Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
En intraductal injektion er en teknik til at levere en injektion mix, der kan indeholde kræftceller, udtryk vektorer, eller et terapeutisk middel suppleret med en sporstof farvestof i kanaler i brystkirtlen.
Til denne procedure skal du indlæse en sprøjte med injektionsblandingen. Placer derefter en bedøvet mus ventral side op på en kirurgisk seng. Lav et snit på huden mellem inguinal eller femte par brystkirtler. Adskil forsigtigt hudflappen fra parietal peritoneum for at visualisere kanaltræet.
Brug pincet, løft brystvorten og skær forsigtigt sin udvendige del for at se kanalåbningen. Brug en pincet til at løfte hudflappens kant, og sæt forsigtigt sprøjtenålen ind i brystvorten for at levere injektionsblandingen. Overvåg sporstoffarvens bevægelse ind i brystkanaltræet. Farvestoffet spredes ud i kanaltræet uden at lække ind i stromaen, hvilket indikerer en vellykket injektion.
Vent et par sekunder for at undgå spild, og fjern derefter langsomt nålen fra injektionsstedet. Luk snittet med sårklemmen. I den følgende protokol, vil vi udføre intraductal injektion til at levere Cre udtrykke adenovirus i musen brystkirtlen.
Brug aseptiske teknikker under hele den kirurgiske procedure. Lav et snit sted på huden i en længde på cirka en centimeter mellem de to fjerde inguinal brystkirtler. Adskil forsigtigt hudflappen fra parietal peritoneum for at visualisere brystkanaltræet.
Hold forsigtigt brystvorten med urmagere tang til at fjerne den udvendige brystvorte uden at skære nogen nærliggende hud ved hjælp af en mikro-dissektion saks. Lad ca. tre til fem mikroliter Af Cre adenovirus injektion blanding i en 25 mikroliter Hamilton sprøjte med en 33 gauge metal hub nål fastgjort.
Estimer mængden af injektionsblandingen i sprøjten baseret på det blå farvestof, der indgår i blandingen. Hold forsigtigt kanten af hudflappen med en fin buet pincet og injicere Cre adenovirus injektion blandingen langsomt ind i brystvorten, mens overvågning af spredning af blå farvestof i brystkanalen træet. Hold injektionshastigheden så langsom som muligt for at undgå skader på kanallænderne.
En vellykket intraductal injektion indikeres af injicerede væsker, der spredes gennem hele kanaltræet uden at lække ind i det stromale rum. Træk forsigtigt nålen ud af brystvorten for at undgå lækage af den injicerede væske. Undersøg den distale side af brystkirtlen eller det omkringliggende område af den injicerede brystvorte.
Dye diffusing i den nærliggende stroma, som vist her, indikerer en bryst fedt pad injektion snarere end en vellykket intraductal injektion. Luk de kirurgiske sår og huden med sårklemmer.
Fjern musen fra anæstesi og læg den på en varmepude inde i et rent bur til genopretning. Overvåg udviklingen af brysttumoren som beskrevet i tekstprotokollen.
