Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Comenzar añadiendo E3 punto de fusión medio a bajo agarose y calentar hasta que la agarose se disuelva por completo. Enfríe la agarose a 37 grados Celsius y agregue solución de tricarina.
Usando una pipeta de transferencia, dibuja un embrión con una cantidad mínima de medio. Sujete la pipeta en posición vertical y rebote el embrión para colocarla en la punta de la pipeta. Ahora coloca el embrión en la solución de agarose sin añadir ningún exceso de medio, lo que diluiría la agarose y evitaría el gelificamiento.
Coloque la placa bajo un microscopio y utilice una punta de pipeta para colocar el embrión en la orientación deseada. Una vez que la agarose se solidifique, vierta el medio E3 que contiene tricarina encima de él para mantener el agar hidratado e imagen del embrión.
Para adquirir imágenes de los embriones fusionados, prepare un 0,8% de punto de fusión bajo. Anestesiar los embriones parabióticos añadiendo 1 mililitro de 4 miligramos por mililitro pH 7.0 tricaina a los 25 mililitros del medio E3 que contiene los embriones.
A continuación, utilizando una pipeta de transferencia de plástico de punta ancha, elabore los embriones en el menor líquido posible. A continuación, gire la pipeta en posición vertical y rebote suavemente los embriones para que se asienten en el fondo de la pipeta.
Luego, con la pipeta, transfiera la agarose y los embriones al pozo de una placa de seis pozos inferior de vidrio. Bajo un microscopio estéreo, utilice una punta de carga de gel fijada al final de una aguja de burla para colocar los embriones cerca del vidrio de la cubierta y en la orientación deseada para la toma de imágenes. Después de que la agarose se haya establecido y medio con tricacina se haya añadido a los pozos, utilice un microscopio confocal confocal de escaneo láser de epifluorescencia de campo ancho invertido o microscopio confocal de disco giratorio para adquirir imágenes.
Para todo un campo de visión embrionario, utilice un subjetivo 4x. Utilice un objetivo de 20x para tomar imágenes de un tejido específico.
