Medición de la actividad del proteasoma en diferentes compartimentos subcelulares del cerebro de rata
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:10 min. • July 8th, 2025
Comience con fracciones nucleares y sinápticas subcelulares recolectadas de la amígdala lateral de los cerebros de ratas condicionadas por el miedo y control.
Cada fracción subcelular contiene concentraciones variables de proteasomas 20S, el núcleo catalítico del complejo proteasoma responsable de degradar las proteínas celulares no deseadas.
Agregue un tampón de ensayo que contenga ATP y un sustrato de péptido fluorogénico a las muestras e incube.
En presencia de ATP, el proteasoma escinde el péptido fluorogénico, liberando moléculas fluorogénicas libres.
Con un lector de placas, mida la intensidad de la fluorescencia a intervalos regulares.
Cuantifique la fluorescencia comparándola con las concentraciones estándar conocidas de la molécula fluorogénica.
La intensidad de la fluorescencia es proporcional a la actividad del proteasoma en la muestra.
El aumento de la actividad del proteasoma en la fracción nuclear de ratas condicionadas por el miedo sugiere cambios en la expresión génica relacionada con la memoria, mientras que la disminución de la actividad en la fracción sináptica indica cambios en la expresión de proteínas sinápticas necesarios para el mantenimiento de la memoria a
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