Análisis basado en citometría de flujo de la activación de células dendríticas mediante complejos inmunitarios
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:35 min. • July 8th, 2025
Comience con una suspensión de células tumorales fijada químicamente.
Agregue una concentración óptima de inmunoglobulina G de unión tumoral que se une a los antígenos de la superficie de las células tumorales, formando complejos inmunes o IC.
Transfiera los CI a una placa de cultivo que contenga células dendríticas adheridas. Incubar.
La célula dendrítica reconoce el CI, lo internaliza y lo procesa en fragmentos peptídicos.
Los fragmentos se cargan en moléculas principales del complejo de histocompatibilidad de clase II o MHC-II y se presentan en la superficie celular, junto con la molécula coestimuladora CD86.
Retire los medios. Agregue un tampón de disociación celular y pipetee vigorosamente para separar las células.
Transfiera las células a un tubo.
Centrifugar y resuspender las células en una solución de bloqueo para bloquear interacciones no específicas.
Superposición con un cóctel de anticuerpos marcado con fluoróforo dirigido a MHC-II y CD86.
Agregue un tinte de unión al ADN e incube brevemente para teñir los núcleos de células muertas.
Mediante citometría de flujo, identifique las células vivas que coexpresan MHC-II y CD86, confirmando la activación de células dendríticas
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