Name: Dreidimensionale Bildgebung von tumortragendem Gewebe mit dem iterativen Bleaching erweitert den Multiplexitätsansatz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T13:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Erfahren Sie die dreidimensionale Bildgebung von peritonealen Metastasen mittels iterativer Bleichung für Multiplex-Immunfluoreszenz. Diese Methode ermöglicht die räumliche Analyse des Tumormikromilieus für Immuntherapieforschung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Anderson, N. M., Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment.</a> Curr Biol. 30 (16), R921-R925 (2020).</li>
<li>Li, Z., Li, J., Bai, X., Huang, X., Wang, Q. Tumor microenvironment as a complex milieu driving cancer progression: A mini-review. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLi%2C+Z+%22Clin+Transl+Oncol%22">Clin Transl Oncol</a>. , (2024).</li>
<li>Fridman, W. H., Zitvogel, L., Sautes-Fridman, C., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+contexture+in+cancer+prognosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">The immune contexture in cancer prognosis and treatment.</a> Nat Rev Clin Oncol. 14 (12), 717-734 (2017).</li>
<li>Roma-Rodrigues, C., Mendes, R., Baptista, P. V., Fernandes, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+tumor+microenvironment+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Targeting tumor microenvironment for cancer therapy.</a> Int J Mol Sci. 20 (4), 840(2019).</li>
<li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence%3A+A+powerful+tool+in+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence: A powerful tool in cancer immunotherapy.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3086(2023).</li>
<li>Bollhagen, A., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+multiplexed+tissue+imaging+in+precision+oncology+and+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Highly multiplexed tissue imaging in precision oncology and translational cancer research.</a> Cancer Discov. 14 (11), 2071-2088 (2024).</li>
<li>Jin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+spatial+transcriptomics+and+its+applications+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Advances in spatial transcriptomics and its applications in cancer research.</a> Mol Cancer. 23 (1), 129(2024).</li>
<li>Kashyap, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+tumor+heterogeneity%3A+From+data+acquisition+to+metric+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Quantification of tumor heterogeneity: From data acquisition to metric generation.</a> Trends Biotechnol. 40 (6), 647-676 (2022).</li>
<li>Chang, Q., Hedley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+applications+of+flow+cytometry+in+solid+tumor+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Emerging applications of flow cytometry in solid tumor biology.</a> Methods. 57 (3), 359-367 (2012).</li>
<li>Zhang, L., et al. Single-cell analyses inform mechanisms of myeloid-targeted therapies in colon cancer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+L+%22Cell%22">Cell</a>. 181 (2), 442-459.e29 (2020).</li>
<li>Wang, X. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+predictors+of+immunotherapy+response+in+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatial predictors of immunotherapy response in triple-negative breast cancer.</a> Nature. 621 (7980), 868-876 (2023).</li>
<li>Maestri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+proximity+of+tumor-immune+interactions+predicts+patient+outcome+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Spatial proximity of tumor-immune interactions predicts patient outcome in hepatocellular carcinoma.</a> Hepatology. 79 (4), 768-779 (2024).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tumor+microenvironment+in+cancer+progression+and+therapeutic+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Med%22%5BJournal%5D)">Role of tumor microenvironment in cancer progression and therapeutic strategy.</a> Cancer Med. 12 (10), 11149-11165 (2023).</li>
<li>Veninga, V., Voest, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+organoids%3A+Opportunities+and+challenges+to+guide+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor organoids: Opportunities and challenges to guide precision medicine.</a> Cancer Cell. 39 (9), 1190-1201 (2021).</li>
<li>Lin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+3d+atlas+of+state+transitions+and+immune+interaction+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multiplexed 3d atlas of state transitions and immune interaction in colorectal cancer.</a> Cell. 186 (2), 363-381.e19 (2023).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ibex%3A+An+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Ibex: An iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nat Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ibex%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Ibex: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Van Baal, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histophysiology+and+pathophysiology+of+the+peritoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">The histophysiology and pathophysiology of the peritoneum.</a> Tissue Cell. 49 (1), 95-105 (2017).</li>
<li>Bridda, A., Padoan, I., Mencarelli, R., Frego, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+mesothelioma%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22MedGenMed%22%5BJournal%5D)">Peritoneal mesothelioma: A review.</a> MedGenMed. 9 (2), 32(2007).</li>
<li>Demuytere, J., Ernst, S., Van Ovost, J., Cosyns, S., Ceelen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+immune+microenvironment+in+peritoneal+carcinomatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor immune microenvironment in peritoneal carcinomatosis.</a> Int Rev Cell Mol Biol. 371, 63-95 (2022).</li>
<li>Wang, Q., et al. Heterogeneity of tertiary lymphoid structures predicts the response to neoadjuvant therapy and immune microenvironment characteristics in triple-negative breast cancer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWang%2C+Q+%22Br+J+Cancer%22">Br J Cancer</a>. , (2024).</li>
<li>Kepenekian, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+mesothelioma%3A+Systematic+review+of+hyperthermic+intraperitoneal+chemotherapy+%28HIPEC%29+protocol+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Peritoneal mesothelioma: Systematic review of hyperthermic intraperitoneal chemotherapy (HIPEC) protocol outcomes.</a> Indian J Surg Oncol. 14 (Suppl 1), 39-59 (2023).</li>
<li>Mcquade, C., Renton, M., Chouhan, A., Macdermott, R., O'brien, C. Review of imaging peritoneal disease and treatment. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcquade%2C+C+%22Can+Assoc+Radiol+J%22">Can Assoc Radiol J</a>. , (2024).</li>
<li>Kenerson, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+slice+culture+as+a+biologic+surrogate+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor slice culture as a biologic surrogate of human cancer.</a> Ann Transl Med. 8 (4), 114(2020).</li>
<li>Arrizabalaga, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+slice+culture+system+for+ex+vivo+immunotherapy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor slice culture system for ex vivo immunotherapy studies.</a> Methods Cell Biol. 189, 55-69 (2024).</li>
<li>Neumeister, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+effect+of+preanalytic+cold+ischemic+time+on+protein+expression+in+breast+cancer+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of effect of preanalytic cold ischemic time on protein expression in breast cancer tissues.</a> J Natl Cancer Inst. 104 (23), 1815-1824 (2012).</li>
<li>Panchuk-Voloshina, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alexa+dyes%3A+A+series+of+new+fluorescent+dyes+that+yield+exceptionally+bright%2C+photostable+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Alexa dyes: A series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates.</a> J Histochem Cytochem. 47 (9), 1179-1188 (1999).</li>
<li>Rajaram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+strategies+to+capture+single-cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Sampling strategies to capture single-cell heterogeneity.</a> Nat Methods. 14 (10), 967-970 (2017).</li>
<li>Bella, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+peritoneal+carcinomatosis+to+develop+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Mouse models of peritoneal carcinomatosis to develop clinical applications.</a> Cancers (Basel). 13 (5), 963(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor Plus 750 Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A30105</td><td>F-Aktin-Farbstoff</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Anti-Mensch CD206 (MMR) Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>321114</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Anti-Mensch CD31 Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>303110</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Anti-Mensch CD4 Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>300519</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Anti-Human-Antikörper HLA-DR</td><td>BioLegend</td><td>307656-Antikörper</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Anti-Maus-/Human-CD44-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>103016-Antikörper</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Anti-Human-CD45-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>304060</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Anti-Calretinin-Antikörper [EP1798]</td><td>Abcam</td><td>ab214244</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Anti-Human-CD3-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>300416</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Anti-Human-CD8-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>344726-Antikörper</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Anti-Human-Podoplanin-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td></td><td>337007-Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Anti-Vimentin-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>677807-Antikörper</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 CD68-Antikörper (KP1)</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-20060AF647</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 750 Cytokeratin, pan Antikörper (AE-1/AE-3)</td><td>Novus</td><td>NBP2-33200AF750</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 750 Humaner Alpha-Glattmuskel-Aktin-Antikörper</td><td>R& D</td><td>IC1420S</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 CD20 Monoklonaler Antikörper (L26) eBioscience</td><td>Thermo Fisher</td><td>53-0202-82</td><td>Antikörper</td></tr><tr><td>Antibiotisch-Antimykotisch</td><td>Gibco</td><td>15240096</td><td>Nahrungsergänzungsmittel</td></tr><tr><td>Erntemedium BioMed Klares Harz (Form 3)</td><td>FormLabs</td><td>RS-F2-BMCL-01</td><td>Harz für Plattform + Inkubationsplatte</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906-500g</td><td>Komponente "Blockierende Lösung"</td></tr><tr><td>Gegossenes Acryl mit einer Dicke von 1/32" zum</td><td></td><td></td><td>Schneiden des Schiebers</td></tr><tr><td>CleanStation DT3&nbsp;</td><td>Stratasys</td><td>DT3</td><td>Nachbearbeitung für Höhenversteller & Außendeckel</td></tr><tr><td>Behälter, Probe&nbsp;</td><td>McKesson</td><td>870203</td><td>Transfer von Gewebe vom Schneidetisch auf den Vorbereitungstisch</td></tr><tr><td>CorelDraw&nbsp;</td><td>CorelDRAW</td><td></td><td>Software zur Vorbereitung der vektorbasierten Designdatei für das Laserschneiden</td></tr><tr><td>Cytofix</td><td>BD Bioscience</td><td>554655</td><td>Fixiermittel</td></tr><tr><td>Schale 15 cm</td><td>Falcon</td><td>353025</td><td>Schale, die bei der Montage verwendet wird</td></tr><tr><td>Schale 35 mm Nr. 1,5 Deckglas 14 mm Glasdurchmesser Unbeschichtet</td><td>Matek</td><td>P35G-1,5-14-C</td><td>Bildgebungsschale</td></tr><tr><td>DMEM (keine Glukose)</td><td>Gibco</td><td>11966025</td><td>Erntemedium</td></tr><tr><td>Fc Block</td><td>BD Bioscience</td><td>564220</td><td>Blockierungslösungskomponente</td></tr><tr><td>Form 3B +</td> <td>Formlabs</td><td>Form 3B +</td> <td>Drucker für Plattform + Inkubationsplatte</td></tr><tr><td>Form Cure</td><td>Formlabs</td><td>FH-CU-01</td><td>Nachbearbeitung für Plattform + Inkubationsplatte</td></tr><tr><td>Form Wash</td><td>Formlabs</td><td>FH-WA-01</td><td>Nachbearbeitung für Plattform + Inkubationsplatte</td></tr><tr><td>GrabCAD Print</td><td>GrabCAD</td><td>GrabCAD Print</td><td>Software zur Vorbereitung von Modellen für Stratasys-Drucker</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 10 mg/mL</td><td>Biotium</td><td>40046</td><td>Kernfarbstoff</td></tr><tr><td>J826 Prime 3D-Drucker</td><td>Stratasys</td><td>J826</td><td>Drucker für Höhenversteller und Außendeckel</td></tr><tr><td>LAS X</td><td>Leica</td><td>LAS</td><td>X Konfokale Software</td></tr><tr><td>Laserschneidsystem&nbsp;</td><td>Universal Laser Systems</td><td>ULS PLS6.150D</td><td>CO2 Laserschneiden für Schieber</td></tr><tr><td>Lithiumborhydrid</td><td>STREM Chemicals</td><td>93-0397</td><td>Bleichchemikalie</td></tr><tr><td>PBS, pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>Base Puffer zum Waschen, Blockieren, Färben</td></tr><tr><td>PreForm</td><td>FormLabs</td><td>PreForm</td><td>Software zur Vorbereitung von Modellen für Formlab-Drucker</td></tr><tr><td>Seidennähte 2-0&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>A305. O35</td><td>Gewebe auf Plattform fixieren</td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop Stellaris 8 WLL</td><td></td> Leica <td>STELLARIS 8</td><td>Konfokale Bildgebung&nbsp;</td></tr><tr><td>Spritzenvorsatzfilter</td><td></td><td></td><td>Filter ab Lösung</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>American Bio</td><td>AB02025-00100</td><td>Permeabelisierendes Reagenz, blockierende Lösungskomponente</td></tr><tr><td>Vero ContactClear</td><td>Stratasys</td><td>CTT610, 4 KG</td><td>Harz für Höhenversteller & Außendeckel</td></tr><tr><td>Warm Schale</td><td>Spring USA</td><td>ST-1220</td><td>hält Medien und Gewebe warm</td></tr><tr><td>Wasser, destilliert</td><td>Gibco</td><td>15230-170</td><td>Verdünnungsmittel für LiBH4</td></tr></tbody></table>

dreidimensionale bildgebung von tumortragendem gewebe mit dem iterativen bleaching erweitert den multiplexitätsansatz

Three-Dimensional Imaging of Tumor-Bearing Tissue Using the Iterative Bleaching Extends Multiplexity Approach

Das Peritoneum ist eine membranöse Struktur von weniger als 1 mm Dicke, die die Oberfläche der Bauchdecke auskleidet und an die Oberflächen der Bauchorgane angrenzt. Es besteht aus oberflächlichem Mesothel und darunter liegendem Bindegewebe, das mit Fettzellen, Lymphozyten, Makrophagen und Fibroblasten sowie Blut- und Lymphgefäßen durchsetzt ist. Peritoneale Malignome gehen meist auf metastasen von abdominalen Tumoren zurück (z. B. Eierstockkrebs oder Magenkrebs)18 oder seltener können Primärtumoren des Peritoneums (z. B. Mesotheliom) sein19. Diese oft kleinen (&lt;1 cm) Tumorläsionen sind hochkomplex, können aber mit der beschriebenen Technik in 3D charakterisiert werden. Eine maximale Projektion von fünf konfokalen Schnitten wird verwendet, um die gesamte Probe auf einer Plattform zu betrachten (Abbildung 4, Einschub in der oberen linken Ecke). Drei primäre konjugierte Antikörper (AF488-CD44, AF594-CD45 und AF647-Podoplanin) wurden zusammen mit dem nukleären Farbstoff Hoechst für die erste Runde von IBEX verwendet (IBEX1, Abbildung 4). Tumorläsionen werden durch die rosettenartigen Strukturen deutlich, die für CD44 und Podoplanin doppelt positiv sind und eine für das papilläre Mesotheliom charakteristische Anordnung von Kernen aufweisen.
Tumorzellen wurden anhand der Zellmorphologie und zweier Antikörper identifiziert, da sowohl Anti-Podoplanin als auch Anti-CD44 Nicht-Tumorzellen erkennen, wie der Nachweis von Lymphgefäßen über Anti-Podoplanin und die Bindung des CD44-Antikörpers an Untergruppen von Immunzellen zeigt. Kleinere Regions of Interest (ROIs) werden dann mit einem Kachelscanformat in höherer Auflösung und optimierten Z-Schrittgrößen für das Rendern von 3D-Projektionen erfasst (Abbildung 5A). Die Plattformen wurden durch die iterativen Färbeverfahren geführt, und die gleichen ROIs wurden in den IBEX-Zyklen 1-6 abgebildet. Repräsentative Bilder für Tumor (gelber Kasten) und Tumor-tertiäre lymphoide Struktur (TLS) Grenzflächen (blauer Kasten) sind in Abbildung 5B-M zusammengestellt. 
Das Vorhandensein von TLS und die Dichte von CD3-positiven Zellen deuten auf eine signifikante Infiltration von Immunzellen20 und möglicherweise auf ein Ansprechen auf immunmodulatorische Arzneimittelhin 21. Bemerkenswert ist, dass TLS und der Großteil der Tumorläsionen in unterschiedlichen Z-Tiefen des Gewebes vorhanden sind, wie der Vergleich von Stapelprojektionen verschiedener optischer Schnitte in Abbildung 6 zeigt, was die Vorteile der 3D-Bildgebung und die potenziell übersehene Biologie hervorhebt, wenn die 2D-Bildgebung auf 3D-Strukturen angewendet wird. Der 3D-Charakter dieser Läsionen wird in den Filmdateien (Film 1-12) deutlicher, die die Volumendarstellungen der einzelnen Läsionen in Abbildung 5 darstellen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Arbeitsablauf vom 3D-Druck zur 3D-Bildgebung von Peritonealtumoren. Das Protokoll besteht aus einer Abfolge von fünf Schritten zur Erstellung von 3D-Multiplexbildern aus tumortragendem Peritonealgewebe. (1) Drucken von Gewebeaufnahmeplattformen, Teilen von Bildgebungsadaptern und Inkubationsplatte. (2) Verfahren zur Beschaffung und Montage von Gewebe. (3) Fixierung mit Paraformaldehyd. (4) IBEX-Färbe- und Bildgebungszyklen. (5) 3D-Rekonstruktion mit Bildgebungssoftware. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Hardware-Komponenten mit Gewebeschnittstelle für die 3D-Bildgebung. (A) Schematische Darstellung der Plattformanordnung innerhalb des Bildgebungsadapters. (B) Eine 9-Well-Inkubationsplatte. (C) Fotos von Bildadapterkomponenten mit Montage. (D) Mesotheliom-tragendes Peritoneum, wie es bei der diagnostischen Laparoskopie beobachtet wurde. (E) Montage des Gewebes auf der Plattform. (F,G) Tumortragendes Peritoneum, das auf Plattformen montiert ist. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig03.jpg"> 
Abbildung 3: Zeitleiste der IBEX-Zyklen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Überblick über die Plattform nach der Inkubation mit dem IBEX1-Panel. Maximale Projektion der gesamten Plattform nach der Inkubation mit IBEX1-Panel (Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 und AF647-Podoplanin). Der gestrichelte Kreis markiert den Tumor. Einschub: Foto des tumortragenden Peritoneums, das auf der Bildgebungsplattform montiert ist. Maßstab: 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig05.jpg"> 
Abbildung 5: Hochauflösende Immunfluoreszenzbilder ausgewählter Plattformregionen. (A) Maximale Projektion des zusammengefügten 56-Kachel-Z-Stapel-Bildes, das nach der Inkubation mit dem IBEX1-Panel (Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 und AF647-Podoplanin) aufgenommen wurde. Gelbes Rechteck: Tumorläsion in Panels (B-G). Blaues Rechteck: Schnittstelle zwischen Tumor und tertiärer lymphatischer Struktur, dargestellt in (H-M). (B-G) Eine einzelne Tumorläsion mit IBEX-Panel 1-6 im Volumen-Rendering. (B) IBEX1, grün: CD44, rot: CD45, cyan: Podoplanin. (C) IBEX2, grün: CD20, rot: F-Aktin, cyan: CD3. (D) IBEX3, grün: CD8, rot: CD4, cyan: panCK. (E) IBEX4, grün: CD31, cyan: CD68. (F) IBEX5, grün: CD206, cyan: Calretinin. (G) IBEX6, grün: Vimentin, rot: HLADR. (H-M) Eine individuelle Schnittstelle zwischen Tumor und tertiärer lymphatärer Struktur und IBEX-Panel 1-6 im Volumen-Rendering. (H) IBEX1, grün: CD44, rot: CD45, cyan: Podoplanin. (I) IBEX2, grün: CD20, rot: F-Aktin, cyan: CD3. (J) IBEX3, grün: CD4, rot: panCK, cyan: CD8. (K) IBEX4, grün: CD31, rot: SMA, cyan: CD68. (L) IBEX5, grün: CD206, cyan: Calretinin. (M) IBEX6, grün: HLADR, cyan: Vimentin. Alle Blenden, blau: Hoechst. Maßstabsleisten: (A, 1 mm); (B-M, 250 μm). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig06.jpg"> 
Abbildung 6: Simulierte 2D-Bildgebung. Der Vergleich von begrenzten (10 optische Schnitte) und Full-Stack-Projektionen (102 optische Schnitte) bestätigt den Verlust des Gewebekontexts in der 2D-Simulation. (A) Maximale Projektion der Abschnitte 30-40 (10 μm). (B) Maximale Projektion der Abschnitte 85-95 (10 μm). (C) Maximale Projektion der Abschnitte 1-102 (~100 μm). Alle Panels, IBEX2 (Hoechst, AF488-CD20, AF647-CD3, AF790-phalloidin). Maßstab: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig06large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Tabelle 1: Antikörper, die für die einzelnen IBEX-Panels verwendet wurden. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Table%201_IBEX%20panels.xlsx" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Tabelle herunterzuladen.</a>
Film 1: Animiertes Volumen-Rendering der einzelnen Läsion mit IBEX-Panel 1 (blau: Hoechst, grün: CD44, rot: CD45, cyan: Podoplanin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie1_IBEX1.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 2: Animiertes Volumen-Rendering der einzelnen Läsion mit IBEX-Panel 2 (blau: Hoechst, grün: CD20, rot: F-Aktin, cyan: CD3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie2_IBEX2.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 3: Animiertes Volumen-Rendering der einzelnen Läsion mit IBEX-Panel 3 (blau: Hoechst, grün: CD8, rot: CD4, cyan: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie3_IBEX3.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 4: Animiertes Volumen-Rendering der einzelnen Läsion mit IBEX-Panel 4 (blau: Hoechst, grün: CD31, cyan: CD68). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie4_IBEX4.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 5: Animiertes Volumen-Rendering der einzelnen Läsion mit IBEX-Panel 5 (blau: Hoechst, grün: CD206, cyan: Calretinin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie5_IBEX5.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 6: Animiertes Volumen-Rendering der einzelnen Läsion mit IBEX-Panel 6 (blau: Hoechst, grün: Vimentin, rot: HLADR). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie6_IBEX6.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 7: Animiertes Volumen-Rendering der tertiären lymphoiden Struktur-Läsions-Grenzfläche mit IBEX-Panel 1 (blau: Hoechst, grün: CD44, rot: CD45, cyan: Podoplanin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie7_TLS_IBEX1.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 8: Animiertes Volumen-Rendering der tertiären lymphoiden Struktur-Läsionen-Grenzfläche mit IBEX-Panel 2 (blau: Hoechst, grün: CD20, rot: F-Aktin, cyan: CD3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie8_TLS_IBEX2.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 9: Animiertes Volumen-Rendering der tertiären lymphoiden Struktur-Läsions-Grenzfläche mit IBEX-Panel 3 (blau: Hoechst, grün: CD8, rot: CD4, cyan: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie9_TLS_IBEX3.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 10: Animiertes Volumen-Rendering der tertiären lymphoiden Struktur-Läsions-Grenzfläche mit IBEX-Panel 4 (blau: Hoechst, grün: CD31, rot: SMA, cyan: CD68). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie10_TLS_IBEX4.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 11: Animiertes Volumen-Rendering der tertiären lymphoiden Struktur-Läsions-Grenzfläche mit IBEX-Panel 5 (blau: Hoechst, grün: CD206, cyan: Calretinin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie11_TLS_IBEX5.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Film 12: Animiertes Volumen-Rendering der tertiären lymphoiden Struktur-Läsions-Grenzfläche mit IBEX-Panel 6 (blau: Hoechst, grün: Vimentin, rot: HLADR). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie12_TLS_IBEX6.mp4" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diesen Film herunterzuladen.</a>
Ergänzungsdatei 1: Druckdatei für die Inkubationsplatte. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/incubation_plate.form" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzungsdatei 2: Druckdatei für die 36 einzelnen Plattformen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/platform_x36.form" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Datei 3: Druckdatei für den Höhenverstellring. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_heightAdjuster.STL" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzungsdatei 4: Druckdatei für den Außendeckel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_petriDishLid_35mm.STL" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>
Ergänzende Datei 5: Lasergeschnittene Datei für den Schieberegler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/imaging_platform_slider.DWG" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.</a>

Dreidimensionale Bildgebung von tumortragendem Gewebe mit dem iterativen Bleaching erweitert den Multiplexitätsansatz

The spatial heterogeneity of the tumor microenvironment (TME) is a critical determinant of therapeutic response, particularly for immune-oncology agents, ...

three-dimensional-imaging-tumor-bearing-tissue-using-iterative

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Einen umfassenden Überblick über die Techniken bei der Erzeugung von einem Maus-Modell von Mundkrebs und quantitative Überwachung der Tumorinvasion in die Zunge durch Multi-Photonen-Mikroskopie markierter Zellen beteiligt wird vorgestellt. Dieses System kann als eine nützliche Plattform für die molekulare Beurteilung und Wirksamkeit von Medikamenten von anti-invasive Verbindungen dienen.

Multi-Photonen-Imaging der Tumorzellinvasion in einem orthotopen Mausmodell des oralen Plattenepithelkarzinoms

Komplexe Gewebemassen, von Organen, Tumoren, werden von verschiedenen zellulären Elementen. Wir erläutert den Beitrag von zellulären Phänotypen innerhalb eines Gewebes unter Verwendung von Multi-markierte Fluoreszenz-transgenen Mäusen in Kombination mit Multiimmunfluoreszenzfärbung gefolgt von Entmischung, den Zellursprung sowie Zelleigenschaften auf der Basis der Proteinexpression zu entschlüsseln.

Quantitative Multispektrale Fluoreszenz-Analyse Nach Gewebetransplantation zur Visualisierung von Zell Origins, Typen und Wechselwirkungen

Kombinatorische 5 fluoreszierenden Proteinen markiert von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen in vivo ermöglicht klonalen Tracking über die konfokale und Zwei-Photonen-Mikroskopie, die einen Einblick in die Knochenmark blutbild Architektur während der Regeneration. Dieses Verfahren ermöglicht nicht-invasive Abbildung von Schicksal spektral kodierten HSPCs abgeleiteten Zellen in intaktem Gewebe für ausgedehnte Zeiträume nach der Transplantation.

In vivo Klonale Verfolgung von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen durch Fünf Fluoreszierende Proteine ​​mit Hilfe der konfokalen und Multiphotonen Mikroskopie Markierte

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung von Multiphotonen - Mikroskopie ausgedehnte Zeitraffer-Bildgebung von mehrzelligen Interaktionen in Echtzeit durchzuführen, in vivo auf Einzelzellauflösung.

Erweiterte Zeitraffer-Intravital Imaging von Echtzeit-Vielzellige Dynamics im Tumormikromilieu

Optische Kohärenztomografie (OCT), eine dreidimensionale imaging-Technologie, wurde verwendet, um zu überwachen und zu charakterisieren, die Wachstum Kinetik der vielzelligen Tumor Sphäroide. Präzise volumetrische Quantifizierung der Tumor Sphäroide mit einem Voxel zählen Ansatz und markierungsfreie abgestorbenes Gewebe-Erkennung in der Sphäroide basierend auf intrinsische optische Dämpfung dagegen wurden demonstriert.

Longitudinal morphologischen und physiologischen Überwachung der dreidimensionalen Tumor Sphäroide mit optischen Kohärenztomographie

Hier beschreiben wir eine Methode zur hochauflösenden Zeitraffer-Multiphotonen-Bildgebung von Hirntumorzellen vor und nach invasiven chirurgischen Eingriffen (z.B. Biopsie) innerhalb desselben lebenden Tieres. Diese Methode ermöglicht es, die Auswirkungen dieser invasiven chirurgischen Eingriffe auf das wandernde, invasive und proliferative Verhalten von Tumorzellen auf einer einzelnen Zellebene zu untersuchen.

Längsschnitt-Intravital-Bildgebung des Hirntumorzellverhaltens als Reaktion auf eine invasive chirurgische Biopsie

Im Zeitalter der Krebsimmuntherapie hat das Interesse an der Aufklärung der Dynamik der Tumormikroumgebung markant zugenommen. Dieses Protokoll beschreibt eine massenspektrometrische Bildgebungstechnik in Bezug auf ihre Färbe- und Bildgebungsschritte, die eine stark gemultiplexte räumliche Analyse ermöglichen.

Erweiterung des Verständnisses der Tumormikroumgebung mittels massenspektrometrischer Bildgebung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeproben

Hier stellen wir eine 5D-Ultraschalltechnik vor, die multiplanare 3D-Rekonstruktion und Farbdopplerfusion kombiniert und eine synchrone Visualisierung von strukturellen und funktionellen Informationen der Schilddrüse ermöglicht. Durch die Minimierung blinder Flecken ermöglicht diese Methode eine schnelle und präzise Lokalisierung von Läsionen, um die diagnostische Genauigkeit zu verbessern, was insbesondere Anfängern zugute kommt.

Synchrone triplanare Rekonstruktion integriert mit Farbdoppler-Mapping zur präzisen und schnellen Lokalisierung von Schilddrüsenläsionen

Quantitative 3D-Sauerstoffkarten von murinen Tumoren wurden nichtinvasiv mit Hilfe der Pulselektronen-Paramagnetischen Resonanz abgebildet. Ultraschall B-Modus und Power-Doppler wurden für die Anatomie und den Gefäßaufbau eingesetzt. Bilder aus beiden Modalitäten wurden überlagert, um eine multiparametrische Tumoranalyse zu ermöglichen.

Beurteilung der Tumorhypoxie: In vivo 3D-Sauerstoffbildgebung durch paramagnetische Elektronenresonanz 

Hier beschreiben wir die Anwendung der Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) Methode unter Verwendung kommerziell verfügbarer, automatisierter Gewebefärbegeräte und Optimierungsüberlegungen für die Verwendung von Tyramid-Signalamplifikations-basierten Reagenzien.

Iteratives Bleaching erweitert die Multiplizität durch den Einsatz von Färbeautomatisierung für Core-Anlagen

Die Implementierung einer kostengünstigen, vielseitigen Photobestrahlungstechnik mit der manuellen IBEX-Methode ermöglicht eine optimale Bildgebung von menschlichem Gewebe mit signifikanter nativer Autofluoreszenz. Dieses Protokoll beschreibt, wie man Multiplex-Bilder von Ganzobjektträgern aus archivierten klinischen Proben mit einem inversen Mikroskop, weit verbreiteten Reagenzien und Open-Source-Software für die Bildausrichtung und -verarbeitung erhält.

Optimierter Workflow für iteratives Bleaching erweitert die Multiplex-Bildgebung von stark autofluoreszierenden klinischen Proben

Erfahren Sie die dreidimensionale Bildgebung von peritonealen Metastasen mittels iterativer Bleichung für Multiplex-Immunfluoreszenz. Diese Methode ermöglicht die räumliche Analyse des Tumormikromilieus für Immuntherapieforschung.

Dreidimensionale Bildgebung von tumortragendem Gewebe mit dem iterativen Bleaching erweitert den Multiplexitätsansatz

Weitere Videos entdecken