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DOI: 10.3791/58134-v
Alexander Goedel*1,2, Dorota M. Zawada*1, Fangfang Zhang1, Zhifen Chen3, Alessandra Moretti1,2, Daniel Sinnecker1,2
1Medical Department I, University Hospital Klinikum rechts der Isar,Technical University of Munich, 2German Centre for Cardiovascular Research (DZHK), Munich Heart Alliance, 3Beth Israel Deaconess Medical Center,Harvard Medical School
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Hier präsentieren wir eine Methode, um optisch Bild Aktionspotentiale, insbesondere ventrikuläre erinnernden induzierten pluripotenten Stammzellen abgeleitet Kardiomyozyten. Die Methode basiert auf der Projektträger-gesteuerte Ausdruck eines Spannung-empfindlichen fluoreszierenden Proteins.
Kardiomyozyten, die aus induzierten Pluripotenten Stamm- oder IPS-Zellen erzeugt werden, werden zunehmend verwendet, um eine Vielzahl biologischer Fragen auf dem Gebiet der Herzelektrophysiologie zu beantworten. Die Hauptvorteile dieser Technologie sind, dass sie eine dramatische Erhöhung des Durchsatzes sowie subtypspezifische Wirkungspotentialaufnahmen in ventrikulären wie Myozyten ermöglicht, mit einem ventrikulären spezifischen Promotorelement. Die Einführung genetisch kodierter Spannungssensoren durch lentivirale Transduktion ermöglicht die optische Bildgebung von vom Menschen induzierten pluripotenten Stammzellen abgeleiteten Kardiomyozyten Wirkungspotentiale.
Beginnen Sie mit dem Mischen von Lentivirus-haltigen Zellkultur-Überstand mit Kardiomyozyten-Erhaltungsmedium, in einem Verhältnis von eins zu eins. Fügen Sie Hexadimetherinbromid in einer Endkonzentration von 8 Mikrogramm pro Milliliter hinzu, um die Infektionseffizienz zu verbessern. Und ersetzen Sie das Kardiomyozyten-Pflegemedium in der IPS-Zell-abgeleiteten Kulturschale von Cardiomyozyten durch das Infektionsmedium.
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