Modelo experimental de endocarditis Resistente a la Meticilina Staphylococcus aureus (SARM) en la rata

El objetivo general de este procedimiento es establecer un modelo experimental de endocarditis infecciosa en ratas. Esto se logra primero cultivando el áureo y preparando los catéteres quirúrgicos para la infección. A continuación, se prepara el área quirúrgica y se anestesia al animal.

Una vez que el animal está anestesiado, se inserta un catéter a través de la arteria carótida derecha hacia el corazón. El paso final es infectar a los animales con áureo mediante inyección en la vena de la cola. En última instancia, los tejidos objetivo se diseccionan y se preparan para el cultivo cuantitativo.

La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como el modelo de endocarditis rápida, es que el modelo de endocarditis roja se puede utilizar con el sistema de imagen in vivo. Ivus. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la patogénesis oral, como la virulencia y la eficacia del agente antimicrobiano. Por lo general, las personas nuevas en esta técnica tendrán dificultades porque el procedimiento quirúrgico es un desafío.

Primero inocule un bucle lleno de cultivo de M SSA de un stock congelado a un estuche de viaje de sangre de oveja. La placa de barrena de soja incuba el cultivo durante la noche a 37 grados centígrados después de asegurarse de que no haya contaminación. Elija una colonia del plato y úsela para inocular cinco mililitros de caldo de soja try toay en un tubo de 15 mililitros con tapa a presión.

Incubar el inóculo a 37 grados centígrados durante la noche en una incubadora agitadora. Ajústelo a 200 RPM para preparar primero los catéteres. Corte el tubo de polietileno a longitudes de 10 centímetros y esterilice los catéteres en una solución desinfectante cex durante 30 minutos.

A continuación, derrita un extremo de un tubo esterilizado presionando la punta con pinzas estériles calentadas para crear un catéter que pasará de la arteria carótida derecha al ventrículo izquierdo y causará daño al endocardio cuando el corazón late. A continuación, anestesia a la rata colocándola en una cámara que contenga una mezcla de oxígeno flúor uno a uno hasta que el anestésico haga efecto. Confirme la anestesia comprobando si los músculos están relajados y si no hay reflejos pedales.

Y mantener un estado de anestesia durante la cirugía mediante el uso de un cono de nariz que está conectado con la mezcla de gases. Limpie el área quirúrgica con Betadine y etanol al 70% utilizando una técnica estéril durante toda la cirugía. Coloque la rata en posición dorsal y haga una incisión vertical a través de la capa de piel del cuello por encima del esternón mediante una disección roma.

Separe la fascia para exponer la arteria carótida derecha. La arteria carótida derecha se encuentra ligeramente a la derecha de la línea media, por encima de las clavículas. Tire con cuidado de la arteria hacia arriba fuera de la cavidad del cuello y coloque dos longitudes de 10 centímetros de sutura de seda debajo de la arteria para atarla en el extremo cefálico expuesto.

A continuación, coloque una pinza en la arteria para evitar el sangrado. Haga un pequeño orificio en la parte superior de la arteria con un introductor de catéter con pinzas. Inserte el extremo no sellado del catéter a través del orificio de la arteria.

Retire el clip y empuje el catéter hacia el corazón. Hasta que se encuentre la resistencia insertada correctamente, el catéter debe extenderse de cuatro a cinco centímetros en la arteria y debe pulsar con los latidos del corazón de la rata. Una vez que el catéter esté en su lugar, ate la sutura suelta alrededor del extremo de la arteria y asegure el catéter en su lugar.

Con la sutura de seda, corte el exceso de sutura y los extremos del catéter, y luego meta los extremos debajo de la piel del cuello. Cierre la piel con pinzas para la piel. Coloque a la rata en una jaula limpia y manténgala en un lugar cálido hasta que se recupere de la anestesia.

Proporcione comida y agua y revise a la rata con frecuencia, tanto durante como después de la recuperación. La infección se puede realizar entre uno y siete días después de la cirugía, pero el tiempo debe permanecer constante dentro de los experimentos. Limpie la cola de la rata con etanol al 70% e inyecte 0,5 mililitros del cultivo de SARM en la célula deseada.

Cuenta hasta la vena de la cola. Con una aguja de media pulgada de calibre 27, aplique presión en el sitio de la inyección hasta que se detenga el sangrado antes de devolver a la rata a su jaula. Después de sacrificar la rata, limpie el pecho con etanol al 70% y luego haga una incisión en forma de V en el pecho debajo del esternón.

Corta el cartílago de las costillas a cada lado del esternón. Para exponer el corazón, tire suavemente del corazón hacia arriba y corte a través del tejido cerca de la aorta y diseccione hacia arriba para liberar el corazón. Coloque el corazón en una placa de Petri estéril forrada con una gasa de cuatro por cuatro pulgadas, y luego haga un corte a través de la pared interna del ventrículo izquierdo y abra la cámara del lado izquierdo.

Verifique que la colocación del catéter esté correctamente colocado y luego retírelo. Examine y retire la vegetación de la válvula con tijeras y pinzas. También se extraen los riñones y el bazo, y después de pesar y homogeneizar los tejidos y vegetaciones se realizan diluciones seriadas en PBS para cultivo cuantitativo.

Aquí se muestra un catéter colocado correctamente como lo indica la flecha más a la izquierda. Se extiende a través de la válvula aórtica y hacia el lado izquierdo de la cámara cardíaca, y se pueden ver numerosas vegetaciones alrededor de las válvulas aórticas, como lo indican las flechas central y derecha. Esta tabla proporciona un ejemplo de la virulencia de una cepa de ssus en el modelo de endocarditis de rata.

Todos los animales desafiados con oculares de 10 a la quinta y de 10 a la sexta. La UFC desarrolló endocarditis con altas densidades de ssus en las vegetaciones cardíacas, así como en los riñones y el bazo una vez dominado. Este procedimiento quirúrgico se puede realizar en 10 minutos si se realiza correctamente.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar mantener al animal en un estado evaluado durante la cirugía. No se pueden realizar métodos como el ivus para responder a preguntas adicionales como el monitoreo en tiempo real de la eficacia de los agentes antimicrobianos y la expresión génica in vivo después de su desarrollo. Esta técnica será el camino para que los investigadores en el campo de la cristiandad y la ficción exploren su factor de virulencia patogénica en la infección endovascular.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo establecer un modelo experimental de endocarditis en ratas. No olvide que trabajar con ARM puede ser extremadamente peligroso y se deben tomar precauciones como el uso de laboratorio, bata y guante al realizar este procedimiento.