Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 2:58 min. • July 8th, 2025
Para la edición del genoma mediada por CRISPR, comience con el cultivo HAP1-BE3, una línea celular haploide con un gen BE integrado que codifica una enzima editora de bases. A este cultivo, agregue vectores lentivirales que contienen plásmido CRISPR-Cas9 diseñado para un objetivo específico, como el gen del cáncer de mama humano, BRCA1.
La partícula de lentivirus se fusiona con la membrana de la célula huésped, liberando el plásmido, que finalmente se integra en el genoma de la célula huésped para formar los segmentos del gen CRISPR-Cas9-BE. Estos genes generan un ARNg dirigido a BRCA1, endonucleasa Cas9 y BE-citidina desaminasa.
El ARNg dirigido a BRCA1 es un ARN que se fusiona con Cas9 y dirige el complejo al locus del gen BRCA1. Cerca de este gen, el locus es un motivo adyacente protoespaciador, o PAM, donde BE puede acoplarse de manera estable y moverse río arriba para alcanzar su región catalítica activa. Aquí, el BE reconoce una base de citidina y la convierte en uridina.
Esta mutación de sustitución de bases desencadena la nucleasa Cas9 para cortar la cadena de ADN no modificada. La rotura de la cadena de ADN activa las enzimas reparadoras que llenan la base faltante y convi
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