Name: Expresión, la solubilización de detergente, y purificación de un transportador de membrana, la proteína de resistencia a múltiples fármacos MexB (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: Aprende a expresar, solubilizar y purificar la proteína de membrana MexB de Pseudomonas aeruginosa mediante métodos de ADN recombinante en E. coli. Este protocolo utiliza cromatografía de afinidad y filtración en gel para obtener complejos proteína-detergente solubles.

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Este proyecto fue apoyado por becas de CJJ de la Fundación Nacional de Ciencias y la Sociedad de Ciencias Biomolecular.

1. Día 1: MexB de Pseudomonas aeruginosa es codificada por pFB101. El gen se amplificó a partir MexB P. aeruginosa ADN genómico y se inserta en el NdeI y XhoI sitios de restricción del vector pET30b +. La construcción contiene una etiqueta hexahistidina C-terminal. <ol><li> El plásmido se utilizó para transformar E. coli cepa C43 (DE3) 12, y los transformantes se sembraron en agar LB que contenían 30 ug / ml de kanamicina. </li></ol> 2. Día 2: cultivos de una noche: <ol start="2"><li> Por la noche, 4 x 3 culturas LB ml que contienen 30 ug / ml kanamicina se inoculan de las colonias transformantes fresco. Por otra parte, los cultivos pueden ser inoculados a partir de una permanente congelado. Estas pequeñas culturas se cultivan en una montaña a 37 ° C durante la noche. </li></ol> 3. Día 3: Crecimiento 6 litros culturas: <ol start="3"><li> Por la mañana, el uso de las culturas durante la noche para inocular 150 ml de LB conteniendo 30 ug / ml de kanamicina. Mantener el cultivo a 37 ° C en un agitador. </li><li> Por la tarde, el uso de la cultura pequeños para inocular 6 x 1L 2XYT los medios de comunicación que contiene 30 ug / ml de kanamicina en frascos Fernbach. (Use 25 ml por la cultura de una dilución 1:40). Crecen los cultivos a 37 ° C hasta alcanzar una OD 600 de 0.4-0.6, alrededor de 1,5 horas </li><li> Cuando las culturas alcanzar la densidad adecuada, induce la expresión de proteínas mediante la adición de 0,5 ml de IPTG 1M. Poner todos los frascos de vuelta en la coctelera y continuar a crecer a 30 ° C durante la noche. </li></ol> 4. Día 4: Recolección de Células y purificar la proteína: <ol start="6"><li> Añadir inhibidores de la proteasa, ADNasa y lisozima a las soluciones tampón de la siguiente manera: A 50 ml de tampón de resuspensión de células, agregar 10 mg DNaseI (0,1 mg / ml concentración final), una completa EDTA libre de tabletas inhibidor de la proteasa, y una pizca de lisozima . A 60 ml de solución tampón de resuspensión de membrana, añadir 1 tableta de inhibidor de la proteasa. A otro de 50 ml de solución tampón de resuspensión de membrana, añadir 1 tableta de inhibidor de la proteasa. Mantener las tres soluciones en el hielo. </li><li> Centrifugar los cultivos de 30 minutos 5.000 rpm en gran escala centrífuga para cosechar las células. </li><li> Resuspender las células en 100 ml de tampón de resuspensión de células (50 NaP mM, pH 7,0, 300 mM NaCl, 2 mM MgCl 2, 1 Complete EDTA libre de tabletas inhibidor de la proteasa, 0,1 mg / ml de DNAsa I, una pizca de lisozima) </li><li> Pase la solución de células dos veces a través de una célula de presión francesa a 12.000 psi (762 presión manométrica). Recoger el lisado celular en una botella de mantenerse en frío sobre el hielo. </li><li> Transferir el lisado celular a SS34 tubos de centrífuga y centrifugar para eliminar los desechos celulares durante 30 minutos a 10.000 rpm a 4 ° C en un rotor SS-34. </li><li> Retire con cuidado el sobrenadante en tubos Ti647.5 ultracentrífuga. Centrifugar 50 min a 40.000 rpm a 4 ° C. Eliminar el sobrenadante. </li><li> Resuspender el precipitado, que contiene las membranas celulares, en aprox. 25 ml de buffer de resuspensión de membrana (50 NaP mM, pH 7,0, 300 mM NaCl, 5% de glicerol, un completo EDTA libre de tabletas inhibidor de la proteasa). </li><li> La transferencia de la suspensión de membrana a un tubo de centrífuga limpio y centrifugar a 40.000 rpm en un rotor Ti647.5 durante 50 min a 4 ° C. </li><li> Descartar el sobrenadante y resuspender el pellet se lavó la membrana en 25 ml de tampón de resuspensión de membrana (50 NaP mM, pH 7,0, 300 mM NaCl, 5% de glicerol, un completo EDTA libre de tabletas inhibidor de la proteasa). </li></ol> 5. TM Solublization Proteínas: <ol start="15"><li> A las membranas se resuspendieron (unos 25 ml), añadir 6 mL DDM 10% (concentración de detergente final DDM = 2%) Rock de la mezcla a 4 ° C durante 2 horas. </li><li> Centrifugar la mezcla a 40.000 rpm durante 40 min a 4 ° C en el rotor Ti647.5 para separar los complejos de proteínas solubles en detergente de las proteínas insolubles. Guardar el sobrenadante, que contiene los complejos de proteínas MexB detergente. </li></ol> 6. IMAC: <ol start="17"><li> Se mezcla el sobrenadante obtenido de la velocidad de centrifugado de alta afinidad con las cuentas garra de metal equilibrada en buffer de resuspensión. Incubar durante 1 hora en un rodillo a 4 ° C. </li><li> Vierta la mezcla en un cuerpo de gravedad columna de flujo y descartar el flujo a través. </li><li> Lavar la columna con 20 ml (10 volúmenes de columna) de tampón IMAC encuadernación y lavado (50 mM NaP, pH 7, 300 mM NaCl, 5% de glicerol, 0,2% DDM) </li><li> Eluir la proteína con tampón de elución IMAC (50 NaP mM, pH 7,0, 300 mM NaCl, 5% de glicerol, 250 mM de imidazol, 0,2% DDM). </li><li> Tomar 15 muestras l de las fracciones de elución, mezclar cada uno con 15 ul buffer 2X SDS muestra para el análisis por electroforesis en gel de poliacrilamida. Girar 30 segundos en una microcentrífuga. Analizar las muestras en un 10% de poliacrilamida SDS gel para estimar la cantidad y la pureza de MexB en cada fracción. </li><li> Piscina de las fracciones que contienen los complejos de proteínas MexB detergente y concentrarlos en un concentrador de giro a 4 ° C. Tenga cuidado de que la proteína no se precipitan en este step. </li></ol> 7. Gel columna de filtración: <ol start="23"><li> Pre-equilibrar una Superose 12 HL 30/10 columna con tampón 24 mL correr (50 NaP mM, pH 7,0, 300 mM NaCl, 5% de glicerol, 0,2% de beta-octilglucósido), y esperar a que una línea de base plana. </li><li> Enjuague el sistema Akta bucle de carga con tampón en funcionamiento. </li><li> Filtrar la solución de proteína usando un filtro de jeringa antes de aplicar a la columna. </li><li> De carga de hasta 240 l de la solución de proteína en la columna, con una concentración de proteína de hasta 5 mg / ml. </li><li> Ejecutar 1,5 volúmenes de columna (36 mL) de tampón, recoger las fracciones 0,25 ml. Los complejos de proteínas MexB detergente debe eluir como un pico de alrededor de 10 a 15 ml de volumen de elución. </li><li> Tomar muestras de 5 l de las fracciones del pico. Mezcle cada muestra 1:1 con tampón de muestra 2X SDS. Analizar las muestras en un gel de poliacrilamida al 10% para estimar la cantidad y la pureza de MexB en cada fracción </li><li> Piscina de las fracciones que contienen MexB puro. </li></ol> 8. Los resultados representativos: La figura 1 incluye un gel de poliacrilamida con fracciones de columna combinada de la columna IMAC y distintas fracciones de la columna de filtración en gel. Después de la columna de filtración en gel de la proteína aparece puro gel de poliacrilamida teñidos con Coomassie. Figura 2 se incluye una traza a partir de la columna de filtración en gel que muestra el pico principal de la elución de proteínas complejas detergente de la columna. El rendimiento promedio de proteína MexB es de aproximadamente 2 mg por cada 6 litros de cultivo 2XYT. <img src="/files/ftp_upload/2134/2134fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. SDS-PAGE gel de purificación del PDC MexB. Carril 1, marcadores de peso molecular. 2, agrupados fracciones IMAC. 3-7, Gel fracciones columna de filtración. <img src="/files/ftp_upload/2134/2134fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Ejemplo de los resultados de filtración en gel para los complejos de proteínas MexB detergente (PDC).

<ol><li>Eda, S., Maseda, H., Nakae, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+elegant+means+of+self-protection+in+gram-negative+bacteria+by+recognizing+and+extruding+xenobiotics+from+the+periplasmic+space%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">An elegant means of self-protection in gram-negative bacteria by recognizing and extruding xenobiotics from the periplasmic space.</a> J. Biol. Chem. 278, 2085-2088 (2003).</li>
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<li>Masuda, N., Sakagawa, E., Ohya, S., Gotoh, N., Tsujimoto, H., Nishino, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate+specificities+of+MexAB-OprM%2C+MexCD-OprJ%2C+and+MexXY-oprM+efflux+pumps+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Substrate specificities of MexAB-OprM, MexCD-OprJ, and MexXY-oprM efflux pumps in Pseudomonas aeruginosa.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 44, 3322-3327 (2000).</li>
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<li>Maire, M. le, Champeil, P., Moller, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+membrane+proteins+and+lipids+with+solubilizing+detergents%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">Interaction of membrane proteins and lipids with solubilizing detergents.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1508, 86-111 (2000).</li>
<li>Miroux, B., Walker, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Over-production+of+proteins+in+Escherichia+coli%3A+mutant+hosts+that+allow+synthesis+of+some+membrane+proteins+and+globular+proteins+at+high+levels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Over-production of proteins in Escherichia coli: mutant hosts that allow synthesis of some membrane proteins and globular proteins at high levels.</a> J. Mol. Biol. 260, 289-298 (1996).</li>
</ol>

Además de la resistencia a múltiples fármacos, muchas de las actividades celulares vitales, incluyendo el transporte de iones, la comunicación celular, el transporte de vesículas, el mantenimiento de la estructura celular, y las interacciones huésped-patógeno, involucrar a las proteínas que se incrustan en la membrana celular. Proteínas transmembrana representan más del 30% de proteínas conocidas y son el objetivo de la mayoría de los fármacos actualmente en uso. El plegado inapropiada y la actividad de las proteínas tr...

<table><tbody><tr><td>Tampón muestral SDS</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0737</td><td></td></tr><tr><td>Cepa de E. coli C43(DE3)</td><td>Lucigen</td><td>60345-1</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de kanamicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K4378</td><td></td></tr><tr><td>Medio 2XYT</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2466-2</td><td></td></tr><tr><td>Medio LB</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC61189-5000</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6758</td><td></td></tr><tr><td>DNasa I</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP3226-1</td><td></td></tr><tr><td>Lisozima</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7651</td><td></td></tr><tr><td>Tabletas de inhibidores de proteasas libres de EDTA Complete</td><td>Roche Group</td><td>11 873 580 001</td><td></td></tr><tr><td>NaP monobásico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6566</td><td></td></tr><tr><td>NaP dibásico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5136</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6191</td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1028</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;n&lt;/em&gt;-dodecil-&amp;#946;-D-maltopiranosido</td><td>Anatrace</td><td>D310</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 15 ml</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>Agitador See-Saw Rocker</td><td>Fisher Scientific</td><td>SSL 4</td><td></td></tr><tr><td>Resina de afinidad metálica Talon</td><td>Clontech Laboratories</td><td>635503</td><td></td></tr><tr><td>Imidazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5513</td><td></td></tr><tr><td>Geles de PAGE-SDS de poliacrilamida al 10 %</td><td>Bio-Rad</td><td>161-1454</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de corrida Tris/glicina/SDS para PAGE</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0732</td><td></td></tr><tr><td>Marcadores de peso molecular preteñidos Kaleidascope</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0324</td><td></td></tr><tr><td>Columna Superose 12 30/10</td><td>GE Healthcare</td><td>12 10/300 GL</td><td></td></tr><tr><td>Concentrador centrífugo Amicon</td><td>EMD Millipore</td><td>UFC801024</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de jeringa</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLFG R04 NL</td><td></td></tr><tr><td>Matraces Fernbach</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-552-39</td><td></td></tr><tr><td>Agitador para matraces Fernbach</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema Akta</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga a gran escala J6 con rotor JLA-8.1000</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Botellas de centrífuga de 1 l</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>969329</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga RC-5</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rotor y tubos SS34 de ángulo fijo</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrífuga de piso Sorvall</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rotor T647.5 y tubos con tapas</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>08322</td><td></td></tr><tr><td>Célula de presión francesa</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>FA-032</td><td></td></tr></tbody></table>

expresión, la solubilización de detergente, y purificación de un transportador de membrana, la proteína de resistencia a múltiples fármacos mexb

Expression, Detergent Solubilization, and Purification of a Membrane Transporter, the MexB Multidrug Resistance Protein

Resistencia a múltiples fármacos (MDR), la capacidad de una célula cancerosa o patógenos resistentes a un amplio rango de vista estructural y funcionalmente relacionadas fármacos contra el cáncer o los antibióticos, es un problema actual grave en la salud pública. Esta resistencia a múltiples fármacos se debe principalmente a la energía que dependen de las bombas de eflujo de drogas. Las bombas de expulsión de fármacos contra el cáncer o los antibióticos en el medio externo, la reducción de su concentración intracelular por debajo de un umbral tóxico. Estamos estudiando la resistencia a múltiples en Pseudomonas aeruginosa, un patógeno oportunista bacteriana que causa infecciones en pacientes con muchos tipos de lesiones o enfermedad, por ejemplo, quemaduras o la fibrosis quística, y también en personas inmunodeprimidas cáncer, diálisis y trasplante de los pacientes. El principal flujo de salida de las bombas MDR en P. aeruginosa son complejos tripartito formado por una membrana interna de protones antiporter drogas (RND), un canal de membrana externa (OMF), y una proteína de enlazador periplasmic (MFP) 1-8. Las proteínas RND y OMF son proteínas transmembrana. Proteínas transmembrana representan más del 30% de todas las proteínas y son un 65% de los objetivos actuales de drogas. Los dominios transmembrana hidrofóbica que las proteínas insolubles en tampón acuoso. Antes de que una proteína transmembrana puede ser purificado, es necesario encontrar las condiciones de tampón que contiene un detergente suave que permite que la proteína se solubiliza como un complejo de proteínas de detergente (PDC) 11.09. En este ejemplo, se utiliza una proteína RND, el P. MexB aeruginosa transportador transmembrana, para demostrar la manera de expresar una forma recombinante de una proteína transmembrana, que solubilizan el uso de detergentes, y luego purificar los complejos de proteínas de detergente. Este método general se puede aplicar a la expresión, purificación, y la disolución de muchas otras proteínas de membrana recombinantes expresadas. Los complejos de detergente proteína pueda ser utilizado posteriormente para la caracterización bioquímica y biofísica incluyendo rayos X de la determinación de la estructura cristalina o estudios de entrecruzamiento.

En este protocolo se demuestra la expresión, solubilización y purificación de una proteína de membrana recombinante expresado, MexB, como un complejo de proteínas solubles en detergente. MexB es un transportador de membrana de resistencia a múltiples fármacos de la bacteria patógena oportunista Pseudomonas aeruginosa.

Expresión, la solubilización de detergente, y purificación de un transportador de membrana, la proteína de resistencia a múltiples fármacos MexB

La multirresistencia a fármacos (MDR), la capacidad de una célula cancerosa o de un patógeno para presentar resistencia a una amplia gama de fármacos estructural y funcionalmente no relacionados...

Con el fin de purificar la proteína de membrana Mex B, primero se expresa Mex B en e coli mediante métodos de ADN recombinante. Luego se aíslan las membranas y las proteínas de membrana se solubilizan con un detergente suave. La proteína de membrana solubilizada se purifica mediante iMac y la proteína se purifica adicionalmente mediante cromatografía de filtración en gel.El grado de purificación de la proteína se determina mediante electroforesis en gel de poliacrilamido SDS. Aunque este procedimiento puede proporcionar información sobre transportadores transmembrana de resistencia múltiple a fármacos, también puede aplicarse a otras proteínas de membrana. Los procedimientos que se demostrarán hoy serán realizados por un estudiante de posgrado de mi laboratorio. Para este procedimiento, Mex B de Pseudomonas aeruginosa será subclonado en el vector de expresión pET-30b(+) de manera que Mex B se exprese con una etiqueta de hexahistidina en el extremo C. Comience por la tarde inoculando cuatro cultivos de tres mililitros de LB con canamicina utilizando transformantes frescos o una muestra congelada, y cultive los medios en un agitador rotatorio a 37 grados Celsius durante toda la noche

expression-detergent-solubilization-purification-membrane-transporter

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Investigación

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Biología

Se presenta un protocolo para la investigación in vitro de bombas de expulsión de Pseudomonas aeruginosa. Este protocolo permite la generación de un gradiente de protones robusta, reversible y ajustable dentro de la membrana de los liposomas y por lo tanto debe ser adaptable a cualquier proteína de la membrana activado por la fuerza protomotive.

In vitro Investigación de la bomba de salida MexAB De Pseudomonas aeruginosa

Se presenta un método simplificado para la detección de la expresión de proteínas de membrana recombinantes en Escherichia coli basada en la fusión a la proteína verde fluorescente.

Fluorescente verde a base de proteína Expresión Proyección de proteínas de membrana en<em&gt; Escherichia coli</em

Los proteoliposomas se utilizan para estudiar canales purificados y transportadores reconstituidos en un entorno bioquímico bien definido. Se ilustra un procedimiento experimental para medir el flujo de eflujo mediado por estas proteínas. Se describen los pasos para preparar los proteoliposomas, realizar los registros y analizar los datos para determinar cuantitativamente las propiedades funcionales de la proteína reconstituida.

Un Proteoliposoma Basada Eflujo Ensayo para determinar una sola molécula Propiedades de Cl<sup&gt; -</sup&gt; Canales y Transportadores

El protocolo presentado describe el análisis del transporte mediado por proteínas de membrana a nivel de transportador único utilizando bicapas lipídicas sin disolventes que atraviesan poros. Esto se logra mediante la creación de chips de matriz de nanoporos producidos a granel, combinados con la adquisición y el análisis de datos altamente paralelos, lo que permite el establecimiento futuro de cribados de efectores de proteínas de membrana.

Membrana de transporte de procesos analizados por un sistema de nanoporos viruta altamente paralela a la Resolución de la proteína individual

Aquí presentamos dos protocolos ultrarrápidos para la reconstitución de proteínas de membrana en proteoliposomes fusogénicas y fusión de tales proteoliposomes con bicapas de lípidos de destino para la entrega de detergente libre de estas proteínas de membrana a la bicapa postfusion. La combinación de estos enfoques permite a Asamblea rápida y fácilmente controlado de los sistemas de membranas de varios componentes complejos.

Libre de detergente ultra rápida reconstitución de proteínas de membrana en bicapas lipídicas soportadas utilizando fusogénicas complementarios cargados de Proteoliposomes.

Aquí presentamos un protocolo para expresar, solubilizar y purificar varios transportadores de borato eucariotas con homología a la familia de transportador SLC4 usando levadura. También describimos un análisis Cross-linking químico para evaluar las proteínas purificadas homomeric multimérica Asamblea. Estos protocolos pueden ser adaptados para otras proteínas de membrana desafiante.

Expresión, solubilización y purificación de los transportadores de eucariotas borato de

Describimos un método para la caracterización de transportadores de membrana impulsados por protones en preparaciones de vesículas de membrana producidas por la expresión heteróloga en E. coli y lisis de células utilizando una prensa francesa.

Caracterización de transportadores de membranas por expresión heteróloga en E. coli y producción de vesículas de membrana

Este artículo presenta un protocolo de aislamiento de membrana plasmática a pequeña escala para la caracterización de la proteína Cdr1 cdr1 de Candida albicans ABC (casete de unión a ATP), sobreexpresada en Saccharomyces cerevisiae. Se diseñó una doble etiqueta mGFPHis C-terminal escindible con una etiqueta doble de 16 residuos entre Cdr1 y la etiqueta para facilitar la purificación y la detección de detergente de Cdr1.

Preparación de membrana plasmática a pequeña escala para el análisis de Candida albicans Cdr1-mGFPHis

Los estudios estructurales y bioquímicos de los transportadores de membrana humana requieren cantidades de miligramos de proteína estable, intacta y homogénea. Aquí describimos métodos escalables para seleccionar, expresar y purificar transportadores de solutos humanos utilizando genes optimizados para codones.

Expresión y purificación de alto rendimiento de portadores de solutos humanos para estudios estructurales y bioquímicos

Este protocolo describe un método de purificación SERCA mejorado, que incluye el disacárido trehalosa en el paso final de centrifugación. Este carbohidrato estabiliza las proteínas en condiciones adversas. El SERCA purificado era catalíticamente activo y mostraba una alta pureza, lo que lo hacía adecuado para estudios estructurales y funcionales.

Purificación del retículo sarcoendoplásmico Ca2+-ATPasa a partir de músculo de conejo

Aprende a expresar, solubilizar y purificar la proteína de membrana MexB de Pseudomonas aeruginosa mediante métodos de ADN recombinante en E. coli. Este protocolo utiliza cromatografía de afinidad y filtración en gel para obtener complejos proteína-detergente solubles.

Expresión, la solubilización de detergente, y purificación de un transportador de membrana, la proteína de resistencia a múltiples fármacos MexB (Video) | JoVE Journal

Expresión, la solubilización de detergente, y purificación de un transportador de membrana, la proteína de resistencia a múltiples fármacos MexB

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