Name: Un modelo de Disturbed inducida por el flujo de Aterosclerosis en la arteria carótida del ratón por la ligadura parcial y un método sencillo para el aislamiento de ARN del endotelio carótida (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-22T17:30:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: Aprende a realizar la ligadura parcial de la carótida en ratones para inducir flujo alterado y desarrollar aterosclerosis rápidamente. Este método incluye verificación por ultrasonido y aislamiento de ARN endotelial de alta pureza.

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Este trabajo fue apoyado por la financiación de los NIH subvenciones HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) y un proyecto de clase mundial de la Universidad (HJ) del Ministerio de Ciencia, Tecnología y Educación de Corea del Sur.

1. La ligadura parcial de la arteria carótida izquierda <ol><li> Los ratones son utilizados en ~ 8 semanas de edad. El peso de los ratones se recomienda tener al menos 18 gramos. </li><li> Esterilizar los instrumentos durante 30 segundos en el esterilizador de instrumentos de cuentas y deje que se enfríe </li><li> Inducir la anestesia con ketamina (80mg/kg) y xilazina (10mg/kg) anestesia intraperitoneal (ip) o una alternativa aprobada por IACUC. Para la inyección ip, inyectar ratón en el cuadrante inferior izquierda del abdomen. </li><li> Coloque el ratón en una cámara de calentamiento hasta que esté completamente anestesiado. Verificar la profundidad de la anestesia con la respuesta a una pizca dedo del pie. </li><li> Lugar del ratón en una etapa quirúrgica, en posición supina (boca arriba vientre lado) posición. Tape las patas delanteras, las palmas hacia arriba y la única patas traseras hasta el escenario. </li><li> Aplicar generosa cantidad de agente depilatorio (por ejemplo, Nair) en el cuello entre la mandíbula y el esternón. Masajear suavemente hasta que todo el pelo se elimina. </li><li> Limpie el agente depilatorio y aplicar generosa cantidad de Betadine al área depilada. </li><li> Prepare una pulgada de largo secciones de sutura de seda 6-0 para ligaduras. Cada ratón se necesitan dos piezas de sutura. </li><li> Utilizando unas tijeras pequeñas afilado, haga una incisión vertical 4-6mm en la parte media del cuello. La piel y la fascia subyacente necesita ser cortado. </li><li> Mueva la glándula parótida izquierda de la línea media hacia la izquierda y comenzar la disección sin rodeos apenas a la derecha de la tráquea. Usted debe ser capaz de identificar la palpitante arteria carótida común izquierda con facilidad. </li><li> Siga la arteria carótida común caudalmente hasta encontrar la bifurcación. </li><li> Sin rodeos disecar la bifurcación para exponer los siguientes cuatro ramas distales de la arteria carótida común izquierda: arteria carótida externa, arteria carótida interna, arteria occipital y la arteria tiroidea superior. Estos vasos, tiroides, especialmente superior, puede ser frágil. Tenga mucho cuidado con su disección. </li><li> Ligar la carótida externa por encima de la tiroidea superior con sutura de seda 6-0. Para ello, pase una pinza por debajo de la arteria y agarrar un pedazo de sutura precortados con la ayuda de su pinza de otros. Tire suavemente de la sutura que pasan por debajo de la arteria. Ate firmemente evitando cualquier tejido circundante está atrapado en el nudo. Si te atan por debajo del despegue de la arteria tiroidea superior, al final del procedimiento de que efectivamente se ha realizado una ligadura completa que es un modelo muy diferente. </li><li> Ligar las arterias carótidas internas y occipital, con un nudo con la misma técnica. </li><li> Verificar la posición de las suturas y la permeabilidad de la arteria tiroidea superior. </li><li> Aproximado de la piel y la piel cerca usando una pequeña cantidad de tejido-Mend. </li><li> Los ratones en una cámara de calentamiento hasta la recuperación. Recuperación por lo general tarda de 30 a 60 minutos. </li><li> Una sola dosis de buprenorfina (0.1mg/kg) debe administrarse inmediatamente después de la cirugía si la anestesia que se utiliza no proporciona alivio del dolor prolongado (es decir, inhalación isoflurano) o si el animal está en peligro en las primeras 24 horas. En nuestra experiencia, la dosis de ketamina para anestesia administrada proporciona una analgesia suficiente cuando la cirugía se lleva a cabo por un cirujano experimentado y no se necesita más analgesia. </li></ol> 2. Ecografía carotídea <ol><li> Para validar si la ligadura parcial inducida perturbado el flujo, el flujo de la carótida debe examinar un día después de la ligadura </li><li> Inducir la anestesia con isoflurano - Caja de inducción de la anestesia podría ser utilizado si es necesario </li><li> Lugar ratones anestesiados en el escenario de imágenes, lado boca arriba </li><li> Los brazos y las piernas para cinta ECG sensor de imagen en el escenario </li><li> Defoliar cuello mediante la aplicación liberal de Nair (este paso sólo es necesario si no lo ha hecho para el procedimiento de ligadura) </li><li> Inserte el termómetro rectal para registrar la temperatura </li><li> Aplicar gel eco en el cuello </li><li> Inicio en modo-B. </li><li> Plano de la imagen debe ser de 90 grados (el mando de la sonda debe estar orientada hacia la nariz del ratón) </li><li> Inferior de la sonda en el cuello del ratón hasta que la imagen se obtiene. </li><li> Manipular la izquierda del escenario y la derecha hasta la tráquea (en la línea media la estructura) se identifica </li><li> Identificar la arteria carótida común </li><li> Etapa de formación de imágenes de inclinación de manera que un ángulo se crea entre el plano de la imagen y la carótida. Cuanto mayor sea este ángulo, mayor será la señal Doppler se. </li><li> Coloque la onda de pulso Doppler en medio de la carótida común izquierda. </li><li> Utilizar la corrección de ángulo según sea necesario. </li><li> Repetir las mediciones en la carótida común derecha. </li><li> El éxito de la ligadura de la carótida parcial resultará en una reducción general en el flujo (~ 80-90%) en la arteria carótida común izquierda en comparación con el lado derecho, con inversión del flujo de entrada hacia la aorta durante la diástole. </li><li> Una vez que las imágenes se han obtenido satisfactoria, apague la anestesia, limpie echo gel de los ratones y los ratones libres de resolución de la cintatraints. Coloque los ratones en una cámara de recuperación caliente. </li></ol> 3. La íntima de la carótida de aislamiento de ARN <ol><li> Sacrificio de los ratones por inhalación de CO 2 de acuerdo con el protocolo institucional IACUC </li><li> Tape las patas de una toalla de papel. </li><li> Cortar la piel del ratón desde el abdomen hasta la parte superior del tórax. </li><li> Abrir la pared abdominal por debajo de la caja torácica con un par de tijeras afiladas. </li><li> Levantar el esternón con una pinza y corta el diafragma, y ​​luego cortar la caja torácica para exponer el corazón. </li><li> Corte de la vena cava con unas tijeras. </li><li> La presión de perfusión (120 mmHg) de 2 a 3 minutos con solución salina normal contiene 10 unidades / mL de heparina a través del ventrículo izquierdo hasta que los pulmones y el hígado se vuelven pálidos. </li><li> Cortar la piel del cuello y retirar toda la grasa, los músculos y tejidos conectivos hasta las arterias carótidas están expuestos. </li><li> Coloque el ratón bajo un microscopio de disección. </li><li> Haga un agujero justo debajo de los sitios de ligadura de la arteria carótida izquierda para la segunda perfusión. </li><li> La presión de perfusión de nuevo ~ 1 minuto con solución salina normal contiene 10 unidades / mL de heparina a través del ventrículo izquierdo, asegurándose de la carótida izquierda y examinaba. </li><li> Utilizando una pinza de punta fina y tijeras pequeñas de primavera, retire con cuidado los tejidos peri-adventicia que rodea la carótida. Tenga cuidado de no apretar o estirar las carótidas durante este proceso de limpieza. </li><li> Corte de la arteria carótida izquierda entre el arco aórtico y los puntos de ligadura por encima de la bifurcación de la carótida. </li><li> Corte de la arteria carótida derecha entre el punto de arteria subclavia derecha y la ramificación de la bifurcación de la carótida. </li><li> Transferencia de las carótidas con un plato mm cultura 35, que contienen agua helada HBSS. Si es necesario, retire con cuidado cualquier resto de tejido peri-adventicia. </li><li> Prepare una jeringa de insulina (3 / 10 ml jeringa) con una aguja 29G, llenando con 150 l buffer de lisis QIAsol (Qiagen) por cada carótida. </li><li> Con cuidado, inserte la punta de la aguja en un extremo de la arteria carótida. </li><li> Mientras mantiene la carótida y la punta de la aguja con una pinza, de forma rápida (~ 1 segundo) a ras de la solución amortiguadora de lisis QIAsol (150 l) en un tubo de 1.5 ml (eluido íntima). </li><li> Enjuague los restos de la carótida (los medios de comunicación + adventicia) de vez en HBSS, lo puso en un tubo de 1.5 ml, y el complemento congelación en nitrógeno líquido. </li><li> Eluido íntima y las sobras congeladas se utilizan para la íntima o medios de aislamiento + adventicia de ARN utilizando el miRNeasy Mini Kit (Qiagen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. </li></ol> 4. Los resultados representativos: Nos parcialmente ligado izquierdo del ratón arterias carótidas y ecografía se llevó a cabo un día después del procedimiento. Como se muestra en la Figura 1, la ligadura parcial de éxito se reduce la velocidad del flujo sanguíneo y el flujo se invierte (alteración del flujo) en la arteria carótida común izquierda durante la diástole. La ligadura parcial de la ApoE knockout (KO) ratones acompañado de una dieta rica en grasas induce la aterosclerosis robusta en la arteria carótida común (LCA), pero no en la carótida derecha contralateral, en dos semanas (Figura 2). ARN recogido de la íntima carotídea contiene genes marcadores endoteliales como PECAM-1, mientras que sin medial del músculo liso genes marcadores de células tales como SMA (Figura 3). <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1: Esquema de la anatomía de la carótida y la ligadura: Tres ramas de la arteria carótida común (LCA) [arteria carótida externa (ACE), la arteria carótida interna (ICA), y la arteria occipital (OA)] se ligaron, dejando la arteria tiroidea superior (STA) abierto. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: Las imágenes de ultrasonido muestran los perfiles de velocidad del flujo y revelan que la ligadura parcial provoca la inversión del flujo (indicado por las flechas) en el LCA durante la diástole. Flujo de RCA se mantiene sin cambios después de la ligadura. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3: ligadura parcial y la dieta rica en grasas induce rápidamente la aterosclerosis en la ECV de ApoE ratones ApoE KO ratones KO se ligaron parcial y alimentados con la dieta alta en grasa de 1 a 3 semanas.. Las secciones congeladas de LCA fueron teñidos con aceite rojo-O. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Método de la íntima preparación de ARN. Íntima y media de ARN + adventicia (m + a) ARN se obtuvieron a partir de farsa que funciona con RCA y CLP en ratones C57BL / 6. ARN se analizaron semi-cuantitativos de RT-PCR (A) y qPCR (B, C) ​​de PECAM-1 y α-SMA con 18 años como un control interno. Los gráficos de barras son la media ± SEM, n = 3.

<ol><li>Korshunov, V. A., Berk, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-induced+vascular+remodeling+in+the+mouse%3A+a+model+for+carotid+intima-media+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).</li>
<li>Sullivan, C. J., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-dependent+remodeling+in+the+carotid+artery+of+fibroblast+growth+factor-2+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).</li>
<li>Nam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+carotid+ligation+is+a+model+of+acutely+induced+disturbed+flow%2C+leading+to+rapid+endothelial+dysfunction+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).</li>
</ol>

En este procedimiento, la identificación adecuada de todas las ramas de la carótida común, incluyendo la carótida externa, la carótida interna, arteria occipital y la arteria tiroidea superior es esencial. También es importante verificar el patrón de flujo con ultrasonido como se ha demostrado. En nuestras manos experimentadas, nuestra tasa de éxito de las cirugías de ligadura parcial basado en los estudios de ultrasonido de más de 500 ratones es superior al 90%. De la carótida íntima preparaciones de ARN, es importante...

<table><tbody><tr><td>Solución salina normal (cloruro de sodio al 0,9 %)</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>2B1323</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de insulina (jeringa de 3/10 ml, 29 g)</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881600145</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Cellgro</td><td>21-023</td><td></td></tr><tr><td>Kit miRNeasy mini (incluyendo QIAzol)</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de microimagen de alta resolución Vevo 770</td><td>VisualSonics, inc.</td><td>a. Sistema Visualsonics 770 b. Etapa de imagen c. Sistema de riel integrado Vevo d. Cabezal de escaneo RMV para ratones</td><td>o sistema similar</td></tr><tr><td>Sutura de seda 6-0, estéril</td><td>Covidien</td><td>s-1172 c2</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras pequeñas</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5675</td><td>o similar</td></tr><tr><td>Pinzas de disección</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5005</td><td>o similar</td></tr><tr><td>Tissue Mend II</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-856-7946</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo de disturbed inducida por el flujo de aterosclerosis en la arteria carótida del ratón por la ligadura parcial y un método sencillo para el aislamiento de arn del endotelio carótida

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

A pesar de la estrecha asociación conocida, evidencia la vinculación directa alteración del flujo de la aterogénesis ha estado ausente. Recientemente, hemos utilizado una versión modificada de la carótida métodos de ligadura parcial [1,2] para demostrar que forma aguda induce condiciones de flujo bajo y oscilante, dos características fundamentales de la alteración del flujo, en el ratón de la arteria carótida común. El uso de este modelo, hemos proporcionado evidencia directa de que el flujo alterado de hecho conduce a un desarrollo rápido y robusto aterosclerosis en ratones apolipoproteína E nocaut [3]. También hemos desarrollado un método de preparación de ARN endoteliales de alta pureza a partir de la íntima carotídea ratón [3]. El uso de este modelo de ratón y el método, se encontró que la ligadura parcial provoca la disfunción endotelial en una semana, seguido por la formación de ateroma robusto y rápido de dos semanas en un modelo de ratón hiperlipidémicos junto con las características de la formación de lesiones complejas, como la neovascularización intraplaca por cuatro semanas. Esta rápida<em&gt; In vivo</emModelo&gt; y el endotelio método de preparación de ARN podría ser utilizado para determinar los mecanismos moleculares subyacentes de flujo dependen de la regulación de la biología y las enfermedades vasculares. Además, podría ser utilizado para poner a prueba diversas intervenciones terapéuticas dirigidas a la disfunción endotelial y aterosclerosis en la duración del estudio reducido considerablemente.

Esto describe una cirugía de ligadura de la carótida parcial, lo que provoca trastornos condiciones de flujo y posterior desarrollo de la aterosclerosis (en dos semanas) con intraplaca neovascularización (en cuatro semanas) en el ratón de la arteria carótida común. También describe un nuevo método de aislamiento de ARN de la carótida íntima, proporcionando ARN de alta pureza endoteliales.

Un modelo de Disturbed inducida por el flujo de Aterosclerosis en la arteria carótida del ratón por la ligadura parcial y un método sencillo para el aislamiento de ARN del endotelio carótida

A pesar de la conocida y estrecha asociación, ha faltado evidencia directa que vincule el flujo perturbado con la aterogénesis. Recientemente, hemos utilizado un ...

Este video demuestra una cirugía de ligadura parcial de la carótida en la que se ligan la arteria carótida externa, la arteria carótida interna y la arteria occipital en un ratón anestesiado para inducir condiciones de flujo alterado y el consiguiente desarrollo rápido de aterosclerosis. El éxito de la cirugía se verifica mediante ultrasonido; luego, se extraen las carótidas ligadas y controladas del ratón sacrificado y se obtiene ARN endotelial de alta pureza. Hola, me llamo Doug Na, del laboratorio del doctor Jo en el Departamento de Ingeniería Biomédica y la División de Cardiología del Instituto de Tecnología de Georgia y la Universidad Emory.Hola, mi nombre es Amir Revan. También del Laboratorio JO. Voy a demostrar la verificación por ultrasonido de la ligadura, y yo soy CHI, también del laboratorio de la mandíbula.Mostraré hoy la preparación interna de ARN. Les presentaremos un procedimiento para la ligadura parcial de la carótida, ecografía, verificación de la ligadura y un método para el aislamiento de ARN íntimo. Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para estudiar los efectos del estrés cortante en la aterosclerosis.Así que comencemos. Antes de iniciar este procedimiento, verifique la profundidad de la anestesia inducida por ketamina y xilacina en un ratón de ocho semanas mediante la compresión del dedo del pie. Coloque al ratón sobre una plataforma quirúrgica en posición supina y sujete las cuatro patas a la plataforma, con las palmas hacia arriba.Luego sujete las patas traseras con cinta adhesiva, con las plantas hacia abajo. Utilice una gasa como cojín para el cuello del ratón. A continuación, aplique una cantidad generosa de agente depilatorio en el cuello del animal, entre la mandíbula y el esternón.Masajee suavemente la zona hasta que se haya eliminado todo el vello. Con un aplicador de algodón, retire el agente depilatorio. A continuación, aplique una cantidad generosa de Betadine utilizando un par pequeño de tijeras afiladas.Realice una incisión vertical de cuatro a seis milímetros en el centro del cuello del animal, cortando tanto la piel como la fascia subyacente. Utilizando fórceps de disección, mueva suavemente la glándula carótida izquierda desde la línea media hacia el lado izquierdo del animal. Diseccione el tejido por separación romo utilizando fórceps de disección.Para revelar la carótida común pulsátil. Siga la carótida común cuidadosamente. Para localizar la bifurcación.Disecar cuidadosamente la bifurcación para exponer lo siguiente: cuatro ramas distales de la arteria carótida común izquierda, la arteria carótida externa, la arteria carótida interna, la arteria occipital y la arteria tiroidea superior. Estos vasos, especialmente la arteria tiroidea superior, pueden ser muy frágiles.Pase un par de pinzas por debajo de la carótida externa por encima de la arteria tiroidea superior y tome un trozo de hilo de seda 6-0 de aproximadamente una pulgada de largo de otro par de pinzas. Tire suavemente del hilo para pasarlo por debajo de la arteria. Ligue firmemente la carótida externa evitando cualquier tejido circundante.Utilizando la misma técnica, ligue la arteria carótida interna y las arterias occipitales con un solo nudo. Después de verificar la posición de las suturas y la permeabilidad de la arteria tiroidea superior mediante inspección visual, reposicione la glándula parótida, aproxime la piel y utilice pinzas de disección para cerrar la piel. Tras el procedimiento quirúrgico, coloque el ratón en una cámara de calentamiento hasta que se recupere.Típicamente de 30 a 60 minutos. Luego, los ratones pueden trasladarse a su área habitual de alojamiento. Coloque algo de alimento en el fondo de la jaula, ya que los ratones podrían sentirse incómodos al intentar alcanzar el alimento por encima durante el primer día.Se debe administrar una dosis única de buprenorfina al día siguiente para aliviar el dolor. Un día después de la ligadura. Prepare el animal anestesiado con isoflurano para la ecografía colocándolo sobre la plataforma de imagen con el vientre hacia arriba.Sujete los brazos y las piernas al sensor de ECG con cinta adhesiva. Aplique gel ecográfico en el cuello del animal. La temperatura corporal del animal debe monitorearse durante todo el procedimiento.Encienda la computadora y el software de imagen. Seleccione el usuario y la sonda de eco adecuados. Configure el ultrasonido en modo bee.Luego, con el botón de la sonda orientado hacia la nariz del ratón, baje la sonda sobre el cuello del ratón hasta obtener una imagen. Manipule la plataforma de la sonda hacia la derecha y hacia la izquierda hasta poder identificar la tráquea. A continuación, localice la arteria carótida común izquierda e incline la plataforma de imagen para crear un ángulo entre el plano de imagen y la carótida.Cambie el ultrasonido del modo B al doppler de onda de pulso manteniendo la sonda en el centro de la arteria carótida común izquierda. Utilice el mando de corrección del ángulo para ajustar el ángulo de manera que la línea de corrección del ángulo sea paralela a la arteria carótida común. Tome una imagen presionando el botón de almacenamiento de cuadros.Se documentará el perfil de velocidad de la sangre en la carótida común. Se espera una inversión del perfil de velocidad durante la diástole. Repita los pasos anteriores en la carótida común derecha para comparación.La velocidad será mayor y no se observará inversión en la carótida común derecha. Una vez que se hayan obtenido imágenes satisfactorias, apague la anestesia y limpie el gel ecográfico del ratón. Libere al ratón de las sujeciones de cinta.Coloque el animal en una cámara de recuperación calentada. La recuperación del isoflurano inhalado generalmente ocurre en menos de cinco minutos. Fije con cinta el cuerpo de un ratón eutanasiado con dióxido de carbono a una toalla de papel utilizando tijeras.Corte la piel del ratón desde el abdomen hasta la parte superior del tórax. Luego, utilizando un par de tijeras afiladas, abra la pared abdominal por debajo de la caja torácica usando fórceps. Levante el esternón y corte el diafragma.Retire la caja torácica para exponer el corazón. A continuación, corte la vena de la CVA y, utilizando un kit de perfusión con aguja mariposa, realice una perfusión por presión durante dos o tres minutos con solución salina normal que contenga 10 unidades por mililitro de heparina a través del ventrículo izquierdo, hasta que los pulmones y el hígado se vuelvan pálidos. Después de la perfusión con solución salina, corte la piel del cuello y retire toda la grasa, los músculos y los tejidos conectivos hasta exponer las arterias carótidas.Ahora coloque el ratón bajo un microscopio estereoscópico y haga un orificio puntual con una aguja de calibre 29 justo debajo de los sitios de ligadura en la carótida izquierda para la segunda perfusión. Vuelva a perfundir por presión durante aproximadamente un minuto a través del ventrículo izquierdo, asegurándose de que la carótida izquierda quede bien perfundida tras la segunda perfusión. Utilice pinzas de punta fina y tijeras pequeñas de resorte para retirar cuidadosamente los tejidos periadventiciales que rodean las carótidas.Tenga cuidado de no comprimir ni estirar las carótidas durante este paso de limpieza entre el arco aórtico y los puntos de ligadura por encima de la bifurcación carotídea. Corte la arteria carótida izquierda entre el punto de bifurcación de la arteria subclavia derecha y la bifurcación carotídea. Corte la arteria carótida derecha.Transfiera las carótidas a una placa de cultivo de 35 milímetros que contenga HBSS frío con hielo. Retire cuidadosamente cualquier tejido periadventicial residual. Introduzca una jeringa de insulina con una aguja de calibre 29 en uno de los extremos de una carótida y sostenga la carótida y la punta de la aguja con pinzas.Rápidamente y con cuidado. Lave cada carótida con 150 microlitros de tampón de lisis cazo, recolectando el tampón en un tubo de 1,5 mililitros etiquetado como intima eit. Finalmente, enjuague cada carótida una vez con HBSS.Luego colóquelo en un tubo microcentrífugo de 1,5 mililitros etiquetado como medio más adventicia y corte. Congélelo en nitrógeno líquido. El ARN puede extraerse entonces de las muestras congeladas utilizando gin's.Kit mini Micro RZ. Se realizó un examen por ultrasonido en un ratón un día después de la ligadura parcial de la arteria carótida izquierda, como se muestra en esta figura. Una ligadura parcial exitosa reduce la velocidad del flujo sanguíneo e invierte el flujo en la arteria carótida común izquierda durante la diástole. La ligadura parcial de ratones knockout para APOE sometidos a una dieta alta en grasas induce una aterosclerosis marcada en la arteria carótida común izquierda, pero no en la carótida derecha contralateral, en dos semanas. La aterosclerosis se muestra mediante tinción con rojo de aceite para lípidos y contratiñido con hematoxilina para los núcleos.El ARN recolectado de la íntima carotídea contiene genes marcadores endoteliales como pcam, junto con un marcador de células musculares lisas mediales. Genes como alfa SMA están ausentes en el ARN obtenido del resto de la arteria, marcado como M+A (media más adventicia); el marcador de músculo liso está presente, mientras que el marcador endotelial está ausente. Acabamos de mostrarle cómo realizar una ligadura parcial de la carótida.Utilice ultrasonido para verificar la ligadura y también como un método para el aislamiento de ARN íntimo. Al realizar este procedimiento, es esencial identificar correctamente las ramas de la arteria tiroidea común y asegurarse de que la arteria tiroidea superior conserve su patrón, mientras que las demás ramas se liguen firmemente. Es importante verificar el resultado de la ligadura mediante ultrasonido durante el procedimiento. En una preparación sencilla, preste atención para que el iLet lavado no entre en contacto con ninguna otra parte de la arteria excepto con la luz. Dicho esto, gracias por vernos y buena suerte con sus experimentos.

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El manguito de constricción se presenta en este artículo está diseñado para inducir a la aterosclerosis en la arteria carótida común murino. Debido a la forma cónica de su luz interior del manguito implantado genera regiones bien definidas de baja tensión, alta cizalla oscilatoria y activar el desarrollo de lesiones ateroscleróticas de los diferentes fenotipos inflamatorios.

Implantación de un manguito de la carótida para provocar esfuerzo cortante aterosclerosis inducida en ratones

Se describe un modelo de implantación de un stent en la arteria carótida del ratón. En comparación con otros métodos similares, este procedimiento es muy rápido, simple y accesible, que ofrece la posibilidad de estudiar de una manera conveniente la reacción de la pared vascular a diferentes stents liberadores de fármacos y los mecanismos moleculares de la restenosis.

Un modelo murino de la implantación de un stent en la arteria carótida para el Estudio de la reestenosis

Describimos una técnica quirúrgica que produce una lesión con alambre en la arteria femoral de ratones para inducir hiperplasia neointimal para servir como sistema de prueba modelo para la administración perivascular de compuestos terapéuticos para la inhibición de la reestenosis.

Modelo murino de la arteria femoral Lesiones Alambre con implantación de un perivascular Drug Delivery Patch

Este estudio describe un procedimiento invasivo para la inducción de la aterosclerosis acelerada en ratones. En comparación con otros métodos que utilizan lesiones inducidas por electricidad o crio, la lesión inducida por la mecánica imita la condición humana de la restenosis después de las terapias de revascularización y es ideal para el estudio de los mecanismos moleculares involucrados.

Inducción de la Aterosclerosis Acelerada en Ratones: El Modelo de "Lesiones por Alambre"

La comprensión de los mecanismos celulares y moleculares de la re-endotelización después de una lesión arterial denudación es de suma importancia en la prevención de la trombosis y la reestenosis de las arterias. Aquí se describe un protocolo para la denudación lesiones arteriales reproducible de la aorta abdominal infrarrenal. El procedimiento fue desarrollado para investigar los mecanismos subyacentes que regulan la regeneración endotelial utilizando modelos de ratón.

Reproducible lesión arterial Denudación por pinzamiento aórtico abdominal infrarrenal en un modelo murino

Presentamos un método para aislar células endoteliales y núcleos de la luz de arterias carótidas de ratón expuestas a condiciones de flujo estables o alteradas para realizar experimentos ómicos unicelulares.

Aislamiento de células endoteliales de la luz de arterias carótidas de ratón para experimentos multiómicos unicelulares

El presente protocolo describe una nueva técnica de banda aórtica en ratones para inducir hipertrofia cardíaca por sobrecarga de presión. Para el enfajado, se utiliza un anillo de goma con un diámetro interior fijo. Esta nueva técnica promete menos varianza y datos más reproducibles para futuros experimentos.

Banda aórtica con junta tórica versus constricción aórtica transversal tradicional para el modelado de la hipertrofia cardíaca inducida por sobrecarga de presión

Aquí describimos un protocolo de digestión celular de dos pasos para preparar una suspensión unicelular de las arterias carótidas de ratón.

Preparación de una suspensión unicelular de arterias carótidas de ratón para la secuenciación de células individuales

El presente protocolo describe un método quirúrgico estandarizado para la inducción de aneurismas carotídeos en un modelo murino a través de una sola operación quirúrgica.

Un modelo murino de formación de aneurismas carotídeos

Este estudio tiene como objetivo desarrollar un método eficaz para lograr la hemostasia en las arterias del ratón.

Procedimiento sencillo y eficaz para la hemostasis en arterias de ratón

Aprende a realizar la ligadura parcial de la carótida en ratones para inducir flujo alterado y desarrollar aterosclerosis rápidamente. Este método incluye verificación por ultrasonido y aislamiento de ARN endotelial de alta pureza.

Un modelo de Disturbed inducida por el flujo de Aterosclerosis en la arteria carótida del ratón por la ligadura parcial y un método sencillo para el aislamiento de ARN del endotelio carótida (Video) | JoVE Journal

Un modelo de Disturbed inducida por el flujo de Aterosclerosis en la arteria carótida del ratón por la ligadura parcial y un método sencillo para el aislamiento de ARN del endotelio carótida

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