1. Es ist ein komplizierter Prozess, der die Koordination zahlreicher inter- und intrazelluläre Ereignisse , einschließlich Signalmolekül - Wechselwirkungen, Zellpolarisation, Zytoskelett - Reorganisation, Matrixumbau, Membran Vorsprung und dynamische Zell-Zell - Adhäsion Modulation 2 beinhaltet. Durch das Studium der Zellmigration, die Entdeckung und Validierung von Chemikalien oder Biomoleküle, die zu Zellbewegung und seine verwandten biochemischen Wege bestimmt werden. Dieser grundlegende Prozess kann für verschiedene Anwendungen, wie zum Beispiel der Behandlung von Krankheiten und Drug-Targeting-nutzbringend als Proxy verwendet werden. Die Verwundung Assay ist einer der Zellmigrationsassays 3. Hier wird eineinzelne Probe von Zellen teilweise durch mechanische Mittel entfernt werden, um ein entblößten Bereich zu produzieren, wo Zellen, die den Bereich abdecken wird migrieren. Der Prozentsatz der Rückgewinnung zu einem bestimmten Zeitpunkt wird überwacht werden. Wenn eine große Anzahl von Proben Umgang mit Themen wie der experimentellen Kosten und Kreuzkontamination innerhalb Proben kann problematisch sein. Obwohl viele kommerzielle Tools und Tests für 4 Migration Studium Zelle vorhanden sind, 5, 6, benötigt viele von ihnen teure und komplizierte Ausrüstung und Verbesserungen werden noch benötigt. Aus diesen Gründen ist ein 8-Kanal mechanischen Zell wounder (Abbildung 1) entwickelt. Unsere 8-Kanal-mechanischen Zell wounder hat bei der Lösung der oben genannten Probleme einige einzigartige Eigenschaften eingearbeitet. Es bietet die Flexibilität, die Zellmigration / Verwundung Assays in 96-Well-Kulturplattenformat durchzuführen. Der einstellbare guIding Bar-Design sorgt dafür, dass die Kratzfläche in der zentralen Position jedes gut ist. Auch kann die Höhe der Führungsstangen verstellt werden, so dass die wounder für verschiedene Marken von Kulturplatten anwendbar ist. Schließlich ermöglicht die einstellbare Verwundung Pin - Design einen noch Kontakt der Pipettenspitzen mit der Kulturplatte Oberfläche zu erreichen gleichzeitige und reproduzierbare Verwundung 7, 8.

<table><tbody><tr><td>96-Well-Zellkulturplatte</td><td>Nunc</td><td>167008</td><td>Andere Marken von 96-Well-Zellkulturplatten können ebenfalls verwendet werden</td></tr><tr><td>P10-Pipettenspitzen</td><td>Axygen</td><td>301-03-051</td><td>Kurze P10-Pipettenspitze ist einfacher, um eine klare Wunde zu erzeugen</td></tr><tr><td>Wounder</td><td>R& P Technology Limited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>Sigma</td><td>M2520-1L</td><td>Für die Zellkultur von menschlichen Endothelzellen der Nabelschnurvene. Verwenden Sie das geeignete Kulturmedium und die geeignete Bedingung für andere Zelltypen.</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td>Für die Zellkultur von menschlichen Nabelvenen-Endothelzellen. Verwenden Sie das geeignete Kulturmedium und die Bedingung für andere Zelltypen.</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Für die Zellkultur von menschlichen Endothelzellen der Nabelvene. Verwenden Sie das geeignete Kulturmedium und die Bedingung für andere Zelltypen.</td></tr><tr><td>Heparin-Natriumsalz aus der Darmschleimhaut des Schweins</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td>Für die Zellkultur von menschlichen Endothelzellen der Nabelvene. Verwenden Sie ein geeignetes Kulturmedium und eine geeignete Bedingung für andere Zelltypen.</td></tr><tr><td>Gelatine aus Rinderhaut</td><td>Sigma</td><td>G9391</td><td>Für die Zellkultur von menschlichen Endothelzellen der Nabelvene. Verwenden Sie ein geeignetes Kulturmedium und eine geeignete Bedingung für andere Zelltypen.</td></tr></tbody></table>

eine vorrichtung zur durchführung zellmigration / wundheilung in einer 96-well-platte

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Die Zellmigration / Test verwunden ist eine häufig verwendete Methode der Zellmigration und andere biologische Prozesse, wie Angiogenese und Tumormetastasierung zu studieren. In diesem Assay werden die Zellen gezüchtet eine konfluente Monoschicht und eine mechanische Verwundung durch Kratzen mit einem Gerät erzeugt wird, zu bilden. Dann wird die Migrationsrate der Zellen gegenüber dem entblößten Bereich kann durch Bildgebung überwacht werden. Unsere 8-Kanal-mechanischen wounder soll die meisten Probleme mit der Zellmigrationsassay zugeordnet zu bewältigen. Zum einen können unsere wounder leicht durch Autoklavieren oder mit üblichen Desinfektionsmittel sterilisiert werden. Zweitens erlauben die individuell einstellbare Stifte auch mit der Zellkulturplatte in Verbindung, damit scharf und reproduzierbar Wunden geschaffen werden kann. Drittens sorgen die Führungsstäbe auf beiden Seiten der wounder konsistente Verwundung Position in jeder Vertiefung. Die Verwendung von Einweg-Kunststoff-Pipettenspitzen für Verwundung weiter eine bessere Handhabung des wounder bieten kann sowie Quer VERSCHMUTZ zu minimierenIon. Abschließend kann unsere Zelle wounder Forscher bieten mit einer benutzerfreundlichen und reproduzierbare Vorrichtung zur Durchführung des Zellmigration Test, um die Standard-96-Well-Kulturplatte verwendet.

Dieser 8-Kanal-mechanische wounder ist so konstruiert, eine Zellschicht, um Kratzer auf der Zellmigration Test durchzuführen. Es ist ein benutzerfreundliches Gerät, das Zell Kratzen Assays in 96-Well-Platten in weniger als einer Minute ohne spezielles Training durchführen können. Diese wounder können Wundflächen auf Zellmonoschichten mit einer gleichmßigen Breite von etwa 600 um und mit scharfen Kanten (5 und 6) einzuführen. Die Breite der Wunden hängt v...

Hier stellen wir ein Protokoll eine halb hohem Durchsatz Zellmigrationsassay auf einer 96-well Zellkulturplatte durchzuführen. Dieses Protokoll ist eine schnelle, einfache und wirtschaftliche Verfahren in Übereinstimmung Kratzwunden auf einer Zell-Monoschicht zu erzeugen.

Eine Vorrichtung zur Durchführung Zellmigration / Wundheilung in einer 96-Well-Platte

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Das allgemeine Ziel dieses achtkanaligen mechanischen Zellwundmodulators besteht darin, den Einfluss einer Behandlung auf die Zellmigration mithilfe des Wundheilungsassays schnell und halb-hochdurchsatzfähig zu quantifizieren, ohne teure und komplizierte Geräte verwenden zu müssen. Die Zellmigration ist ein wichtiger zellulärer Prozess unter verschiedenen physiologischen und pathophysiologischen Bedingungen. In-vitro-Wundheilungsassays werden in verschiedenen Studien eingesetzt, darunter Krebs-, kardiovaskuläre und dermatologische Untersuchungen.Der Hauptvorteil dieser Methode liegt darin, dass der Einfluss auf die Zellmigration auf einer 96-Rillen-Platte überwacht werden kann, wodurch verschiedene Behandlungsbedingungen gleichzeitig beobachtet werden können. Die Durchführung der Prozedur wird Ka Chun Ng, ein Doktorand aus unserem Labor, demonstrieren. Beginnen Sie das Experiment, indem Sie den Pinhalter vorbereiten, indem Sie die Wundpins in gleichen Abständen befestigen.Halten Sie die Pipettenspitzen fest und bewegen Sie die verstellbaren Wundnadeln auf und ab, um die Höhe der Spitzen anzupassen. Bringen Sie danach die verstellbare Führungsleiste an verschiedenen Marken von 96-Well-Kulturplatten an und stellen Sie sicher, dass der Verletzungsbereich in einer festen Position liegt. Fixieren Sie die verstellbare Wundnadel, indem Sie die Innensechsschraube festziehen.Befestigen Sie die Führungsstange, indem Sie die Sechskantschrauben an beiden Enden festziehen. Lösen Sie die Sechskantschrauben mit einem Inbusschlüssel M5. Setzen Sie auf beiden Seiten des Nadelaufs eine geeignete Anzahl von Justierhülsen ein, sodass die Führungsstangen exakt mit der Breite der 96-Loch-Kulturplatte übereinstimmen.Dann ziehen Sie die Innensechskantschrauben fest, um die Führungsstange zu befestigen. Beginnen Sie mit der Justierung der Führungsstangen, indem Sie die Wundnadeln mit sterilen 10-Mikroliter-Kunststoffpipettenspitzen bestücken. Danach lösen Sie die Innensechskantschrauben mit dem M5-Inbusschlüssel.Halten Sie den Wundapparat und tauchen Sie die Wundnadeln in eine Spalte einer 96-Well-Kulturplatte. Stellen Sie dann die Höhe der Führungsstangen so ein, dass alle Spitzen gerade eben den Boden der Vertiefungen berühren. Ziehen Sie die Innensechskantschrauben fest.Stellen Sie sicher, dass der Wounder nun perfekt auf die Kulturplatte passt und dass die Stifte genau in der Mitte der Vertiefungen positioniert sind. Halten Sie den Wounder senkrecht zu einer ebenen, sterilen Oberfläche, beispielsweise einer Petrischale, und lösen Sie alle Innensechskantschrauben mit dem M3-Inbusschlüssel. Klopfen Sie leicht auf den Wounder, bis alle Spitzen gleichmäßig die Oberfläche berühren.Nachdem die Spitzen gleichmäßig die Oberfläche berührt haben, die Sechskantschrauben erneut festziehen, um die Stifte in Position zu fixieren. Überprüfen Sie dann die Gleichmäßigkeit jeder Spitze, indem Sie den Winder vorsichtig auf die flache sterile Oberfläche klopfen. Säen Sie humane umbilikale vaskuläre Endothelzellen in eine mit 0,1 % Gelatine beschichtete 96-Well-Zellkulturplatte aus.Kultivieren Sie Zellen in Medium 199, ergänzt mit 20 % hitzeinaktiviertem fetalem Kälberserum, 1 % Penicillin-Streptomycin und 0,09 Gramm pro Liter Heparin. Pflegen Sie die Zellen über Nacht in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % Kohlendioxid bei 37 Grad Celsius, bevor sie verwendet werden. Sobald die Zellen eine Konfluenz von 100 % erreicht haben, platzieren Sie die Wundschöpfspitzen auf der am weitesten links liegenden Seite jedes Wells in derselben Spalte der Kulturplatte.Bewegen Sie den Wundapparat zur anderen Seite des Wells. Stellen Sie sicher, dass die Wundspitzen den Boden des Wells berühren. Um sicherzustellen, dass die Wunde in jedem Well der Zellkulturplatte zentriert und in derselben Wellenform verläuft, schwenken Sie den Wundapparat, der sich über das gesamte Well erstreckt, bis zum anderen Ende.Wiederholen Sie das Kratzen für alle Spalten. Nach der Verletzung verwerfen Sie das Medium in jedem Well und ersetzen es durch frisches Medium, das Testsubstanzen enthält. Fahren Sie anschließend mit der Datenerfassung und Bildanalyse fort.Repräsentative Bilder einer Reihe und einer Spalte von Vertiefungen unmittelbar nach dem Kratzen ermöglichen die quantitative Analyse der Breite jeder Wunde. Wundbilder wurden von humanen Nabelvenenendothelzellen und humanen dermalen Fibroblasten gewonnen. Die gestrichelte Linie markiert den Wundbereich und die durchgezogene Linie den Zellwanderungsbereich.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man dieses Gerät verwendet, um einen Wundheilungs-Assay in einer 96-Well-Platte auf semi-hochdurchsatzfähige Weise durchzuführen, und wie sichergestellt wird, dass jeder Well mit dem Wounder angekratzt wird.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Häufig verwendet werden, sind sehr zugänglich Methoden zur Untersuchung der Zellmigration und Invasion in vitro beschrieben. Das erste Verfahren ist die Zelle Wundverschluss Assay misst die Zellbeweglichkeit. Die zweite Methode ist die Transwell-Migration und Invasion Assay, der die chemotaktische und invasive Kapazität der Zellen beurteilt.

In-vitro-Zellmigration und Invasion Assays

MRP4- regelt verschiedene zyklische Nukleotid-abhängige Signalereignisse einschließlich einer kürzlich aufgeklärte Rolle bei der Zellmigration. Wir beschreiben eine direkte, aber vielschichtigen Ansatz, um die nachgelagerten molekularen Targets von MRP4- zu entwirren bei der Identifizierung eines einzigartigen MRP4- Interaktom führt, die Schlüsselrollen in der fein abgestimmten Regulierung der Fibroblasten-Migration spielt.

Methoden zur Untersuchung MRP4- haltigen Makromolekulare Komplexe in der Verordnung von Fibroblast Migration

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Wirkung der Pro und anti migratory Faktoren auf Zellwanderung innerhalb einer dreidimensionalen Fibrin-Matrix bewerten.

Zellwanderung in dreidimensionales In Vitro Charakterisierung Wunde Umgebungen

Diese Studie berichtet zwei verschiedene Methoden für die Analyse der Zelle Invasion und Migration: Boyden Kammer Assay und der in-vitro- video Mikroskop-basierte Wundheilung Assay. Die Protokolle für diese zwei Experimente werden beschrieben und ihre Vorteile und Nachteile gegenüber.

Bewertung der Zelle Invasion und Migration-Prozess: ein Vergleich des Video Mikroskop-basierte Kratzers Wunde Assay und der Boyden Kammer-Test

Dieses Manuskript wird beschrieben, wie Schnitt-ähnliche Läsionen am kultivierten Epithelzelle Monolagen günstig Modell Heilung in-vitro-, so dass für die Bildgebung durch konfokale gewickelt oder laser-scanning-Mikroskopie, und die bieten qualitativ hochwertige quantitative und qualitative Daten für das Studium Zelle Verhalten und die Mechanismen, die bei der Migration.

Mikroskopie-basierten Methoden für die Beurteilung der Epithelzelle Migration bei der In-vitro- Wundheilung

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Bewertung der Wirkung der Peptide auf die Migration von bronchialen Epithelzellen. Diese Methode ermöglicht die schnelle und hoch reproduzierbare Einholung der quantitativen Daten über die Geschwindigkeit der Zelle Migration und Wunde Schließung.

Eine neuartige In-vitro- Wunde heilende Assay Zellwanderung bewerten

Das aktuelle Protokoll beschreibt eine integrierte Methode untersucht Krebs Zelle Migration und Invasion auf einer einzigen Plattform in Echtzeit und bietet eine leicht reproduzierbare und zeitsparende Option Zelle Mobilität und Morphologie.

Eine einfache Migration/Invasion Workflow mit einer automatisierten Leben-Zelle-Imager

Hier stellen wir ein Protokoll für einen In-vitro-Scratch-Assay mit primären Fibroblasten und für einen in vivo Hautwundheilungstest bei Mäusen vor. Beide Assays sind einfache Methoden zur Beurteilung der In-vitro- und In-vivo-Wundheilung.

Scratch Migration Assay und Dorsal Skinfold Kammer für In Vitro und In Vivo Analyse der Wundheilung

In dieser Arbeit wird ein neu entworfener 3D-gedruckter Einsatz als Modell der Co-Kultur vorgestellt und durch die Untersuchung der parakrinen interzellulären Kommunikation zwischen Endothelzellen und Keratinozyten validiert.

Ein innovativer 3D-gedruckter Einsatz, der für einfache 2D- und 3D-Zellkulturen entwickelt wurde

Durch die Einbeziehung des Interaktionserlebnisdesigns und der Analyse der Benutzeranforderungen führen wir einen innovativen Zellschaber ein, der zelluläre Wundheilungsassays in Bezug auf Reproduzierbarkeit, Zuverlässigkeit, Praktikabilität, zelluläre Integrität und Benutzererfahrung verbessert.

Ein Tool zur automatischen Erstellung stabiler und reproduzierbarer zellfreier Lücken zur Verbesserung der Zuverlässigkeit von Zellwundheilungsassays

Ein Protokoll zur quantitativen Bewertung der 3D-Zellmigration innerhalb und in die Grenzfläche von granulären Hydrogelen wird hier vorgestellt.

Quantifizierung der dreidimensionalen Zellmigration innerhalb und in granuläre Hydrogel-Biomaterialien

Lernen Sie eine kostengünstige Methode zur Untersuchung der Zellmigration mit einem mechanischen Acht-Kanal-Wundheilungsassay in einer 96-Well-Platte. Dieses Protokoll ermöglicht die schnelle Quantifizierung von Behandlungseffekten.

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