Name: Título encapsulación celular a través de gotitas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:09:54.000+00:00
Duration: 13 min 10 s
Description: Aprende la encapsulación celular mediante impresión 3D con válvulas solenoides y geles para crear estructuras tridimensionales viables. Este método avanza la ingeniería de tejidos y la medicina regenerativa.

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NIH3T3 células de preparación: A. Las células de eyección <ol><li> Trypsinize las células, y luego se diluye 1:1 con los medios de comunicación celular, y la transferencia de un frasco T75 a un tubo de 15 ml Falcon </li><li> Centrifugar las células en un pellet por centrifugación, se aspira el sobrenadante y lavar las células con DPBS </li><li> Centrifugar las células en una bolita de nuevo, y aspirar el sobrenadante </li><li> Resuspender las células en los medios de comunicación </li><li> Determinar la densidad celular con hemocitómetro (~ 200 X 10 4 células / ml por frasco T75) </li><li> Solución de centrífuga de células, se aspira el sobrenadante y resuspender en cantidad adecuada de los medios de comunicación para diferentes concentraciones de células </li></ol> B. expulsión de la célula <ol><li> Vortex antes de usar las células para la eyección </li><li> Transferencia de 200 l de solución de células en la jeringa </li><li> Establecer el modo apropiado en el generador de impulsos <ol><li> Para la expulsión de gotas individuales y múltiples gotas (ráfagas), generador de pulso para &quot;E. Bur&quot; modo de </li><li> Para la eyección de gota continua, generador de pulso en &quot;NORM&quot; modo de </li></ol></li><li> Cambiar la configuración de la señal <ol><li> Establecer el nivel de alta y baja tensión Nivel de salida: LIS a 5 V y LOL a 0 V y asegúrese de que el &quot;LIM&quot; está encendido </li><li> Establecer como una señal de pulso cuadrado </li><li> Cambiar la cantidad de tiempo que la válvula solenoide se abre para la eyección de gotas, cambiando el valor de &quot;MED&quot; o cambio de ciclo de trabajo (&quot;derecho&quot;) </li><li> Cambiar la frecuencia de la expulsión, cambiando el valor de &quot;PER&quot; </li><li> Cambiar el número de gotas expulsadas en una explosión al cambiar el valor de &quot;Bur&quot; </li></ol></li><li> Solución de células de expulsión sobre el sustrato preparado para imágenes con microscopio </li></ol> C. La tinción <ol><li> Conforman solución colorante con 0,5 l calceína-AM y 2 l homodímero de etidio por ml de DPBS </li><li> Sumergir sustrato preparado en la solución colorante </li><li> Que la muestra de incubar durante 10 minutos a 37 ° C antes de exponer </li></ol> Experimento de Validación <ol><li> En una Nikon Eclipse TE-2000 microscopio fluorescente U <ol><li> Punto avanzado de software (Diagnostics, Inc.) </li><li> Live / Dead ensayo </li></ol></li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

<table><tbody><tr><td>Microscopio fluorescente</td><td></td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse TE-2000 U</td><td></td></tr><tr><td>Eyector de células con válvula solenoide</td><td></td><td></td><td></td><td>Frecuencia de operación: 1 KHz, 30 psi, 50 nl~0,5 µl. Controlador de válvula de 12 V: corriente de accionamiento de 2,5 A</td></tr><tr><td>Depósito de aire portátil de 5 galones</td><td></td><td>Coleman</td><td>Powermate CT5</td><td>Aire presurizado: 30 PSI</td></tr><tr><td>Reguladores de presión</td><td></td><td>Marsh Bellofram</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Generador de impulsos</td><td></td><td></td><td>HP8112A</td><td>Generación de frecuencia de accionamiento: 50 MHz</td></tr><tr><td>Plataforma XYZ</td><td></td><td>Newmark Systems</td><td></td><td>Con motor paso a paso: plataforma XY de recorrido 6 pulgadas (NLS4-6-25), plataforma Z de recorrido 2,5 pulgadas (NLS4-2,5-25), controlador de 3 ejes (NSC-G3), resolución de 0,1 µm</td></tr><tr><td>NIH 3T3</td><td>Línea celular</td><td></td><td></td><td>Fibroblastos</td></tr><tr><td>Tripsina</td><td></td><td></td><td></td><td>Solución al 0,05 %</td></tr><tr><td>Medio para células NIH 3T3</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Tampón</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>T75</td><td></td><td></td><td></td><td>Frascos de cultivo de tejidos</td></tr><tr><td>Tubos cónicos de plástico</td><td></td><td></td><td></td><td>15 ml, para cultivo de tejidos</td></tr></tbody></table>

título encapsulación celular a través de gotitas

Title Cell Encapsulation by Droplets

Título encapsulación celular a través de gotitas

Me llamo Hang Moon. Estoy trabajando con el profesor de condones. Él y yo trabajamos con la etapa XYJ para crear una estructura tridimensional de célula.Hola, soy PE y Lynn, y estoy trabajando en el proyecto de impresión celular con encapsulación de células y medios y geles. Esto es un solenoide para la expulsión de una célula y una mezcla celular sobre el medio celular. La válvula solenoide es activada por dos líneas de señal.La línea de señal proviene de una placa seca aquí. La señal proviene de aquí. Esa línea a través de esa línea, esa es el generador de funciones primero.Primero se genera mediante nuestro método programado. Por lo tanto, si desea cambiar el flujo, puede modificar el programa con la línea de conmutación o puede controlar ese generador de procesos desde la computadora. La válvula celular se abre y cierra mediante una señal eléctrica, pero la célula recibe suministro a través de esa línea.La célula y el medio o el gel de agro se suministran a través de las jeringas. Las jeringas dentro del agua, dentro de la jeringa, están presionadas ligeramente por el aire. El aire presurizado se suministra desde un tanque como aquí la línea.Entonces, la pequeña línea y el aire

Research

Investigación

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Biology

Biología

Se presentan los protocolos de 3 dimensiones (3D) en la encapsulación de células dentro de los hidrogeles sintéticos. El procedimiento de encapsulación, se destaca por dos métodos utilizados para el entrecruzamiento (michael-tipo y además iniciada por la luz los mecanismos de los radicales libres), así como una serie de técnicas para evaluar el comportamiento de células encapsuladas.

La encapsulación celular en hidrogeles 3D para ingeniería de tejidos

La combinación de generación monodispersas gota con ordenamiento inercial de células y partículas, se describe un método para encapsular un número deseado de células o partículas en una sola gota a tasas kHz. Se demuestra la eficiencia de dos veces superiores a las de la encapsulación no ordenada de las gotas de una y dos partículas.

De alto rendimiento de una sola célula y múltiple las células de micro-encapsulación

Este vídeo muestra una técnica para inmunotinción de células encapsuladas en un hidrogel 3D. El cultivo de hidrogel que contiene células progenitoras neurales se fija, se permeabiliza y se trata con una solución bloqueante para evitar la inmunotinción inespecífica. Se añade un cóctel de anticuerpos primarios para unirse a proteínas específicas, seguido de anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia y una tinción nuclear. A continuación, la muestra se monta en un portaobjetos y se observa...

Inmunotinción de células encapsuladas en un sistema de hidrogel 3D

Este video y el manuscrito describen un método basado en emulsión para encapsular células de mamífero en perlas de alginato al 0,5% al ​​10% que se pueden producir en grandes lotes usando un simple recipiente agitado. Las células encapsuladas pueden cultivarse in vitro o trasplantarse para aplicaciones de terapia celular.

Encapsulación de células de mamífero en perlas de alginato usando un recipiente agitador simple

Este artículo presenta un protocolo para la escasa población de células mediante puntas de pipeta los dispositivos microfluídicos gotita para proporcionar una mayor eficiencia de encapsulación de células en gotas de siembra.

Método basado en una punta de pipeta para siembra células gota microfluídicos plataformas

Aquí se presenta un protocolo para el uso del alginato como polímero en la microencapsulación de células inmortalizadas para la entrega a largo plazo de productos biológicos a ojos de roedores.

Tecnología celular encapsulada para la entrega de productos biológicos al ojo del ratón

Los ensayos de gotas de agua en aceite son útiles para la química analítica, la evolución enzimática y el análisis de células individuales, pero generalmente requieren microfluídica para formar las gotas. Aquí, describimos la emulsificación con plantilla de partículas, un enfoque libre de microfluídica para realizar ensayos de gotas.

La emulsificación con plantilla de partículas permite ensayos de gotas sin microfluídica

Este artículo describe la encapsulación de células madre pluripotentes humanas (hPSC) utilizando un dispositivo de enfoque de flujo coaxial. Demostramos que esta tecnología de encapsulación microfluídica permite la formación eficiente de esferoides hPSC.

Fabricación microfluídica de microcápsulas core-shell que transportan esferoides de células madre pluripotentes humanas

Este artículo presenta un método simple para la producción expedita de vesículas unilamelares gigantes con proteínas citoesqueléticas encapsuladas. El método demuestra ser útil para la reconstitución ascendente de estructuras citoesqueléticas en confinamiento e interacciones citoesqueleto-membrana.

Encapsulación rápida del citoesqueleto reconstituido dentro de vesículas unilamelares gigantes

Este artículo presenta un protocolo de fabricación para un nuevo tipo de sustrato de cultivo con cientos de microcontenedores por mm2, en el que los organoides pueden ser cultivados y observados utilizando microscopía de alta resolución. También se detallan los protocolos de siembra celular e inmunotinción.

Una plataforma de alto rendimiento para el cultivo y la obtención de imágenes 3D de organoides

Esta guía para principiantes presenta un protocolo general para la preparación de vesículas unilamelares gigantes (GUV) mediante el método de transferencia de gotas, discutiendo los pasos críticos y proporcionando información para ayudar a los posibles ajustes necesarios para diferentes aplicaciones, incluida la biología sintética y la microrobótica.

Uso del método de transferencia de gotas para preparar de forma fiable vesículas unilamelares gigantes

Aprende la encapsulación celular mediante impresión 3D con válvulas solenoides y geles para crear estructuras tridimensionales viables. Este método avanza la ingeniería de tejidos y la medicina regenerativa.

Título encapsulación celular a través de gotitas

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