Imagen y cuantificación de agregados de proteínas en cerebros de Drosophila modificados genéticamente
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:47 min. • July 8th, 2025
Comience con cerebros de Drosophila modificados genéticamente. Estos cerebros expresan una proteína mutante marcada con fluorescencia roja en la neurona que puede extenderse a la célula glial circundante, expresando la proteína normal etiquetada con fluorescencia amarilla, causando su agregación.
Agregue una solución fijadora que preserve la integridad celular.
Retire el fijador y lave con un tampón.
Agregue un reactivo antidecoloración e incube para evitar la decoloración de las señales fluorescentes.
Transfiera los sesos a un portaobjetos y elimine el exceso de líquido.
Permita que los sesos se adhieran al portaobjetos.
Usando pequeños trozos de un cubreobjetos como espaciadores, coloque un cubreobjetos encima de ellos. Agregue reactivo antidecoloración y séllelo.
Bajo un microscopio confocal, capture imágenes utilizando diferentes longitudes de onda de excitación para fluorescencia roja y amarilla.
Utilizando un software de análisis de imágenes, cuantificar los agregados de proteínas.
La colocalización de la fluorescencia roja y amarilla indica la propagación de proteínas mutantes.
Una vez que se hayan diseccionado todos los cerebros, transfiera el tubo de recolección a un nutat
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