Una técnica para detectar la tuberculosis extrapulmonar mediante nanosondas superparamagnéticas

Tome Mycobacterium bovis BCG, una bacteria atenuada que causa tuberculosis, e inyéctelo por vía intradérmica en un ratón.

Una respuesta inflamatoria contra la bacteria forma un granuloma compuesto por bacterias, macrófagos epitelioides, macrófagos convencionales y linfocitos.

Realizar imágenes por resonancia magnética o resonancia magnética. El campo magnético alinea protones orientados aleatoriamente en el tejido en su dirección.

Aplique un pulso de radiofrecuencia perpendicular al campo magnético. Los protones absorben energía del pulso y se inclinan lejos del campo.

Cuando el pulso se detiene, los protones emiten la energía absorbida, denominada decaimiento por inducción libre o FID, y se realinean con el campo.

Mida la señal FID para obtener una imagen. La duración de la caries es específica del tejido y las áreas con una caries más larga parecen más claras.

Tome nanosondas superparamagnéticas conjugadas con anticuerpos policlonales específicos de Mycobacterium e inyecte por vía intravenosa.

Los anticuerpos se unen a múltiples epítopos en las bacterias, marcando el granuloma.

Las nanosondas acortan la desintegración de los protones vecinos para hacer que el granuloma parezca más oscuro, lo que confirma la infección por micobacterias.

Para inocular animales de experimentación con M. bovis BCG, primero, reconstituir la vacuna liofilizada, o caldo bacteriano, en el medio de Sauton, y diluir la solución madre reconstituida con solución salina. A continuación, cargue 100 microlitros de la solución en una jeringa de 1 mililitro por animal e inyecte todo el volumen de bacterias, por vía intradérmica, en la piel escapular dorsal izquierda o derecha de cada ratón.

Para imágenes de resonancia magnética in vivo de animales vivos inyectados con nanosonda, adquiera imágenes de eco de espín rápido ponderadas en T2 de referencia de cada animal experimental anestesiado, antes de inyectar dos nanomolares de sondas de anticuerpos SPIO-Tb, suspendidas en 200 microlitros de solución salina en la vena de la cola de cada ratón. Luego, vuelva a obtener imágenes de los animales, inmediatamente después de la inyección, y cada cinco minutos durante los siguientes 30 minutos.

Al final de la sesión de imágenes, analice cuantitativamente las imágenes de resonancia magnética, utilizando la intensidad de la señal como una medida de las regiones definidas de interés en ubicaciones comparables de un centro de granuloma de M. tuberculosis y el músculo de la espalda adyacente a un área granulomatosa. Luego, use la fórmula para calcular las mejoras relativas de la señal, utilizando la medición de la intensidad de la señal antes y, de cero a tres horas, después de la inyección de los agentes de contraste.