Detección de la expresión de enzimas objetivo en células bacterianas genéticamente modificadas

Empieza con tubos que contienen células bacterianas genéticamente modificadas. Cada bacteria transporta fosmidos de alta capacidad de copia que codifican diversas enzimas.

Incubar los tubos con agitación para facilitar la expresión de diversas enzimas intracelulares.

Añade un sustrato específico a la enzima objetivo al tubo de ensayo y añade un volumen igual de tampón al tubo de control.

Incuba con el sacudido. El sustrato entra en las células, donde las enzimas objetivo lo climen, generando un producto fluorescente.

Carga el tubo de control en un citómetro de flujo precalibrado.

A medida que cada célula pasa por un haz láser, dispersa la luz. Genera un gráfico de dispersión para identificar celdas individuales, que dispersan menos luz que los agrupamientos.

Excluye los grupos celulares y grafica la señal de fluorescencia de las células individuales para establecer la fluorescencia basal.

Coloque el tubo tratado con sustrato en el citómetro de flujo para medir la señal de fluorescencia.

Una señal de fluorescencia aumentada en las células tratadas con sustrato en comparación con las células control confirma la expresión de la enzima objetivo.

Para analizar las enzimas metagenómicas de interé