Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
זריקה תוך-ורידית היא טכניקה של אספקת תערובת הזרקה שעשויה להכיל תאים סרטניים, וקטורים ביטוי, או סוכן טיפולי בתוספת צבע מעקב לתוך צינורות של בלוטת החלב.
עבור הליך זה, לטעון מזרק עם תערובת ההזרקה. לאחר מכן, הניחו צד גחוני של עכבר מורדם על מיטה כירורגית. הפוך חתך על העור בין זוג מפשעתי או החמישי של בלוטות החלב. בזהירות להפריד את דש העור מן הצפק הקודקודי כדי לדמיין את העץ צינורי.
באמצעות מלקחיים, להרים את הפטמה לחתוך בזהירות את החלק החיצוני שלה כדי להציג את פתח צינור. השתמש בפינצטה כדי להרים את קצה דש העור, בעדינות להכניס את מחט המזרק לתוך הפטמה כדי לספק את תערובת ההזרקה. לפקח על התנועה של צבע מעקב לתוך עץ צינורי mammary. הצבע מתפשט בעץ הצינורות מבלי לדלוף לתוך הסטרומה, מה שמצביע על זריקה מוצלחת.
המתן כמה שניות כדי למנוע שפיכה, ואז לאט להסיר את המחט מאתר ההזרקה. סגור את החתך עם קליפ הפצע. בפרוטוקול הבא, אנו נבצע הזרקה תוך-ורידית כדי לספק Cre הבעת אדנווירוס לתוך בלוטת החלב של העכבר.
השתמש בטכניקות אספטיות לאורך כל ההליך הכירורגי. הפוך אתר חתך על העור באורך של סנטימטר אחד בערך בין שתי בלוטות החלב המפשעה הרביעי. בזהירות להפריד את דש העור מן הצפק הקודקודי, כדי לדמיין את עץ צינור החלב.
החזק בזהירות את הפטמה עם מלקחיים שענים כדי להסיר את הפטמה החיצונית מבלי לחתוך את כל העור הסמוך באמצעות מספריים מיקרו-ניתוח. טען כשלושה עד חמישה מיקרוליטרים של תערובת הזרקת Cre adenovirus למזרק המילטון 25 מיקרוליטר עם מחט רכזת מתכת 33 מד מודבק.
להעריך את נפח תערובת ההזרקה במזרק בהתבסס על הצבע הכחול הכלול בתערובת. החזיקו בעדינות את קצה דש העור בפינצטה מעוגלת עדינה והזריקו לאט לאט את תערובת הזרקת ה-Cre adenovirus לתוך הפטמה תוך ניטור התפשטות הצבע הכחול לתוך עץ צינורי המימי. לשמור על קצב ההזרקה איטי ככל האפשר, כדי למנוע נזק לומן צינורית.
הזרקה תוך-ורידית מוצלחת מסומנת על ידי נוזלים מוזרקים המתפשטים לאורך כל עץ הצינורות מבלי לדלוף לתוך התא הסטרומה. בעדינות למשוך את המחט מן הפטמה, כדי למנוע דליפה של הנוזל מוזרק. בדוק את הצד הדיסטלי של בלוטת החלב או את האזור שמסביב של הפטמה מוזרק.
צבע מתפזר לתוך סטרומה הסמוכה, כפי שמוצג כאן, מציין הזרקת כרית שומן mammary ולא זריקה תוך-ורידית מוצלחת. סגור את הפצעים הכירורגיים ואת העור עם קליפים פצע.
מוציאים את העכבר מההרדמה ומניחים אותו על כרית חימום בתוך כלוב נקי להחלמה. לפקח על התפתחות הגידול mammary כמתואר בפרוטוקול הטקסט.
