Vorhersage der Amputation mit lokal zirkulierenden mononukleären Progenitorzellen bei angioplasty-behandelten Patienten mit kritischer LimbIschemia

Obwohl die Angioplastie die Durchblutung bei kritischer Ischämie der Gliedmaßen verbessert, kommt es bei einigen Patienten immer noch zu einer Amputation der Gliedmaßen. Im Vergleich zu Prognosen, die auf traditionellen Risikofaktoren und intrinsischen vaskulären Merkmalen basieren, kann die Anzahl der lokalen MPCs das klinische Ergebnis in Bezug auf endotheliale Dysfunktion und Amputation von Gliedmaßen besser vorhersagen. Die Anzahl der lokalen MPCs stellt einen vielversprechenden Indikator für die Prognose vaskulärer Ereignisse wie Ischämie, Herzkrankheit und Ischämie der unteren Extremitäten dar, mit potenzieller Anwendung bei der Risikostratifizierung und der Durchsetzung der Prävention.

Eduardo Vera-Gomez, Alejandro Hernandez-Patricio, Carolina Aranda-Rodriguez, Juan Ariel Gutierrez-Buendia, Atzin Sua Ruiz-Hernandez, Mario Antonio Tellez-Gonzalez und Gabrielle Alexandra Dominguez-Perez werden die Verfahren vorführen. Doktoranden aus den Laboratorien für experimentellen Stoffwechsel und Geweberegeneration werden auch Gabrielle Hernandez-De Rubin und Oscar Antonio Loman-Zuniga sein. Und diese aus der Abteilung für Gefäßchirurgie.

Um die FMD vor und nach der Angioplastie zu bestimmen, verwenden Sie einen vaskulären linearen Schallkopf, um den Durchmesser der Arteria brachialis des Patienten zu messen. Als nächstes platzieren Sie die Manschette eines Blutdruckmessgeräts über der Messstelle im Unterarm und insufflieren Sie die Manschette fünf Minuten lang 50 Millimeter Quecksilbersäule über dem systolischen Blutdruck, bevor Sie sich entleeren. Messen Sie innerhalb von 60 Sekunden nach der Entleerung erneut den Durchmesser der Arteria brachialis und verwenden Sie die Gleichung, um die FMD zu schätzen.

Um den klinischen Schweregrad der Ischämie der Extremitäten gemäß der Rutherford-Klassifikation zu beurteilen, platzieren Sie eine 18-Gauge-Nadel in das Blutgefäß an der ausgewählten Leistenstelle und platzieren Sie einen Einführapparat über der Nadel. Schieben Sie einen flexiblen Führungsdraht in den Einführhebel ein und ersetzen Sie den Leitfaden durch einen sechs französischen Einführdraht. Injizieren Sie unter Verwendung einer fluoroskopischen Führung Kontrastmittel, um die Arterienbahn und die blockierten Gefäßstellen zu identifizieren.

Führen Sie zwei französische Führungsdrähte 0,014 und zwei französische Führungsdrähte 0,014 in das Schiff ein und schieben Sie die Führungsdrähte zur blockierten Stelle vor. Führen Sie als Nächstes einen Katheter mit fünf französischen Kathetern und dann einen Katheter mit drei französischen Kathetern ein und entnehmen Sie 10 Milliliter Blut von der Stelle, die dem Gefäßverschluss am nächsten liegt. Legen Sie die Probe auf Eis und schieben Sie erneut einen Führungsdraht vor.

Wenn der Führungsdraht an Ort und Stelle ist, führen Sie einen Angioplastie-Ballonkatheter ein, der einen aufblasbaren Ballon am Ende des Katheters enthält, und schieben Sie den Angioplastie-Ballonkatheter an die Stelle der Läsion. Blasen Sie den Ballon gegen die blockierende Plaque auf, die sich an der Gefäßwand befindet, und überprüfen Sie die Wiederherstellung des Blutflusses. 30 Minuten nach der Durchführung der Angioplastie schieben Sie einen Katheter an die Stelle vor, die dem Gefäßblock am nächsten liegt, und entnehmen Sie 10 Milliliter Blut.

Entfernen Sie dann alle Führungsdrähte und sorgen Sie für die entsprechende postoperative Versorgung. Beurteilen Sie zwei Wochen nach der Angioplastie den klinischen Schweregrad der Ischämie der Gliedmaßen, die Linderung der Ruheschmerzen, die untere Ischämie und den funktionellen Fußerhalt gemäß der Rutherford-Klassifikation und identifizieren Sie die Fälle, die aufgrund eines ungünstigen Ergebnisses eine größere Amputation erforderlich machen. Übertragen Sie innerhalb einer Stunde nach der Entnahme sechs Milliliter jeder entnommenen Blutprobe in neue 15-Milliliter-Röhrchen und verdünnen Sie die Proben im Verhältnis eins zu eins in PBS.

Geben Sie zwei Milliliter Dichtegradientenmedium in jedes der drei Reagenzgläser und fügen Sie jedem Röhrchen drei gleich große Aliquots des verdünnten Blutes hinzu, die nicht mehr als drei Viertel gefüllt sind. Trennen Sie die Blutzellen durch Dichtegradientenzentrifugation und verwenden Sie eine Pipette, um die Zellen der Grenzfläche der resultierenden Schichten zu sammeln. Ziehen Sie die Zellen aus jeder Probe in ein einzelnes 15-Milliliter-Röhrchen und waschen Sie jede Probe sechsmal mit zwei Millilitern PBS pro Waschgang.

Nach dem letzten Waschen wird das MPC, das die Pellets enthält, in einem Milliliter PBS pro Probe zur Zählung erneut suspendiert und eins mal 10 zu den sechs Zellen pro Röhrchen in die entsprechende Anzahl von fünf Milliliter Durchflusszytometrieröhrchen pro Probe gegeben. Pelletieren Sie die Zellen durch Zentrifugation und suspendieren Sie jede Zellprobe 10 Sekunden lang in 100 Mikrolitern des Antikörpercocktails von Interesse, bevor Sie die Zellen 20 Minuten lang bei vier Grad Celsius lichtgeschützt inkubieren. Am Ende der Inkubation verwenden Sie isotypangepasste Kontrollantikörper, um die entsprechenden Vorwärts- und Seitenstreu-Gates für die Analyse einzurichten, und verwenden Sie ein Röhrchen mit einer hohen Anzahl von CD45- und CD34-positiven Zellen, um die NPCs zu gaten.

Um nach doppelt positiven Immunphänotypen zu selektieren, erstellen Sie neue Diagramme und identifizieren Sie die KDR-, CD133- und CD184-positiven, CD34-positiven und CD45-positiven Zellen mit dem Gate, dann das Gate, um die wichtigsten MPC-Subpopulationen zu identifizieren. Die Anzahl der MPCs kann dann mit dem Ausgangswert der FMD und dem Delta der FMD nach Angioplastie sowie dem Anteil der Patienten korreliert werden, die eine größere Amputation der unteren Extremität benötigen. In dieser repräsentativen Analyse korrelierte 30 Tage nach der Angioplastie der unteren Extremitäten die Ausgangszahl von CD45-positiven, CD34-positiven und KDR-positiven MPCs negativ mit der MKS.

Während die Veränderung der CD45-positiven, CD34-positiven, CD133-positiven und CD184-positiven MPCs nach der Angioplastie signifikant mit einer Verbesserung der MKS korrelierte. Eine erhöhte Ausgangszahl von MPCs CD45-positiven, CD34-positiven, KDR-positiven Subpopulationen sowie eine Verringerung der MPC CD45-positiven, CD34-positiven, CD133-positiven und CD184-positiven Zellen nach der Angioplastie wurden auch bei Patienten beobachtet, die sich zu einer Amputation von Gliedmaßen entwickelten. Während des vaskulären Zugangs achten Sie darauf, das Blut von der Stelle zu entnehmen, die der Gefäßobstruktion am nächsten liegt.