Indel-Nachweis nach CRISPR/Cas9-Mutagenese mittels hochauflösender Schmelzeanalyse in der Mücke Aedes aegypti

Dieses Protokoll ist eine sehr einfache und effiziente Möglichkeit, Mutanten zu erkennen, die durch die CRISPR/Cas9-Technologie von zahlreichen Individuen erzeugt werden. Die beiden Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie in wenigen Stunden durchgeführt werden kann und dass sie auf eine Vielzahl von Organismen anwendbar ist. Das Primer-Design kann für bestimmte Gene eine Herausforderung darstellen, und es können mehrere Runden des Primer-Designs und der Verifizierung erforderlich sein, um HRMA effizient zu machen.

Um eine Verlaufs-PCR durchzuführen, beginnen Sie mit der Vorbereitung eines Master-Mixes. Entfernen Sie dann 19 Mikroliter der Mastermischung für die Nicht-Template-Steuerung oder NTC in einer 96-Well-Platte. Fügen Sie dann die Vorlage dem verbleibenden Master-Mix hinzu.