Determinación de la superficie celular y Expresión relativa total de canales de iones recombinante mediante citometría de flujo

El objetivo general de este método es cuantificar la expresión de proteínas de membrana en la superficie celular mediante un ensayo espaciado fluorescente. La principal ventaja de esta técnica es que los ensayos de citometría de flujo proporcionan puntos finales cuantificables en grandes volúmenes de células vivas en un solo experimento. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el diagnóstico y la terapia de las arritmias ventriculares cardíacas, ya que estas patologías a menudo se asocian con mutaciones genéticas que causan defectos en el tráfico de los canales iónicos cardíacos.

Por lo general, los individuos nuevos en este método tienen dificultades para identificar un sitio de inserción extrorsal adecuado para el epítopo que no dañe su función proteica y genere una fuerte señal fluorescente en presencia del anticuerpo conjugado. La demostración de este procedimiento estará a cargo de Benoite Bourdin, asistente de investigación de mi laboratorio. Para empezar, marque dos veces las construcciones de ADN con mCherry en el extremo C intracelular.