Name: Trans-vivo hipersensibilidad de tipo retardada Ensayo para Antigen Reglamento Específico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Aprende el ensayo de hipersensibilidad retardada trans-vivo para evaluar respuestas inmunes específicas de antígenos en receptores de trasplantes. Este método permite detectar respuestas proinflamatorias y regulatorias usando células PBMC en ratones.

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Los autores desean agradecer las contribuciones de AM VanBuskirk al desarrollo de nuestra comprensión de la respuesta DTH regulada en los receptores de trasplantes. Este trabajo fue apoyado subvenciones del NIH PO1AI084853 y R01AI066219-06 y la UE-patrocinado un estudio.

1. Preparación de los linfocitos <ol><li> Recoger la sangre en tubos ACD (ácido citrato dextrosa). </li><li> Aislar PBMC de sangre periférica humana fresca usando medio de separación de linfocitos de acuerdo con métodos estándar. </li><li> Lavar las PBMC tres veces con PBS para eliminar las plaquetas contaminantes. Las plaquetas se encontraron para interferir con el ensayo de DTH trans-in vivo. Máxima permisible de contaminación por plaquetas preparación PBMC es ≤ 1x10 7 / inyección. </li><li> Si hay una contaminación de células rojas de la sangre notable, lleve a cabo la lisis de glóbulos rojos usando tampón de lisis ACK después del primer lavado. Eliminar el tampón ACK por lavado 2 veces con PBS. </li></ol> 2. Preparación de aloantígeno <ol><li> Aislar PBMC de la sangre periférica de donantes utilizando el procedimiento mostrado anteriormente. </li><li> Se resuspende el PBMC de donantes en PBS a una concentración de 120x10 6 células / ml (4x10 6 células / 30 l). </li><li> Añadir 1 mM PMSF a la mezcla para evitar que la proteínala degradación. </li><li> Someter a ultrasonidos la suspensión celular usando 1-siete segundos pulsos con un sonicador de sonda mm-2. (Nota: Mantenga el frío material y evitar burbujas excesivas Si se produce la formación de espuma, deje que la suspensión de células se sientan en el hielo por un 2-3 min.). </li><li> Verificar la interrupción de&gt; 90% de las células utilizando un hemocitómetro. </li><li> Centrifugar la mezcla a 14.000 rpm a 4 ° C durante 20 min en microcentrífuga refrigerada. </li><li> Transferir el sobrenadante a un nuevo tubo Safe-Lock 2,0 ml y determinar la concentración de proteína. </li></ol> 3. Preparación de las células para preparaciones inyectables <ol><li> Para cada alícuota inyección 7x10 6 PBMC en tubos Safe-Lock 2,0 ml. </li><li> Centrifugar a 6000 rpm durante un minuto en microcentrífuga y eliminar el sobrenadante. </li><li> Resuspender las células en PBS con o sin antígenos. Ajustar el volumen de inyección de 35 l con PBS. El siguiente esquema se utiliza para inyecciones: Control negativo: PBMC + PBS Control Positivo: las PBMC + TT / DT (25 y mu; G / inyección) Experimental antígeno específico de respuesta: PBMC + prueba de Ag (4-8 mg / inyección) Experimental Reglamento de antígeno específico: prueba PBMC + Ag + TT / DT </li></ol> 4. Pre-medición, inyección, y después de la medición <ol><li> Anestesie CB17 ratón SCID con isoflurano. Medir el espesor de la almohadilla plantar trasera utilizando una pinza de resorte. Ponga calibrador en el centro de la almohadilla de la pata, con un borde de tocar la última almohadilla de pie del pie, para proporcionar un punto de referencia para mantener el sitio de medición consistente. Espesor almohadilla se registra cuando lectura del indicador se ha estabilizado. </li><li> Inyecte lentamente suspensiones de células por vía subcutánea en las almohadillas de las patas de los ratones utilizando ½ cc jeringas de insulina con una aguja de calibre 28. Realizar la inyección con la aguja apuntando hacia los dedos de los pies, y el bisel hacia arriba. (Nota: asegúrese de que no hay fugas). </li><li> 18-24 horas después de la inyección, anestesiar el ratón con la medición isoflurano y repetición de la DTH. </li><li> Subtractuar el espesor de cada almohadilla de la pata antes de la inyección a partir del valor después de la inyección para obtener el valor de hinchamiento almohadilla de la pata, expresa los datos en unidades de 10 pulgadas -4. Calcular el antígeno específico de la hinchazón neta mediante la sustracción de control de la DTH (PBMC + PBS) a partir de los valores de hinchazón de la pata obtenidos a partir de los tratamientos (PBMC + donante aloantígeno, TT / DT, o donante aloantígeno + TT / DT). Se requiere una respuesta de control positivo recordar antígeno TT / DT de ≥ 25x10 pulgadas -4 más respuesta de fondo a PBS para que la prueba se considerará válida. </li><li> Determinar la inhibición de respuestas de memoria en la presencia de antígenos del donante mediante la comparación de la hinchazón neta de cada inyección utilizando la siguiente fórmula: <img alt="Ecuación 1" fo:src="/files/ftp_upload/4454/4454eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4454/4454eq1.jpg" /></li></ol>

<ol><li>Carrodeguas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans+vivo+analysis+of+human+delayed-type+hypersensitivity+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity.</a> Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).</li>
<li>VanBuskirk, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+allograft+acceptance+is+associated+with+immune+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Human allograft acceptance is associated with immune regulation.</a> J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).</li>
<li>Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+and+injection+site+are+crucial+for+detecting+linked+suppression+in+transplant+recipients+by+trans-vivo+DTH+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay.</a> Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).</li>
<li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+tolerance+to+a+maternal+kidney+transplant+is+selective+for+HLA+class+II%3A+Evidence+from+trans-vivo+DTH+and+alloantibody+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Immunology%22%5BJournal%5D)">Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis.</a> Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).</li>
<li>Geissler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+liver+allograft+acceptance+and+the+%27tolerance+assay%27%3A+In+vitro+anti-donor+T+cell+assays+show+hyporeactivity+to+donor+cells+but%2C+unlike+DTH%2C+fail+to+detect+linked+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay': In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression.</a> Transplantation. 72, 571-580 (2001).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+liver+allograft+acceptance+and+the+%27tolerance+assay%27.+II.+donor+HLA-A%2C+-B+but+not+DR+antigens+are+able+to+trigger+regulation+of+DTH%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay'. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH.</a> Hum. Immunol. 63, 862(2002).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minor+H+Antigen+HA-1-specific+Regulator+and+Effector+CD8%2B+T+Cells%2C+and+HA-1+Microchimerism%2C+in+Allograft+Tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance.</a> J. Exp. Med. Cai, J., et al. 199, 1017-1023 (2004).</li>
<li>Rodriguez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulation+and+graft+survival+in+kidney+transplant+recipients+are+both+enhanced+by+human+leukocyte+antigen+matching%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching.</a> Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).</li>
<li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD4%2BCD25low+adaptive+T+regulatory+cells+suppress+delayed-type+hypersensitivity+during+transplant+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance.</a> J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).</li>
<li>Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+type+determines+the+mechanism+of+bystander+suppression+by+adaptive+T+regulatory+cells+specific+for+the+minor+antigen+HA-1%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1.</a> J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+reduction+of+immunosuppression+in+older+renal+transplant+recipients+who+exhibit+donor-specific+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation.</a> Transplantation. 88, 533-541 (2009).</li>
<li>Jankowska-Gan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretransplant+immune+regulation+predicts+allograft+outcome%3A+bidirectional+regulation+correlates+with+excellent+renal+transplant+function+in+living-related+donor-recipient+pairs%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs.</a> Transplantation. 93, 283-290 (2012).</li>
<li>Knechtle, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+limited+use+of+tacrolimus+to+avoid+rejection+in+an+alemtuzumab+and+sirolimus+regimen+for+kidney+transplantation%3A+clinical+results+and+immune+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring.</a> Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).</li>
<li>Haynes, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-specific+indirect+pathway+analysis+reveals+a+B-cell-independent+signature+which+reflects+outcomes+in+kidney+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients.</a> Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).</li>
<li>Burlingham, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17-dependent+cellular+immunity+to+collagen+type+V+predisposes+to+obliterative+bronchiolitis+in+human+lung+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants.</a> J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).</li>
<li>Bobadilla, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TH-17%2C+Monokines%2C+Collagen+Type+V%2C+and+Primary+Graft+Dysfunction+in+Lung+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).</li>
<li>Olson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+prostate+tumor+antigen-specific+CD8%2B+regulatory+T+cells+are+inhibited+by+CTLA-4+or+IL-35+blockade%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade.</a> J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).</li>
</ol>

Los autores de este manuscrito no tienen conflictos de intereses a revelar.

El ensayo de DTH trans-vivo es una prueba de diagnóstico novela con una aplicación clínica potencial en la evaluación de las respuestas mediadas por células en trasplante, pacientes de cáncer y autoinmunes. Es valioso porque no sólo es útil en el seguimiento de las respuestas de recuerdo T efectoras, sino que también puede detectar respuestas T reguladoras. Un método confiable para detectar la regulación DTH humano puede predecir la seguridad de la retirada de inmunosupresión en los pacientes que son candidatos a la mon...

<table><tbody><tr><td>Tubo ACD para la recolección de sangre</td><td>BD</td><td>02-684-26</td><td></td></tr><tr><td>Medio para la separación de linfocitos</td><td>Cellgro</td><td>25-072-CV</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfatos de Dulbecco</td><td>Cellgro</td><td>21-031-CM</td><td>Sin calcio &amp;y magnesio</td></tr><tr><td>Tampón de lisis ACK</td><td>BioWhittaker</td><td>10-548E</td><td></td></tr><tr><td>TT/DT o VEB</td><td>Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc.</td><td></td><td>TT/DT 25 &amp;mu;g/inyección VEB 8 &amp;mu;g/inyección</td></tr><tr><td>Inhibidor de proteasas PMSF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>Eosina para recuento de células</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-6003</td><td></td></tr><tr><td>Aloantígeno</td><td></td><td></td><td>Antígenos HLA purificados, péptidos aloinmunes sintéticos pueden utilizarse en lugar de lisados libres de células donantes</td></tr><tr><td>Tubos centrífugos estériles de 50 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-443-18</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de 10 ml y pipetador</td><td>BD Falcon</td><td>13-675-20</td><td></td></tr><tr><td>tubos seguros de 2 ml</td><td>Costar</td><td>3213</td><td></td></tr><tr><td>1000 &amp;mu;l, 100 &amp;mu;l , 10 &amp;mu;l pipetas con puntas estériles</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemocitómetro</td><td>Fisher</td><td>02-671-10</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de tamaño completo y microcentrífuga</td><td>Beckman Coulter/Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jeringas de insulina de 1/2 cc o 1 cc</td><td>Becton Dickinson</td><td>14-826-79</td><td>calibre 28</td></tr><tr><td>Vibracell sonicador</td><td>Divtech Equipment Co. Sonocs Materials Inc</td><td></td><td>sonda de 2 mm</td></tr><tr><td>Medidor de grosor con dial</td><td>Mitutoyo, Japón</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ratones SCID</td><td>Harlan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Healthcare</td><td></td><td>Anestesia inhalatoria</td></tr></tbody></table>

trans-vivo hipersensibilidad de tipo retardada ensayo para antigen reglamento específico

Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation

Respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) es una rápida en la manifestación in vivo de la respuesta inmune dependiente de células T a un antígeno extraño (Ag) que el sistema inmune del huésped ha experimentado en el pasado reciente. Reacciones de DTH a menudo se dividen en una fase de sensibilización, en referencia a la experiencia inicial antígeno, y una fase de desafío, que por lo general sigue varios días después de la sensibilización. La falta de una respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado a una recuperación Ag demostrada por pruebas cutáneas a menudo se considera como una prueba de anergia. El ensayo de DTH tradicional ha utilizado con eficacia en el diagnóstico de muchas infecciones microbianas. A pesar de compartir características inmunológicas similares, tales como la infiltración de linfocitos, edema y necrosis de los tejidos, la DTH directa no es una técnica de diagnóstico factible en pacientes trasplantados debido a la posibilidad de inyección directa que resulta en la sensibilización a los antígenos del donante y la pérdida del injerto. Para evitar este problema, el zumbidouna-a-mouse &quot;trans-vivo&quot; ensayo de DTH fue desarrollado 1,2. Esta prueba es esencialmente un ensayo de DTH de transferencia, en la que las células humanas mononucleares de sangre periférica (CMSP) y antígenos específicos se inyectaron por vía subcutánea en el pabellón auricular o pata de un ratón ingenuo e hinchazón DTH-como se mide después de 18-24 horas 3. La presentación de antígenos por las células presentadoras de antígenos humanos, tales como los macrófagos o DCS a las células T en el tejido altamente vascular ratón desencadena la cascada inflamatoria y atrae a las células inmunes de ratón resultantes en las respuestas de hinchazón. La respuesta es antígeno-específica y requiere sensibilización previa antígeno. Una respuesta DTH donante-reactiva positiva en el ensayo de Tv-DTH refleja que el paciente de trasplante ha desarrollado una disposición inmune proinflamatoria hacia aloantígenos de injerto. La característica más importante de este ensayo es que también se puede utilizar para detectar células T reguladoras, que provocan la supresión transeúnte. Supresión de un espectadorRespuesta de recuerdo DTH en la presencia de antígeno del donante es característica de los receptores de trasplante con aloinjertos aceptados 2,4-14. El seguimiento de los pacientes trasplantados de alorreactividad y regulación por Tv-DTH puede identificar un subgrupo de pacientes que podrían beneficiarse de la reducción de la inmunosupresión y sin alto riesgo de rechazo o de la función renal deteriorada. Un área prometedora es la aplicación del ensayo Tv-DTH en el monitoreo de la autoinmunidad 15,16 y también en la inmunología tumoral 17.

1. Evaluación de los receptores de trasplante renal para la respuesta específica de antígeno donante usando un ensayo Tv-DTH Para probar el donante reactivo con la inmunidad celular en los receptores de trasplante renal se inyecta PBMC de estos pacientes con antígenos del donante solo o con un antígeno de recuerdo del toxoide tetánico (TT). Como células de control positivo fueron inyectados sólo con TT. Observamos tres patrones principales de hipersensibilidad de tipo retardado en los receptore...

Se describe un ensayo de diagnóstico valiosa que potencialmente podría ser utilizado para decidir la retirada de la inmunosupresión después del trasplante sin riesgo elevado de rechazo del injerto. El ensayo utiliza los principios de la hipersensibilidad de tipo retardado y proporciona una evaluación precisa de ambos donantes respuestas inmunes efectoras y reglamentarias específicas montados por los destinatarios.

Trans-vivo hipersensibilidad de tipo retardada Ensayo para Antigen Reglamento Específico

La respuesta de hipersensibilidad retardada (HSR) es una manifestación rápida in vivo de la respuesta inmunitaria dependiente de células T ante un antígeno (Ag) extraño que el huésped...

El objetivo general de este procedimiento es utilizar el ensayo de DTH trans vivo para monitorear tanto las respuestas específicas frente a antígenos proinflamatorias como antiinflamatorias en sujetos humanos. Primero, aísle las células mononucleares de la sangre periférica a partir de la sangre periférica del sujeto humano. Luego, mezcle la preparación de PBMC con PBS.Antígeno de prueba de antígeno de recuerdo y antígeno de prueba más antígeno de recuerdo. Proceda con las mediciones previas en las almohadillas plantares e inyecte las mezclas preparadas en ratones skid. Repita las mediciones en las almohadillas plantares 24 horas después. Tres.Los patrones definitivos de respuestas de HRT pueden ser reguladoras, no reguladoras y sensibilizadas. El ensayo de hipersensibilidad retardada trans vivo puede aplicarse para determinar parámetros clínicos como las respuestas aloreactivas, en los que la fuente del antígeno son las células del donante del trasplante. La ventaja principal de esta técnica frente a los métodos in vitro existentes es que se pueden detectar fácilmente tanto las respuestas proinflamatorias como las reguladoras frente a antígenos alo, autoantígenos o antígenos tumor

trans-vivo-delayed-type-hypersensitivity-assay-for-antigen-specific

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por CCR7-efector linfocitos T de memoria. Aquí se demuestra la forma de inducir DTH activa en ratas Lewis y controlar la respuesta inflamatoria.

Inducción y seguimiento de activos de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) en ratas

Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por CCR7-T de memoria efectora (TEM) de linfocitos. Aquí se demuestra cómo activar antígenos específicos de células TEM, inducir DTH adoptivos en ratas Lewis y controlar la respuesta inflamatoria.

Inducción y Seguimiento de Adopción de hipersensibilidad retardada en ratas

Tregs son supresores potentes del sistema inmune. Hay una falta de marcadores de superficie única para definir, por lo tanto, las definiciones de células T reguladoras son principalmente funcionales. A continuación se describe un...

Humano In Vitro Supresión como herramienta de cribado para el reconocimiento de un estado inicial de desequilibrio inmunológico

El video muestra un método inmunológico para monitorear in vivo la producción de linfocitos T citotóxicos o CTL inducidos por adyuvantes. A un ratón se le inyectan previamente linfocitos T CD8+ de donantes modificados genéticamente, teñidos con colorante proliferativo. La inyección subcutánea de ovoalbúmina con adyuvantes genera linfocitos T CD8+ citotóxicos que se identifican después de la cosecha mediante inmunotinción y citometría de flujo.

Una técnica inmunológica para monitorizar la generación de linfocitos T citotóxicos mediados por adyuvantes

Presentamos aquí un método para desarrollar células T reguladoras (Tregs) específicas de antígeno funcional (Ag) a partir de células madre pluripotentes inducidas (iPSCs) para la inmunoterapia de la artritis autoinmune en un modelo murino.

Desarrollo de derivados de células madre Las células T reguladoras específicas de antígeno contra la autoinmunidad

Este documento describe un método para medir alorreactividad en una población mixta de células T usando flujo de imágenes citometría.

La medición de células T Alorreactividad recurriendo a imágenes de Citometría de Flujo

Aquí, presentamos un protocolo para inducir tolerancia en el trasplante y evaluar in vitro e in vivo la capacidad supresora de subconjuntos distintos de la célula del receptor y el estado inmune del receptor hacia el donante o los antígenos exógenos.

In Vitro e In Vivo la evaluación de la actividad supresora T, B y las células mieloides y las respuestas humorales de los receptores de trasplante

El objetivo de este protocolo es permitir la detección de en vivo matando de una célula de la blanco en un modelo murino de específica de antígeno.

En Vivo Ensayo para la detección de la función citolítica de células T específicas de antígeno utilizando un modelo de vacunación

Aquí presentamos un protocolo para el aumento in vivo de la inducción de células T reguladoras intestinales. En este protocolo, las células dendríticas están diseñadas para producir localmente altas concentraciones de la vitamina D activa (1,25-dihidroxivitamina D o 1,25[OH]2D) y la vitamina A activa (ácido retinoico o RA) de novo.

En Vivo Aumento de la Inducción de Células T Regulatorias Gut-Homing

El estudio demuestra el papel de la piel en la modulación de las respuestas inmunitarias en ratones a través de la inmunización epicutánea (EC). La inmunización de la AE con un antígeno proteico puede suprimir las respuestas inmunitarias en la hipersensibilidad de contacto o revertir la supresión inducida por la piel cuando se combina con patrones moleculares asociados a patógenos. La inmunización anticonceptiva anticonceptiva (AE) se muestra prometedora como un enfoque eficaz y sin agujas para...

Modelo murino de inmunomodulación inducida epicutáneamente

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