0 visualizaciones • 2:52 min. • April 30th, 2023
- Comience con un tanque de apareamiento, un tanque con un inserto extraíble que permite que los huevos caigan. Agregue dos peces adultos machos y tres hembras a un tanque de apareamiento dividido por la noche antes de la recolección de embriones para aclimatarse entre sí durante la noche.
A la mañana siguiente, transfiera los peces a un nuevo tanque de apareamiento que contenga agua del sistema y retire el divisor. Espere de 15 a 30 minutos para que los peces tengan tiempo de aparearse y desovar.
Ahora recoge los embriones y guárdalos en una placa de Petri que contenga el medio embrionario de Hank. Cultívalos a 28,5 grados centígrados durante todo el protocolo. Examina la morfología de los embriones bajo un microscopio de disección.
Observará varias características del desarrollo. La escisión del blastodisco da lugar a múltiples células. El blastodermo toma la forma de una copa invertida sobre la célula vitelita. Los segmentos del mesodermo paraxial se desarrollan en la parte dorsal del embrión y así sucesivamente.
Más allá de las 24 horas posteriores a la fertilización, simplemente clasifique los embriones por la longitud total del cuerpo. En el protocolo de ejemplo, configuraremos el apareamiento de peces reporteros mCherry transgénicos y clasificaremos los embriones resultantes.
- Para empezar, cultivar embriones hasta los tres meses de edad, que es la madurez reproductiva. Separe dos peces machos adultos y tres hembras de la cepa deseada en tanques de apareamiento divididos de agua dulce del sistema la noche anterior a la recolección de embriones. A la mañana siguiente, después de que se enciendan las luces, retire el divisor y permita que los peces se apareen naturalmente hasta que se observen embriones en el fondo del tanque.
Recoja los embriones en intervalos de 30 minutos y separe las placas de Petri del medio embrionario hasta que se recoja el número deseado. Para estadificar los embriones, cultícelos en grupos de 50 a 75 por placa de Petri de 10 centímetros para promover un tiempo de desarrollo constante de todos los embriones. Luego mantenga las placas a 28,5 grados centígrados.
Mida la edad del embrión utilizando el número de somitas después de la segmentación hasta aproximadamente 24 horas después de la fertilización, o HPF, y separe los embriones en función de la edad de desarrollo.