Identification of Peptides of Small Extracellular Vesicles from Bone Marrow-Derived Macrophages

Jiale Cheng; Jiong Zhu; Yujiao Liu; Chen Yang; Yuehui Zhang; Yuchen Liu; Chaozhi Jin; Jian Wang

doi:10.3791/65521

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Biochemie

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Identifizierung von Peptiden kleiner extrazellulärer Vesikel aus Makrophagen aus dem Knochenmark

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Biochemie

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Identification of Peptides of Small Extracellular Vesicles from Bone Marrow-Derived Macrophages

Identifizierung von Peptiden kleiner extrazellulärer Vesikel aus Makrophagen aus dem Knochenmark

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08:34 min

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June 30, 2023

DOI:

10.3791/65521-v

DOI:

10.3791/65521-v

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08:34 min

June 30, 2023

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Jiale Cheng^1,2, Jiong Zhu^1,2, Yujiao Liu^2,3, Chen Yang^2,3, Yuehui Zhang², Yuchen Liu², Chaozhi Jin², Jian Wang^1,2

¹School of Basic Medical Sciences,Anhui Medical University, ²State Key Laboratory of Proteomics, Beijing Proteome Research Center, National Center for Protein Sciences (Beijing),Beijing Institute of Lifeomics, ³School of Life Sciences,Hebei University

Transkript

Wir untersuchen die funktionelle Rolle extrazellulärer Vesikel in der angeborenen Immunität. Wir haben ein Protokoll entwickelt, um kleine extrazelluläre Vesikel (sEVs) mittels differentieller Ultrazentrifugation zu isolieren und das Peptidom mittels LC-MS/MS zu identifizieren, wodurch die biologischen Schlüsselfunktionen der Peptide in sEVs aufgedeckt werden. Es wurde gezeigt, dass die extrazellulären Vesikel die interzelluläre Kommunikation vermitteln, indem sie Fracht zu Empfängerzellen transportieren, wie z. B. Proteine, Lipide und Nukleinsäuren.

Durch die Freisetzung antimikrobieller Komponenten fungieren sie als erste Verteidigungslinie gegen eindringende Mikroben in der angeborenen Immunität. Während die differentielle Ultrazentrifugation hochreine, kleine extrazelluläre sEVs liefert, kann sie zeitaufwändig sein und führt oft zu niedrigen Ausbeuten. In unserer Studie sind dies große Herausforderungen für die stabile Identifizierung von Peptiden mit geringer Häufigkeit in den sEVs.

Summary

Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus Makrophagen durch differentielle Ultrazentrifugation und Extraktion des Peptidoms zur Identifizierung mittels Massenspektrometrie.