JoVE Encyclopedia of Experiments
Biología
0 vistas • 2:52 min • April 30th, 2023
- Comience con un tanque de apareamiento, un tanque con un inserto extraíble que permite que los huevos caigan. Agregue dos peces adultos machos y tres hembras a un tanque de apareamiento dividido por la noche antes de la recolección de embriones para aclimatarse entre sí durante la noche.
A la mañana siguiente, transfiera los peces a un nuevo tanque de apareamiento que contenga agua del sistema y retire el divisor. Espere de 15 a 30 minutos para que los peces tengan tiempo de aparearse y desovar.
Ahora recoge los embriones y guárdalos en una placa de Petri que contenga el medio embrionario de Hank. Cultívalos a 28,5 grados centígrados durante todo el protocolo. Examina la morfología de los embriones bajo un microscopio de disección.
Observará varias características del desarrollo. La escisión del blastodisco da lugar a múltiples células. El blastodermo toma la forma de una copa invertida sobre la célula vitelita. Los segmentos del mesodermo paraxial se desarrollan en la parte dorsal del embrión y así sucesivamente.
Más allá de las 24 horas posteriores a la fertilización, simplemente clasifique los embriones por la longitud total del cuerpo. En el protocolo de ejemplo, configuraremos el apareamiento de peces reporteros mCherry transgénicos y clasificaremos los embriones resultantes.
- Para empezar, cultivar embriones hasta los tres meses de edad, que es la madurez reproductiva. Separe dos peces machos adultos y tres hembras de la cepa deseada en tanques de apareamiento divididos de agua dulce del sistema la noche anterior a la recolección de embriones. A la mañana siguiente, después de que se enciendan las luces, retire el divisor y permita que los peces se apareen naturalmente hasta que se observen embriones en el fondo del tanque.
Recoja los embriones en intervalos de 30 minutos y separe las placas de Petri del medio embrionario hasta que se recoja el número deseado. Para estadificar los embriones, cultícelos en grupos de 50 a 75 por placa de Petri de 10 centímetros para promover un tiempo de desarrollo constante de todos los embriones. Luego mantenga las placas a 28,5 grados centígrados.
Mida la edad del embrión utilizando el número de somitas después de la segmentación hasta aproximadamente 24 horas después de la fertilización, o HPF, y separe los embriones en función de la edad de desarrollo.
Este artículo describe un protocolo para el apareamiento y la recolección de embriones en peces, centrándose en las etapas de desarrollo de los embriones. Proporciona pasos detallados para aclimatar a los peces, recolectar embriones y examinar su morfología.
La generación precisa y la clasificación del desarrollo de embriones de pez cebra es fundamental para estudios en fase de descubrimiento que requieren material biológico sincronizado. Este protocolo permite el aislamiento confiable de embriones en estadios definidos, facilitando aplicaciones posteriores como el análisis de transgénicos y el perfilado cuantitativo de la expresión génica. La clasificación estandarizada de embriones mejora la confianza predictiva y la reproducibilidad en las líneas de investigación temprana y preclínica.
Este método se integra en la interfaz entre los trabajos iniciales de descubrimiento y los preclínicos, proporcionando embriones de alta calidad y coincidentes en etapa para análisis genéticos, moleculares y fenotípicos.
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Última actualización: 29 agosto 2026