寒天取り付け:長期イメージングのための生きたゼブラフィッシュ胚を取り付ける基本的な方法

-アガロースが完全に溶解するまでE3培地を低融点アガロースに加え、加熱し始める。アガロースを摂氏37度に冷却し、トリカイン溶液を加える。

移管ピペットを使用して、最小限の量の媒体で1つの胚を描き、ピペットを直立した位置に保持し、胚をバウンスしてピペットの先端に配置します。

プレートを顕微鏡の下に置き、ピペットチップを使用して胚を所望の方向に配置します。アガロースが固まったら、トリカインを含むE3培地を注ぎ、寒天を水分補給し、胚を画像化します。

融合胚の画像を取得するには、0.8%低融点アガロースを調製する。 まだ熱い間、アガロースの1ミリリットルを摂氏37度の加熱ブロックにセットした1.5ミリリットルのミクロフュージチューブにアリコートします。

次に、広い先端のプラスチック転写ピペットを使用して、 できるだけ少ない液体で胚を引き上げる。次にピペットを直立させ、ピペットの底に落ち着くように胚を穏やかに跳ね返す。アガロースの表面のピペット先端に軽く触って低融点アガロースの1ミリリットルのアリコートに胚を移す。

次に、ピペットで、アガロースと胚をガラス底6ウェルプレートのウェルに移します。 ステレオ顕微鏡の下で、からかい針の端に固定されたゲルローディングチップを使用して、胚をカバーガラスの近くに配置し、イメージングに必要な向きを決めた後、アガロースを設定し、トリカインを含む媒体をウェルに加えた後、反転広視野蛍光レーザー走査型レーザー走査焦点または回転ディスク共焦点顕微鏡を使用して画像を取得します。

全胚の視野では、4倍の主観を使用します。特定の組織を画像化するために20倍の目的を使用してください。