Ensayo de citometría de flujo para identificar subconjuntos de células inmunitarias en células mononucleares de sangre periférica

Tome células mononucleares de sangre periférica o PBMC, una población de células mixtas que incluye linfocitos y monocitos.

Agregue un colorante de viabilidad fluorescente para discriminar las células muertas y un cóctel de anticuerpos marcado con fluorescencia para identificar diferentes tipos de células.

Los anticuerpos conjugados con fluorocromo A se unen a marcadores de superficie: CD3 en células T, receptor de células T γδ o TCR en células T γδ y CD56 en células asesinas naturales o NK.

Los anticuerpos conjugados con fluorocromo B se unen a CD4 y CD8 en las células T, CD19 en las células B y CD14 en los monocitos.

Usando citometría de flujo, identifique los subconjuntos de células vivas.

Mientras que las células T CD8⁺ y CD4⁺ son CD3⁺, las células CD4⁺ se encuentran entre las células CD3 positivas simples y las células CD3-CD8 doblemente positivas.

Las células T γδ expresan γδ TCR y CD3 más altas en comparación con las células CD4⁺ y CD8⁺.

Las células B y las células NK son CD3^- pero se identifican por CD19 en las células B y CD56 en las células NK.

Los monocitos se identifican por la expresión de CD14.

Para preparar los PBMC para la tinción, transfiera 100 microlitros de cada