Montaje en agar: un método básico de montaje de embriones vivos de pez cebra para la obtención de imágenes a largo plazo

- Comience agregando agarosa de punto de fusión medio a bajo E3 y calentando hasta que la agarosa se disuelva por completo. Enfríe la agarosa a 37 grados centígrados y agregue la solución de tricaína. A continuación, anestesiar los embriones añadiendo tricaína a una placa de Petri que contenga embriones en medio E3. Gira la placa de Petri para recoger los embriones en el medio.

Con una pipeta de transferencia, extraiga un embrión con una cantidad mínima de medio. Sostenga la pipeta en posición vertical y haga rebotar el embrión para colocarlo en la punta de la pipeta. Ahora coloque el embrión en la solución de agarosa sin agregar ningún exceso de medio, lo que diluiría la agarosa y evitaría la gelificación. Mezcle suavemente el embrión dentro de la agarosa y transfiera la solución al pocillo de una placa de imagen con la pipeta.

Coloque la placa bajo un microscopio y use una punta de pipeta para colocar el embrión en la orientación deseada. Una vez que la agarosa se solidifique, vierta el medio E3 que contiene tricaína encima para mantener el agar hidratado y obtener imágenes del embrión. En un protocolo de ejemplo, montaremos embriones de pez cebra parabióticos para obtener imágen