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DOI: 10.3791/68370-v
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This study investigates the use of portable long-read sequencing for determining drug-resistant tuberculosis (TB) susceptibility in resource-limited settings. The protocol aims to provide accurate results comparable to gold standard methods, enhancing accessible TB diagnostics.
Dieses Protokoll wurde für die gezielte Tiefensequenzierung von 18 Arzneimittelresistenzregionen bei Mycobacterium tuberculosis unter Verwendung einer Long-Read-Sequenzierungsplattform optimiert, gefolgt von der Analyse mit einer Tuberkulose-spezifischen Bioinformatik-Pipeline, die für Long-Read-Daten ausgelegt ist.
Ich untersuche, ob tragbare Long-Read-Sequenzierung TB-resistente Anfälligkeitsergebnisse in ressourcenbegrenzten Umgebungen liefern kann, mit einer Genauigkeit, die mit der Goldstandard-Methode vergleichbar ist, und so zugängliche, hochwertige Tuberkulosediagnostik voranbringt. Einsatz gezielter Next-Generation-Sequenzierung als diagnostisches Werkzeug für medikamentenresistente Tuberkulose, indem ein umfassendes Resistenzprofil direkt aus klinischer Probe ohne bioinformatische Erfahrung angeboten wird. Unser Protokoll mit Long-Read Sequencing hat das Potenzial, schnellere Bearbeitungszeiten zu bieten, einen einfacheren Arbeitsablauf als die Echtzeit-Resistenzerkennung zu ermöglichen, umfassende TB-Diagnostik zu ermöglichen und die Ausbruchsverfolgung in ressourcenbegrenzten Umgebungen mit minimaler Infrastruktur zu verbessern.
Zu Beginn berechnen Sie 100 Nanogramm jeder Ampliconprobe basierend auf der Konzentration und übergeben Sie das erforderliche Volumen in ein sauberes PCR-Rohr. Um die Gesamtmasse der Ampliconen in der Probe zu bestimmen, verwenden Sie die gegebene Formel. Stellen Sie das Gesamtvolumen jeder Probe mit nukleasefreiem Wasser auf 12,5 Mikroliter an.
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