Summary
यह पांडुलिपि प्रोस्टेट सूक्ष्म विच्छेदन और प्रयोगशाला माउस में शल्य चिकित्सा बधिया करने के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन है। हम भी इन प्रोटोकॉल द्वारा उत्पादित प्रतिनिधि परिणामों को दर्शाती है। अंत में, हम फायदे और इन प्रोटोकॉल के उपयोग पर चर्चा की।
Introduction
प्रोस्टेट अमेरिका में पुरुषों में कैंसर का सबसे आम साइट है। लगभग 220,000 पुरुषों को हर साल प्रोस्टेट कैंसर के साथ का निदान किया जाएगा, और लगभग 27,000 पुरुष अपनी बीमारी 1 का शिकार होगा। पुरुषों अमेरिका 1 में प्रोस्टेट कैंसर के निदान के लिए एक जीवन भर 7 में 1 जोखिम है। सौम्य प्रोस्टेट hyperplasia (BPH), एक उम्र से संबंधित प्रोस्टेट के noncancerous इज़ाफ़ा, यह भी एक व्यापक हालत, 80 2 से अधिक पुरुषों की 80% से अधिक प्रभावित हो रहा है। इस तरह के रूप में, प्रोस्टेट काफी शोध का ध्यान केंद्रित है।
माउस मॉडल व्यापक रूप से इस्तेमाल किया गया है प्रोस्टेट 3 के रोगों का अध्ययन करने के लिए। कुल मिलाकर, माउस प्रोस्टेट ग्रंथि मानव 4 के एक उत्कृष्ट प्रतिनिधि है, लेकिन वहाँ समानता और माउस और मानव प्रोस्टेट शरीर रचना विज्ञान और शरीर विज्ञान 5 के बीच मतभेद हैं। दोनों प्रजातियों में, प्रोस्टेट मूत्राशय के आधार पर स्थित है, मूत्रमार्ग के आसपास। मानव प्रोस्टेट ग्रंथि एक भी लोहो सकता है, चार जोनों में विभाजित: केंद्रीय, संक्रमण, परिधीय, और पूर्वकाल fibromuscular स्ट्रोमा। पूर्वकाल, उदर, और dorsolateral: इसके विपरीत, माउस प्रोस्टेट मूत्रमार्ग के आसपास विभिन्न पदों पर तीन बनती पालियों के होते हैं। एक सेलुलर स्तर पर, मुख्य अंतर यह मानव में ल्यूमिनल सेल अनुपात करने के लिए बेसल सेल के बारे में 1 है कि: 1 है, लेकिन यह 1: 4 चूहों 6 में। murine स्ट्रोमा भी मनुष्य के सापेक्ष चूहों में अलग है - मानव, अधिक व्यापक चिकनी पेशी है, जबकि मांसपेशियों परत murine प्रोस्टेट में बहुत पतली है। उचित पहचान, विच्छेदन, और माउस प्रोस्टेट की हैंडलिंग माउस प्रोस्टेट अनुसंधान के लिए आवश्यक हैं।
हार्मोन के स्तर में तेजी से विकास और दोनों मनुष्यों और चूहों में प्रोस्टेट ग्रंथि के homeostasis प्रभावित करते हैं। एस्ट्रोजन प्रोस्टेट विकास 7 में एक भूमिका निभा रहा है, प्रोस्टेट में सबसे महत्वपूर्ण हार्मोन टेस्टोस्टेरोन है। टेस्टोस्टेरोन ग्रंथियों के विकास के लिए आवश्यक है एकडी रखरखाव। या तो शारीरिक या रासायनिक बधिया के बाद, वयस्क प्रोस्टेट apoptose में ल्यूमिनल कोशिकाओं का लगभग 90%, और ग्रंथि सिकुड़ती। टेस्टोस्टेरोन बधिया की शर्तों के तहत एक व्यक्ति को पुनः शुरू किया जाता है, प्रोस्टेट पूरी क्षमता से खुद को पुनर्जीवित करने में सक्षम है। टेस्टोस्टेरोन भी प्रोस्टेट कैंसर, यही वजह है कि एण्ड्रोजन अभाव चिकित्सा आमतौर पर इस्तेमाल किया चिकित्सीय रणनीति है ड्राइव करने के लिए लगता है। हालांकि, कई प्रोस्टेट कैंसर एण्ड्रोजन के अभाव के लिए प्रतिरोधी हो जाते हैं। इसके अलावा, प्रोस्टेट कैंसर के उपचार के लिए एण्ड्रोजन अभाव चिकित्सा के दौर से गुजर पुरुषों बधिया और पुनर्जीवित शर्तों के चक्र से गुजरना। माउस में, शल्य बधिया, टेस्टोस्टेरोन reintroducing द्वारा प्रोस्टेट के हार्मोनल उत्थान के साथ-साथ, जिसके साथ बधिया प्रतिरोध और प्रोस्टेट पर टेस्टोस्टेरोन साइकिल चालन के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है।
इस अनुच्छेद में, हम चर्चा करेंगे और उचित तकनीक है जिसके द्वारा locat के लिए प्रदर्शन करेंगेई और सूक्ष्म काटना एक माउस प्रोस्टेट, साथ ही एक माउस नपुंसक शल्य चिकित्सा करने के लिए।
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Protocol
इस प्रोटोकॉल को पूरा करती है और दिशा निर्देशों के जॉन्स हॉपकिन्स विश्वविद्यालय संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा निर्धारित इस प्रकार है।
1. सूक्ष्म विदारक एक माउस प्रोस्टेट
- कार्बन डाइऑक्साइड asphyxiation या संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग के दिशा निर्देशों के अनुसार एक वैकल्पिक विधि को मंजूरी दी द्वारा माउस euthanize।
- चार पंजे से प्रत्येक के माध्यम से एक पिन डालने से एक विच्छेदन बोर्ड के लिए एक लापरवाह स्थिति में माउस पिन।
- 70% इथेनॉल के साथ पेट स्प्रे।
- संदंश के साथ पेट के निचले हिस्से की त्वचा पकड़ो, और कैंची का उपयोग त्वचा के माध्यम से कट और लिंग के उद्घाटन के लिए, किसी भी अंगों में कटौती नहीं करने के लिए सावधान लगभग 1 सेमी पूर्वकाल पेरिटोनियम करने के लिए।
- पेट के निचले हिस्से, ऊपर रिब पिंजरे के लिए पेट के दोनों ओर से त्वचा और पेरिटोनियम दूर कट, पेरिटोनियल गुहा को उजागर।
- मूत्राशय और मूत्रजननांगी पथ को पहचानें, और धीरे तरफ करने के लिए वसा और अन्य अंगों को ले जाकर उन्हें बेनकाब।
- यूएसआईएनजी संदंश, पकड़ मूत्रमार्ग के पास आधार पर वीएएस deferens, और इसे दूर करने के लिए आंसू।
- विपरीत वीएएस deferens के साथ दोहराएँ।
- संदंश का प्रयोग, ध्यान पकड़ मूत्राशय और इसे खींच, जबकि एक साथ कैंची का उपयोग मूत्राशय और उदर प्रोस्टेट (मूत्राशय के आधार नीचे लगभग 1 सेमी) नीचे मूत्रमार्ग के माध्यम से कटौती करने के लिए।
नोट: जैसा कि मूत्राशय ऊपर खींच लिया है, पूरे मूत्रजननांगी पथ (युक्त मूत्राशय, मूत्रमार्ग, सभी प्रोस्टेट पालियों, और लाभदायक vesicles के एक वर्ग) इसके साथ आ जाएगा। वहाँ कुछ प्रतिरोध हो सकता है। - मूत्रजननांगी पथ (UGT) लगभग 5-10 मिलीलीटर फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) युक्त एक 60-100 मिमी पेट्री डिश में रखें।
- एक विच्छेदन खुर्दबीन के नीचे प्रोटोकॉल के शेष भाग को पूरा करें। दो ठीक संदंश, एक हाथ में एक का प्रयोग करें। "एक पेंसिल की तरह" संदंश पकड़ो और बेंच शीर्ष पर forearms आराम ताकि उन्हें स्थिर करने के लिए।
- स्थिति के लिए UGT ऐसी है कि मूत्राशय है ठीक संदंश का प्रयोग करेंशीर्ष पर, मूत्रमार्ग नीचे की ओर इशारा किया है, और लाभदायक vesicles मूत्राशय के दोनों तरफ तैनात हैं।
- पकड़ एक संदंश और सावधानी के साथ मूत्रमार्ग किसी भी प्रोस्टेट ऊतक दूर फाड़ के बिना अन्य संदंश के साथ दूर वसा खींच। नोट: फैट दिखाई देगी आसपास के ऊतकों को "चमकदार" रिश्तेदार।
- एक बार वसा निकाल दिया जाता है, प्रोस्टेट के दो पालियों उदर के बीच संयोजी ऊतक आंसू और उन्हें अलग करने के लिए संदंश का उपयोग करें।
- उदर पालियों में से एक को हटा दें, टिप के पास एक भी उदर पालि पकड़ के लिए एक संदंश का उपयोग करें, और पकड़ करने के लिए अन्य संदंश का उपयोग करने के लिए है कि आधार के रूप में संभव के रूप में मूत्रमार्ग के करीब पर पालि। हालांकि अभी भी पालि के आधार मनोरंजक, पकड़ करने के लिए अन्य संदंश मूत्रमार्ग का उपयोग करें। एक फर्म, निर्बाध गति के साथ मूत्रमार्ग से दूर पालि खींचो। सुनिश्चित करें कि कोई प्रोस्टेट ऊतक मूत्रमार्ग के साथ जुड़ा रहता बनाओ। पालि उचित माध्यम में रखें, अगले प्रयोगात्मक कदम पर निर्भर करता है।
- ठीक करने के लिए और आयल एम्बेड रोंपर्याप्त ऊतकीय विश्लेषण के लिए, 10% तटस्थ बफर formalin (NBF) 8 में पालि जगह है।
- ठंड के इस तरह के अक्टूबर के रूप में मध्यम, cryopreservation के लिए और 8 सेक्शनिंग में पालि रखें।
- एकल कक्ष अलगाव के लिए ठंड पीबीएस में पालि संस्कृति के लिए जगह या 9 प्रवाह cytometry।
- अन्य उदर लोब के साथ कदम दोहराएँ 1.15।
- पूर्वकाल पालियों में से एक को दूर करने के लिए, संदंश का उपयोग धीरे पालि लाभदायक पुटिका से दूर खींचने के लिए, सुनिश्चित करें कि लाभदायक पुटिका पंचर करने के लिए नहीं कर रही है। एक बार जब पालि लाभदायक पुटिका के स्वतंत्र है, कदम 1.15 में उदर पालि के रूप में एक ही फैशन में इसे हटा दें।
- अन्य पूर्वकाल पालि के साथ कदम दोहराएँ 1.17।
- इस तरह से अधिक शेष मूत्रजननांगी पथ फ्लिप कि पृष्ठीय प्रोस्टेट दिख रहा है।
- dorsolateral पालियों में से एक को दूर करने के लिए, संदंश का उपयोग दो पालियों dorsolateral और भी पालियों और टी के बीच संयोजी ऊतक के बीच संयोजी ऊतक करने के लिए आंसूवह लाभदायक vesicles के क्षेत्र पीछे। कदम 1.15 में उदर पालि के रूप में एक समान फैशन में पालि निकालें।
- अन्य dorsolateral लोब के साथ कदम दोहराएँ 1.20।
2. सर्जिकल बधिया
नोट: यह एक अस्तित्व सर्जरी है, तो अपूतिता, संज्ञाहरण, और दर्द प्रबंधन इस प्रोटोकॉल के नैतिक और सफलतापूर्वक पूरा करने के लिए महत्वपूर्ण हैं। सभी संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग के दिशा निर्देशों का पालन करें। हाइपोथर्मिया को रोकने के लिए इस तरह के एक recirculating पानी कंबल के रूप में एक बाहरी गर्मी स्रोत का प्रयोग करें, शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के दौरान। एक जानवर की पहुंच से बाहर छोड़ जब तक यह पर्याप्त होश आ गया है स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए नहीं है। एक जानवर जब तक पूरी तरह से ठीक है कि अन्य जानवरों की कंपनी के लिए सर्जरी आया है वापस नहीं है। सर्जरी में उपयोग करने से पहले सभी सर्जिकल उपकरणों आटोक्लेव।
- एक साफ, बाँझ सतह पर उचित उपायों (जैसे 2% साँस isoflurane) का उपयोग माउस anesthetize और मीटर की स्थितिएक लापरवाह स्थिति में OUSE। नोट: इस तरह के ketamine के रूप में वैकल्पिक संज्ञाहरण तरीकों, भी इस्तेमाल किया जा सकता है, अनुमोदित पशु प्रोटोकॉल पर निर्भर करता है।
- पैर की उंगलियों pinching द्वारा माउस की सजगता की जाँच करें। माउस प्रतिक्रिया नहीं करता है, तो अगले चरण के लिए आगे बढ़ना। यह प्रतिक्रिया करता है, तो 1-3 मिनट प्रतीक्षा करें और फिर से जाँच करें। एक बिजली के रेजर के साथ शल्य चिकित्सा क्षेत्र दाढ़ी।
- Aseptically माउस संस्थागत पशु चिकित्सा कर्मचारी या IACUC द्वारा सिफारिश की 70% इथेनॉल और आयोडीन या प्रक्रियाओं की बारी स्क्रब का उपयोग करने का पेट तैयार करते हैं।
- एक बाँझ छुरी का प्रयोग, त्वचा के माध्यम से एक 1 सेमी ऊर्ध्वाधर चीरा पेट के निचले हिस्से के midline में, लगभग 1.5 सेमी पूर्वकाल लिंग है।
- पेरिटोनियम के माध्यम से एक छोटा सा चीरा (<1 सेमी) बनाओ, सावधान किसी भी अंगों में कटौती करने के लिए नहीं।
- बाँझ संदंश, पकड़ पेरिटोनियम की कटौती बढ़त का प्रयोग और इसे उठा धीरे इतनी के रूप में पेरिटोनियल गुहा के नीचे देखने के लिए सक्षम होने के लिए।
- एक और बाँझ संदंश का प्रयोग, वीं में पहुँचनेई पेरिटोनियल गुहा और पकड़ सकते हैं या तो छोड़ दिया है या सही वृषण वसा पैड, मूत्राशय के लिए पार्श्व। पेरिटोनियम और त्वचा में खोलने के माध्यम से वसा पैड खींचो जब तक वृषण के रूप में अच्छी तरह से बाहर आता है। सावधान इस कदम के दौरान किसी भी अन्य ऊतकों या अंगों को चोट पहुंचाना नहीं बनें।
- एक दाग़ना कलम का उपयोग करना, वसा पैड कि वृषण पकड़ रहा है के माध्यम से कटौती। साथ दाग़ना कलम नोट वृषण धमनी के माध्यम से धीरे-धीरे कट: वृषण धमनी भी तेजी से कट जाता है, तो वहाँ बहुत ज्यादा खून बह रहा हो सकता है और माउस euthanized किया जा सकता है।
- एक बार वसा पैड और धमनी काट रहे हैं, वृषण और वसा पैड को हटा दें।
- दोहराएँ अन्य वृषण साथ 2.6-2.9 कदम। नोट: वृषण को हटाने के लिए एक वैकल्पिक तरीका शल्य चिकित्सा द्वारा वृषण धमनी, कैंची से काटने पोत द्वारा पीछा किया ligate है।
- सीवन पेरिटोनियम absorbable सीवन के साथ बंद हुआ।
- स्टेपल त्वचा शल्य घाव क्लिप के साथ बंद हुआ।
- दर्द का प्रबंधन करने के लिए एक एनाल्जेसिक प्रशासन, और जगहएक पिंजरे में 5-10 मिनट के लिए गर्म पर एक साफ पिंजरे में माउस। दर्द या रक्तस्राव के संकेत के लिए माउस मॉनिटर।
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Representative Results
सभी छह प्रोस्टेट पालियों (चित्रा 1) प्रोस्टेट सूक्ष्म विच्छेदन के माध्यम से एक माउस से हटा दिया गया। पूरा मूत्रजननांगी पथ (UGT) सभी प्रोस्टेट पालियों, मूत्राशय, लाभदायक vesicles, और मूत्रमार्ग (चित्रा 1 ए) से बना है। वीएएस deferens मूत्रमार्ग के लिए देता है, लेकिन प्रोस्टेट सूक्ष्म विच्छेदन के लिए अनावश्यक है, और इस तरह UGT के हटाने से पहले मूत्रमार्ग (चित्रा 1 बी -1 सी) काटने से अलग किया जा सकता है। मूत्रजननांगी पथ एक साथ रहेगा एक बार पेट (चित्रा -1) से हटा दिया। इस बिंदु पर, UGT वसायुक्त ऊतक, जो प्रोस्टेट पालियों (चित्रा 1E) के लिए पहुँच प्राप्त करने के लिए हटा दिया जाना चाहिए में कवर रहता है। सभी छह पालियों (उदर, पूर्वकाल, और dorsolateral जोड़े) मूत्राशय के आधार पर मूत्रमार्ग आसपास देखा जा सकता है। शुद्ध प्रोस्टेट ऊतक तो ऊपर (चित्रा 1F) प्रोटोकॉल के बाद हटाया जा सकता है। ये पालियों मईआगे के विश्लेषण के लिए उचित माध्यम में रखा जाएगा।
बधिया वृषण, जो टेस्टोस्टेरोन के प्राथमिक उत्पादक हैं हटाने की है। जब तक बधिया होता है पर जो बात प्रोस्टेट regresses (चित्रा 2A), टेस्टोस्टेरोन माउस में मौजूद है। टेस्टोस्टेरोन के reintroduction के माध्यम से हार्मोनल उत्थान बधिया (चित्रा 2 बी) का पालन कर सकते हैं। हम बधिया प्रदर्शन किया, हार्मोनल उत्थान के दो चक्रों द्वारा पीछा किया, और टेस्टोस्टेरोन का स्तर एलिसा (चित्रा 3) द्वारा माउस सीरम में निगरानी की गई। बधिया शर्तों के तहत, टेस्टोस्टेरोन का स्तर लगभग गायब। वैकल्पिक रूप से, tamoxifen (एक चयनात्मक एस्ट्रोजन रिसेप्टर न्यूनाधिक) hormonally सामान्य स्थिति में कोई महत्वपूर्ण अंतर को दर्शाता है। बधिया करने के बाद, टेस्टोस्टेरोन माउस को फिर से पेश किया गया था, टेस्टोस्टेरोन का स्तर नाटकीय रूप से (चित्रा 3) स्पाइक के कारण। हम तो सूक्ष्म विच्छेदित प्रोस्टेट एलचूहों के OBEs और उन्हें अलग-अलग पालियों पूर्वकाल (चित्रा 4 ए) के रूप में imaged। हम यह भी formalin तय आयल एम्बेडेड, और ऊतक sectioned। चित्रा 4 बी के तहत सामान्य hematoxylin और eosin दाग पूर्वकाल प्रोस्टेट ऊतक पता चलता है, बधिया, और पुनर्जीवित की स्थिति। बधिया प्रोस्टेट पालियों एक दसवें एक सामान्य प्रोस्टेट का आकार लगभग करने के लिए हटना, और कहा कि हार्मोनल उत्थान अपने मूल आकार में प्रोस्टेट पुनर्स्थापित करता है।
चित्रा 1: प्रोस्टेट माइक्रो-विच्छेदन प्रोटोकॉल का सकल प्रोटोकॉल। (क) मूत्रजननांगी पथ (UGT) अपनी प्राकृतिक अवस्था में, murine पेट में अवगत कराया। बिंदीदार रेखा लाभदायक vesicles (एसवी), प्रोस्टेट पालियों सहित UGT के विभिन्न भागों, धरना (पूर्वकाल प्रोस्टेट (एपी) और उदर प्रोस्टेट (उपाध्यक्ष) यहाँ दिखाई दे रहे हैं), मूत्राशय (बी), और मूत्रमार्ग (स्थित होमूत्राशय neath)। वीएएस deferens (वी डी) भी दिख रहा है। (ख) वीएएस deferens हटा दिया गया है। इस क्षेत्र के लिए तीर अंक से जो वीएएस deferens हटा दिया गया है। (ग) UGT उदर प्रोस्टेट पालियों नीचे मूत्रमार्ग काटने से पेट से हटा दिया गया है। (घ) UGT पीबीएस में रखा गया है और एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। (ई) फैट UGT से हटा दिया गया है, प्रोस्टेट के सभी छह पालियों की दृश्यता के लिए अनुमति देता है। तीर दो पालियों पूर्वकाल, उदर पालियों, और dorsolateral पालियों को इंगित करें। (च) सभी छह अलग-अलग पालियों प्रोस्टेट हटा दिया गया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: टिमबधिया और हार्मोनल उत्थान के लिए Eline। (क) टेस्टोस्टेरोन बधिया तक शारीरिक स्तर पर मौजूद है, जब टेस्टोस्टेरोन गायब हो जाता है और प्रोस्टेट के प्रतिगमन शुरू होता है। (ख) बधिया, जब तक टेस्टोस्टेरोन पुनः शुरू किया है, टेस्टोस्टेरोन को हटा प्रोस्टेट के हार्मोनल उत्थान हो सकता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3:। के तहत विभिन्न हार्मोनल शर्तों में टेस्टोस्टेरोन एलिसा टेस्टोस्टेरोन स्तर में इलाज Tamoxifen, hormonally सामान्य, बधिया, और hormonally पुनर्जीवित की स्थिति। पुनर्जीवित एक्स 2 सिंथेटिक टेस्टोस्टेरोन के दूसरे दौर के आरोपण के द्वारा पीछा किया, आरोपण और सिंथेटिक टेस्टोस्टेरोन को हटाने के लिए संदर्भित करता है। त्रुटि सलाखों स्टेन का प्रतिनिधित्वदर्द विचलन। यह आंकड़ा 5 से संशोधित किया गया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 4: बधिया और उत्थान की स्थिति के तहत प्रोस्टेट सूरत, बधिया hormonally सामान्य है, और hormonally पुनर्जीवित की शर्तों के तहत पूर्वकाल प्रोस्टेट पालियों (क) के सकल उपस्थिति।। पुनर्जीवित एक्स 2 सिंथेटिक टेस्टोस्टेरोन के दूसरे दौर के आरोपण के द्वारा पीछा किया, आरोपण और सिंथेटिक टेस्टोस्टेरोन को हटाने के लिए संदर्भित करता है। (ख) Formalin तय, आयल एम्बेडेड पूर्वकाल प्रोस्टेट पालियों sectioned और hematoxylin और eosin के साथ दाग। यहाँ एक बड़ा देखने के लिए क्लिक करेंयह आंकड़ा की आर संस्करण।
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Discussion
प्रोस्टेट सूक्ष्म विच्छेदन पालि-विशिष्ट प्रयोग और माउस प्रोस्टेट के विश्लेषण (चित्रा 1) के लिए अनुमति देता है। अनुवांशिक इंजीनियर माउस मॉडल में, phenotypes एक पालि कि दूसरों में नहीं देखा जाता है में देखा जा सकता है। इसके अलावा, ऊतकीय विश्लेषण के लिए, इस प्रोटोकॉल का आश्वासन दिया है कि शुद्ध प्रोस्टेट ऊतक की अधिकतम राशि sectioned जा सकता है और दाग, अन्य मूत्रजननांगी पथ अनुभाग में मौजूद ऊतकों के बिना। अंत में, एकल कोशिका के प्रयोगों के लिए, इस प्रोटोकॉल लगभग शुद्ध प्रोस्टेट कोशिकाओं के अलगाव के लिए अनुमति देता है। उपकला कोशिका संवर्धन किट आगे stromal कोशिकाओं से प्रोस्टेट कोशिकाओं को शुद्ध कर सकते हैं। माइक्रो-विच्छेदन के लिए सीमाएं एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करते हैं, और सीखने की अवस्था आवश्यक ठीक संदंश का उपयोग करने के लिए विच्छेदन खुर्दबीन के माध्यम से देख रहे हैं, जबकि शामिल हैं। वैकल्पिक रूप से, प्रोस्टेट ऊतक UGT के हिस्से के रूप में ऊतक विज्ञान के लिए sectioned किया जा सकता है, सूक्ष्म विच्छेदन अनावश्यक बना रही है। हालांकि, पूरे UGT सेक्शनिंग करने के लिए नकारात्मक है कि हैअन्य ऊतकों खंड में मौजूद हो जाएगा, यह रूप में साफ नहीं कर रही है। इसके अलावा, एकल प्रोस्टेट सेल आबादी पैदा करने के लिए, पालियों UGT से संक्रमण से बचने के लिए अलग किया जाना चाहिए।
सर्जिकल बधिया कई प्रोस्टेट अनुसंधान प्रयोगशालाओं के लिए एक बुनियादी सर्जरी है और प्रोस्टेट के विकास और रोग पर टेस्टोस्टेरोन के प्रभावों के अध्ययन के लिए आवश्यक है। इस प्रोटोकॉल त्वरित (एक अनुभवी उपयोगकर्ता के लिए सर्जरी की खासियत के बारे में समय 5 मिनट है) और (चित्रा 3) प्रचलन से टेस्टोस्टेरोन का लगभग 100% हटा। ध्यान से, चूहों में टेस्टोस्टेरोन का स्तर काफी अलग है, और माउस 10 के रूप में ज्यादा के रूप में माउस से 30 गुना से भिन्न हो सकते हैं। बधिया इस बदलाव को हटा। बधिया के बाद, शोधकर्ताओं टेस्टोस्टेरोन जोड़ने की पीठ में प्रोस्टेट (- 4 आंकड़े 3) को पुनर्जीवित करने का फैसला कर सकता है। इस तरह के एक आसमाटिक पंप, एक टेस्टोस्टेरोन के रूप में subcutaneously टेस्टोस्टेरोन का एक स्रोत दाखिल करके किया जा सकतागोली, या एक अर्द्ध पारगम्य Silastic टेस्टोस्टेरोन पाउडर 8 युक्त ट्यूब। टेस्टोस्टेरोन जोड़ा की मात्रा पर निर्भर करता है, इस प्रक्रिया के संचलन (चित्रा 3) में टेस्टोस्टेरोन का स्तर superphysiological के लिए शारीरिक प्रदान कर सकते हैं। इस प्रोटोकॉल भी प्रोस्टेट सेल वंश का अध्ययन करने और कोशिका जीव विज्ञान 11 स्टेम करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। एक अन्य विकल्प रासायनिक बधिया, या एण्ड्रोजन अभाव चिकित्सा, यौगिकों, ऐसे dutasteride 12 के रूप में है कि टेस्टोस्टेरोन का उत्पादन रोकना साथ चूहों के इलाज के जरिए होता है। यह भी प्रोस्टेट कैंसर रोगियों, जो शायद ही कभी शल्य चिकित्सा बधिया कर रहे हैं की एक सामान्य उपचार mimics। हालांकि, शल्य बधिया लगभग सभी टेस्टोस्टेरोन को हटाने के लिए एक विश्वसनीय, स्थायी तरीका प्रदान करता है। यह विचार करना है कि अधिवृक्क ग्रंथि भी इस तरह के androstenedione और dehydroepiandrosterone, जो टेस्टोस्टेरोन में परिवर्तित किया जा सकता के रूप में एण्ड्रोजन प्रजातियों, वृषण के सापेक्ष में बहुत छोटी मात्रा, synthesize हालांकि महत्वपूर्ण है13। कुछ मामलों में, अधिवृक्क ग्रंथि भी शल्य चिकित्सा द्वारा हटाया जा सकता है, हालांकि इस प्रक्रिया को और अधिक मुश्किल है।
कुल मिलाकर, इन दो प्रोटोकॉल प्रोस्टेट रोगों में अनुसंधान के एक बहुत बड़ी संख्या है, साथ ही हार्मोनल अध्ययन के लिए उपयोगी होते हैं। इन प्रोटोकॉल hormonally, सामान्य बधिया, या hormonally पुनर्जीवित की स्थिति में प्रोस्टेट जीव विज्ञान का विश्लेषण करने के लिए एक विश्वसनीय और सुसंगत तरीके से कर रहे हैं।
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Disclosures
लेखकों घोषणा की कि वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि।
Acknowledgments
इस पांडुलिपि में आंकड़े से कुछ उदारता बार्ट ओ विलियम्स की प्रयोगशाला द्वारा प्रदान किया गया। लेखकों अनुदान राष्ट्रीय कैंसर संस्थान द्वारा समर्थित हैं U54CA143803, CA163124, CA093900, और CA143055।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical tools | Roboz | Various | |
| Formaldehyde | Sigma | F8775 | |
| OCT medium | VWR | 25608-930 | Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80 °C |
| PBS | Life Technologies | 10010 | |
| Isoflurane | Johns Hopkins | Also available from vendors online | |
| Cautery Pen | Medline | ESCT002 | |
| Silk suture | AD Surgical | M-S330R19 | |
| Surgical Wound Clips | Roboz | RS-9265 |
References
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