Echtzeitüberwachung der mitochondrialen Atmung in zytokindifferenzierten humanen primären T-Zellen

Der mitochondriale Stoffwechsel ist ein wesentlicher Regulator der Haltbarkeit und des Gedächtnisses von T-Zellen. Die Messung der mitochondrialen Atmung liefert daher wichtige Einblicke in die Eigenschaften von T-Zellen. Die Seahorse-Maschine kann verschiedene Elemente der mitochondrialen Atmung in Echtzeit in lebenden menschlichen primären T-Lymphozyten messen, ohne dass eine Markierung erforderlich ist.

Diese Methode eignet sich sehr gut zur Überwachung der T-Zell-Fitness und des Gedächtnispotenzials, die wichtige Prädiktoren für den Erfolg der Krebsimmuntherapie sind. Waschen Sie zunächst CD3 / CD28-Perlen, indem Sie 12,5 Mikroliter Perlen pro Million Zellen in ein Mikrozentrifugenröhrchen übertragen und 12,5 Mikroliter PBS pro 12,5 Mikroliter der Perlen in der Tube hinzufügen. Legen Sie dann das Mikrozentrifugenröhrchen für eine Minute auf einen geeigneten Magneten, entsorgen Sie den Puffer und suspendieren Sie die Perlen im ursprünglichen Volumen des T-Zell-Mediums.