Generación de esferoides a partir de líneas celulares: un método de cultivo celular tridimensional (3D)

Haga crecer la línea celular deseada como una monocapa 2D adherente. Retire el medio de cultivo y lávese con solución salina tamponada con fosfato o PBS. A continuación, se añade la tripsina y se incuba mientras las células se desprenden de la superficie del matraz y adquieren forma redonda. Agregue medios nuevos para neutralizar la tripsina y suspender las células. Transfiera la mezcla a un tubo cónico y use una centrífuga para granular las celdas.

Reemplace el sobrenadante con medios nuevos y vuelva a suspender el pellet de la célula. Use un hemocitómetro para contar el número de células y calcular una concentración de trabajo. Luego, transfiera la cantidad correcta de mezcla celular a una placa de pocillos de adherencia ultra baja de fondo redondo e incube. Las células se depositan en el fondo y se agregan. En última instancia, se unirán entre sí y formarán un conjunto compacto de celdas 3D, el esferoide.

En el protocolo de ejemplo, veremos cómo generar esferoides 3D a partir de una línea celular de cáncer de colon y cómo se aplican imágenes en vivo para rastrear su formación. Comience lavando la línea celular de cáncer colorrectal de interés con cinco mililitros de PBS y retire l