PCR anidada para detectar una secuencia genómica viral específica

La reacción en cadena de la polimerasa anidada, PCR anidada, puede amplificar selectivamente secuencias de genes específicos.

Para detectar una secuencia viral diana, comience con una mezcla maestra que contenga cebadores externos complementarios a una región de ADN más grande que contenga la secuencia viral objetivo, dNTP y ADN polimerasa termoestable en un tampón apropiado.

Agregue ADN viral de doble cadena, extraído de las células infectadas por el virus, a esta mezcla. Transfiera el tubo a un termociclador; ejecutar el primer ciclo de PCR.

Durante la desnaturalización, el ADN bicatenario produce dos plantillas monocatenarias. A una temperatura de recocido adecuada, los cebadores exteriores se unen a sus secuencias objetivo correspondientes. Más tarde, la ADN polimerasa extiende los cebadores utilizando dNTP, produciendo amplicones grandes, que contienen la secuencia específica dentro del ADN amplificado.

Transfiera estos amplicones a un nuevo tubo. Complemente con una mezcla maestra fresca que contenga cebadores internos o anidados dirigidos a una secuencia más pequeña y específica dentro del ADN amplificado más grande. Ejecute la segunda PCR.

Durante la segunda PCR, la hebra d